Imagens in vivo do transporte de líquido cefalorraquidiano em um cérebro de camundongo usando macroscopia de fluorescência

Comece com um camundongo anestesiado com um crânio exposto cirurgicamente posicionado sob um macroscópio de fluorescência.

A cabeça é estabilizada usando uma placa de cabeça sobre o crânio, criando uma janela craniana.

Uma cânula contendo um marcador fluorescente é inserida na cisterna magna, ou MC, do cérebro.

O MC serve como um reservatório para o líquido cefalorraquidiano, ou LCR, que circula pelo espaço subaracnóideo ao redor do cérebro.

Usando luz visível, concentre-se no crânio.

Injete o marcador fluorescente no CM e, em seguida, mude para a imagem de fluorescência.

Ilumine usando luz de um comprimento de onda específico para excitar o traçador.

O traçador absorve essa luz e emite sinais fluorescentes.

Os traçadores fluorescentes viajam com o LCR, permitindo a visualização de seu fluxo através do espaço subaracnóideo para os espaços perivasculares ao redor das artérias cerebrais e arteríolas penetrantes

, entrando no tecido cerebral.

Capture o sinal fluorescente ao longo do tempo para visualizar o fluxo de LCR.

Coloque cuidadosamente o mouse e a bomba de infusão presa à cânula em um carrinho para transporte até o macroscópio e coloque o suporte da cabeça no palco do macroscópio. Certifique-se de que a linha da bomba de seringa para a cânula Cisterna Magna não esteja esticada e que não tenha dobras. Observe a frequência respiratória e a coloração rosada das mucosas para confirmar uma boa oxigenação.

Ligue a câmera do microscópio e o diodo emissor de luz e inicie o modo ao vivo. Ajuste a ampliação do campo de imagem para que a sutura nasofrontal na parte superior do campo e a sutura lambdoide na parte inferior possam ser visualizadas claramente. Uma vez no lugar, prenda o suporte da cabeça no estágio do macroscópio e concentre o macroscópio no crânio exposto até que o plano focal esteja localizado nos lados laterais dos ossos parietais, posteriormente às suturas coronais.

Para a infusão do traçador de LCR, ajuste a bomba de infusão para a taxa e o volume apropriados e defina o comprimento de onda de excitação e o tempo de exposição apropriados para o traçador para cada canal. Em seguida, verifique se a função de disparo no macroscópio está correta antes de iniciar simultaneamente a infusão do traçador e a imagem.