JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:18 min • August 7th, 2025
Pegue um camundongo anestesiado que foi alimentado com uma dieta contendo inibidores.
No tecido cerebral, esse inibidor elimina seletivamente as células microgliais.
Aplique uma solução de hialuronidase em ambas as narinas.
Coloque o mouse brevemente na posição supina para evitar a drenagem da solução.
A hialuronidase quebra a matriz extracelular da mucosa nasal, soltando as células e aumentando a penetração do tecido.
Administre microglia humana derivada de células-tronco pluripotentes induzidas ou suspensão de células iPSMG em uma narina.
Coloque o mouse na posição supina. Em seguida, administre a suspensão na outra narina.
Repita a administração várias vezes.
As células iPSMG penetram na mucosa nasal e seguem o caminho olfativo para chegar ao cérebro, contornando assim a barreira hematoencefálica.
Permita que o mouse se recupere.
Anestesiar o camundongo e administrar meios de transplante por via intranasal em intervalos regulares.
Os fatores de crescimento na mídia apoiam o crescimento e a sobrevivência de células iPSMG transplantadas no cérebro de camundongos.
Para preparar os camundongos para o transplante transnasal, alimente os camundongos machos com uma dieta contendo PLX por sete dias. No final do sétimo dia, tome a dieta PLX e alimente os ratos com uma dieta normal. Uma hora antes do transplante transnasal de iPSMG, administrar 2,5 microlitros de hialuronidase em PBS em cada narina duas vezes, usando uma ponta de pipeta de 10 microlitros para aumentar a permeabilidade à mucosa nasal.
Coloque os camundongos em decúbito dorsal após a aplicação da hialuronidase. Administrar 2,5 microlitros de hialuronidase 10 minutos antes do transplante transnasal de iPSMG. Aplique 2,5 microlitros de suspensão celular em uma narina do camundongo usando uma ponta de pipeta de 10 microlitros. Coloque o camundongo em decúbito dorsal por cinco minutos antes da administração da suspensão celular na outra narina.
Administrar a suspensão celular quatro vezes, aplicando um volume total de 20 microlitros por animal. 48 horas após a cessação da alimentação com PLX, repetir a administração de hialuronidase e suspensão celular nos mesmos camundongos. Para administração de citocinas, aplique 2,5 microlitros do meio de transplante em uma narina do camundongo usando uma ponta de pipeta de 10 microlitros.