Espectroscopia Raman anti-Stokes coerente para visualizar neurônios mielinizados no tecido cerebral de camundongos

Pegue uma fatia de cérebro de camundongo quimicamente fixada em uma placa multipoços.

O tecido contém axônios cercados por bainhas de mielina ricas em lipídios. Os corpos celulares contêm corpos de Nissl compostos de retículo endoplasmático rugoso e ribossomos.

Incubar em uma solução de permeabilização contendo uma coloração fluorescente de Nissl. A solução permeabiliza as membranas celulares, permitindo que a coloração se ligue ao RNA ribossômico dentro dos corpos de Nissl e marque os corpos celulares.

Coloque o tecido sob um microscópio confocal com um sistema de imagem coerente de espectroscopia Raman anti-Stokes, ou CARS.

Bomba sincronizada direta e feixes de laser Stokes no tecido, ajustados para excitar ligações moleculares na bainha de mielina rica em lipídios.

Introduza um feixe de laser de sonda para interagir com as ligações excitadas e produzir um sinal anti-Stokes específico para a mielina.

Um fotodetector captura o sinal para gerar uma imagem específica da mielina.

Use imagens confocais para capturar sinais dos corpos Nissl rotulados.

Sobreponha as imagens confocal e CARS para visualizar a arquitetura neuronal.

Depois de preparar os tecidos conforme descrito no manuscrito, cor