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Neurociência
0 vistas • 2:47 min • August 7th, 2025
Comece com um rato implantado cirurgicamente com fibras ópticas direcionadas às sinapses entre os neurônios do núcleo geniculado medial (MGN) e a amígdala lateral (LA).
O rato é condicionado a pressionar uma alavanca para receber um narcótico através de um cateter, uma ação associada a pistas auditivas e visuais.
Durante o condicionamento repetido, os sinais auditivos viajam através do MGN e induzem a regulação positiva dos receptores de neurotransmissores nas sinapses, fortalecendo as conexões sinápticas.
O rato transduzido viralmente expressa canais iônicos sensíveis à luz nos neurônios MGN.
Forneça pulsos de baixa frequência através das fibras ópticas para abrir esses canais, um processo chamado estimulação optogenética.
O influxo catiônico resultante induz a liberação de neurotransmissores de baixa frequência.
Os neurotransmissores se ligam a receptores nos neurônios LA e induzem um influxo de cálcio de baixo nível, que induz a internalização do receptor de neurotransmissores e enfraquece as sinapses.
A transmissão sináptica enfraquecida de MGN-LA leva à diminuição da comunicação neuronal, conhecida como depressão de longo prazo (LTD), e reduz o comportamento de busca de narcóticos associado a sugestões.
Para indução optogenética de depressão de longo prazo ou LTD, conecte cabos de conexão a um diodo laser azul de 473 nanômetros por meio de uma junta rotativa suspensa acima de uma gaiola de alojamento de roedor padrão e limpa. Ligue o laser de acordo com as instruções de operação e conecte o laser a um gerador de pulsos. Ajuste as configurações para dar ao rato os 900 pulsos de luz a 2 microssegundos a 1 Hertz. Meça a saída de luz através do patch cord usando um sensor de luz e ajuste a intensidade do laser para que a saída de luz através do patch cable seja de aproximadamente 5 a 7mw.
Coloque o rato na gaiola limpa e remova as tampas contra poeira e as mangas da ponteira, expondo as ponteiras. Em seguida, conecte os patch cords bilateralmente a cada ponteira. Se configurados corretamente, os roedores serão capazes de se mover livremente ao redor da gaiola durante a estimulação optogenética. Depois de permitir que o rato explore o ambiente por três minutos, ligue o gerador de pulso para iniciar a estimulação optogenética. Após a indução da depressão a longo prazo, permita que o rato permaneça na gaiola por três minutos antes de colocá-lo de volta na gaiola de origem.