JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:11 min • August 7th, 2025
Comece com um tubo contendo uma suspensão de exossomos, que são nanovesículas extracelulares à base de lipídios.
Adicione solução salina tamponada com fosfato ou PBS ao tubo para obter uma dispersão uniforme do exossomo.
Aspirar a solução de exossomas e filtrá-la com um filtro de membrana para remover os contaminantes residuais.
Transfira esta suspensão de exossomo filtrada para um novo tubo.
Adicione uma solução contendo dopamina, um agente neuroterapêutico, seguida de saponina, um surfactante, à suspensão do exossomo.
Incube a mistura à temperatura fisiológica para aumentar a permeabilidade da membrana exossômica.
A saponina remove seletivamente os colesterol ligados à membrana da membrana do exossomo, criando poros nas bicamadas lipídicas exossômicas.
A dopamina se difunde através desses poros para os exossomos.
Com o tempo, os lipídios na membrana exossômica se redistribuem e os poros se fecham, encapsulando a dopamina dentro dos exossomos.
Em seguida, ultracentrifugue a solução da mistura para pulverizar os exossomos carregados de dopamina.
Remova o sobrenadante contendo dopamina e saponina livres.
O pellet contendo os exossomos carregados de dopamina está pronto para estudos adicionais.
Adicione 3 mililitros de PBS à suspensão de exossomos coletada anteriormente por ultracentrifugação e esterilize a suspensão diluída por filtração usando um filtro de 0,22 mícron.
Em seguida, transfira 500 microlitros da suspensão de exossomo esterilizada para outro tubo.
Em seguida, adicione sequencialmente 500 microlitros de 0,5 miligramas por mililitro de solução de dopamina e saponina na suspensão esterilizada. Após a incubação, ultracentrifugar a suspensão.