Ressecção de tumor cerebral em camundongo usando um sistema de ressecção minimamente invasivo

Prenda um camundongo anestesiado com um tumor implantado em uma estrutura estereotáxica.

Remova os grampos da cirurgia anterior, desinfete a pele e faça uma incisão ao longo da ferida anterior para expor o crânio.

Localize o orifício da cirurgia anterior para acessar o cérebro.

Posicione o sistema de ressecção minimamente invasivo, ou MIRS, sobre o orifício da rebarba.

O sistema consiste em uma cânula com uma janela rotativa que usa sucção para desenhar o tecido alvo e uma lâmina cilíndrica na abertura para extirpar o tecido.

Insira a cânula na região alvo e inicie a ressecção.

A sucção puxa pequenas seções do tumor pela janela, enquanto a lâmina extirpa o tecido.

A janela rotativa permite a ressecção controlada por sucção e corte contínuos.

Os fragmentos excisados viajam através de um tubo estéril para a câmara de coleta de amostras.

Retire a cânula, feche a ferida e permita que o camundongo se recupere.

Comece o experimento avaliando o mouse quanto à sedação beliscando o dedo do pé. Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento da córnea. Em seguida, coloque o mouse em um quadro estereotáxico. Remova o grampo da cirurgia anterior e desinfete a pele com ciclos alternados de um esfoliante à base de clorexidina ou betadina e álcool. Em seguida, crie uma incisão longitudinal de 1 centímetro ao longo da cicatriz cirúrgica anterior usando um bisturi estéril. Prenda a peça de mão MIRS ao braço estereotáxico através do adaptador de platina.

Para configurar a máquina MIRS, insira o conjunto de cabos de alimentação no painel traseiro no receptáculo do cabo de alimentação. Ligue ou desligue o sistema alternando entre 0 e 1. Insira uma extremidade da mangueira de nitrogênio no encaixe macho no painel traseiro do console. Gire a porca de conexão no sentido horário para apertá-la. Certifique-se de que a pressão de alimentação não exceda 100 PSIG e conecte a mangueira ao suprimento de nitrogênio.

Sele a tampa da porta de vácuo para evitar qualquer vazamento. Verifique se o botão de aspiração na frente do console está ajustado para 100, mas não há vazamento no sistema de aspiração e se a pressão de alimentação de entrada de nitrogênio está correta. Insira o conector do pedal cinza em seu receptáculo cinza até ouvir um clique. Da mesma forma, insira o conector azul da peça de mão em seu receptáculo azul. Prepare cada peça de mão aspirando fluido estéril na abertura através do tubo e da peça de mão e, em seguida, no recipiente para garantir que o interior do tubo e da peça de mão esteja lubrificado.

Selecione o modo de aspiração no painel frontal do console e inicie usando o pedal. Insira a cânula 23G MIRS no furo a uma profundidade de 2.5 milímetros. Inicie o processo de ressecção pressionando o pedal conectado à cânula. Execute ciclos completos de ressecção usando o botão de controle na peça de mão. Após o processo de ressecção, retire a cânula MIRS de calibre 23 e adicione 5 mililitros de 1x PBS para lavar a tubulação e desalojar quaisquer detritos residuais. Em seguida, feche a ferida com um grampeador e remova o mouse do quadro estereotáxico. Retorne o mouse à almofada de aquecimento para se recuperar da anestesia antes de colocá-lo de volta em sua gaiola.