Imagem da dinâmica do cálcio em células ciliadas da linha lateral de larvas de peixe-zebra

Pegue uma larva de peixe-zebra transgênica paralisada montada em uma câmara de perfusão.

A larva expressa indicadores de cálcio localizados na membrana nas células ciliadas do neuromast, um componente do sistema da linha lateral que detecta o movimento da água.

As células ciliadas compreendem feixes capilares apicais e regiões pré-sinápticas basais, que formam sinapses com neurônios aferentes para transmitir sinais.

Sob um microscópio confocal, use baixa ampliação para posicionar uma pipeta de jato de fluido perto da larva.

Aumente a ampliação para localizar um neuromast, reposicione a pipeta perto dele e mude para a

imagem de fluorescência.

Fornece pulsos de fluido para desviar os feixes de cabelo, abrindo canais de mecanotransdução para o influxo de cátions apicais, incluindo íons de cálcio.

Indicadores fracamente fluorescentes se ligam ao cálcio, causando um aumento localizado na fluorescência.

O influxo de cátions despolariza a célula, desencadeando a entrada de cálcio através de canais dependentes de voltagem na pré-sinapse basal, onde se liga aos indicadores e aumenta a fluorescência localmente.

Visualize a dinâmica apical e basal do cálcio em tempo real.

Neste procedimento, preencha