$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Prenda um filhote de camundongo geneticamente modificado anestesiado em uma estrutura estereotáxica usando barras de orelha na direção oposta para evitar ferimentos.
O hipocampo do filhote reduziu os interneurônios inibitórios, levando à hiperexcitação dos neurônios excitatórios.
Mantenha a cabeça chata e cubra o filhote com gelo para prolongar a anestesia.
Desinfete o crânio e identifique a sutura lambda como ponto de referência.
Posicione a agulha de injeção nas coordenadas do hipocampo alvo.
Usando uma agulha dobrada, crie um orifício de microentrada, minimizando os danos ao crânio.
Abaixe a agulha até a profundidade alvo e injete células precursoras de interneurônios derivadas de humanos a uma taxa controlada, minimizando os danos aos tecidos.
Retraia lentamente a agulha para evitar o refluxo celular.
Remova o filhote da estrutura, aqueça-o até que o movimento seja retomado e, em seguida, devolva-o à cama na gaiola
.
As células precursoras injetadas se dispersam pelo hipocampo, amadurecem e se integram à rede neuronal. Com o tempo, eles aumentam a transmissão inibitória, o que restaura o equilíbrio excitatório-inibitório.
Posicione o filhote colocando-o na estrutura estereotáxica e usando as barras auriculares na direção oposta. Em seguida, limpe a superfície da pele usando um tecido mole embebido em etanol. Identifique lambda e defina as coordenadas como 0 no console de exibição digital do instrumento estereotáxico.
Depois de realocar a seringa Hamilton para as coordenadas desejadas, use uma agulha de insulina dobrada a 90 graus para penetrar no crânio, criando um pequeno orifício. Em seguida, traga a seringa de Hamilton para baixo até que a agulha cruze o crânio e 0 a coordenada dorsoventral.
Abaixe a agulha até que as coordenadas dorsoventrais desejadas sejam alcançadas. Retraia a agulha lentamente assim que as células-tronco forem injetadas. Termine o procedimento aquecendo o filhote com as mãos até que ele comece a se mover antes de devolvê-lo à mãe.