Injetando vetores adeno-associados recombinantes em um modelo de camundongo com atrofia muscular espinhal e bulbar

Comece com uma atrofia muscular espinhal e bulbar contida ou camundongo afetado por SBMA.

Limpe sua cauda e aqueça-a para dilatar a veia.

A SBMA é causada por um receptor de andrógeno mutado ou gene AR que produz mRNA AR mutante.

Este mRNA sintetiza proteínas tóxicas em neurônios motores que prejudicam a transmissão do sinal e resultam em fraqueza muscular.

Em seguida, pegue uma seringa contendo vírus adeno-associados recombinantes ou vetores AAV com um plasmídeo que codifica microRNA terapêutico.

Insira a agulha na veia da cauda e injete a solução.

Agora, aplique pressão para parar o sangramento e, em seguida, retorne o mouse à sua gaiola.

Uma vez em circulação, o vetor viral atinge os neurônios motores que controlam a função muscular.

O vírus entra na célula por endocitose, liberando o plasmídeo.

O plasmídeo produz microRNA maduro com sequências complementares ao mRNA AR mutante.

Esses microRNAs se ligam aos mRNAs AR, desencadeando sua degradação.

Isso inibe o acúmulo de proteínas tóxicas e ajuda a melhorar a função neuromuscular.

Divida o estoque de plasmídeo de microRNA AAV em alíquotas de 100 a 200 microlitros, contendo uma carga viral de 10 a 100 trilhões de genomas por mililitro. Em seguida, coloque uma alíquota em uma seringa e coloque uma agulha de calibre 27 a 30.

Agora, usando um limitador de mouse padrão, prenda um mouse com a cauda exposta. Em seguida, limpe a cauda com álcool 70% e coloque uma almofada quente, sob a cauda por cerca de 30 segundos para aumentar a vasodilatação. Agora, na porção distal da cauda, insira a agulha na veia da cauda com o chanfro para cima e em um ângulo raso, cerca de 15 graus.

Em seguida, injete o vírus e aguarde alguns segundos antes de remover a agulha. Depois de remover a agulha, aplique pressão moderada usando dois dedos para parar qualquer sangramento. Em seguida, devolva o animal à sua gaiola de origem.