Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:33 min. • June 17th, 2025
Pegue uma lamínula revestida de polímero contendo uma cultura mista de neurônio-astrócitos na câmara de registro.
Essas células transfectadas expressam proteínas sensíveis ao cálcio nas membranas plasmática e ER, fluorescentes após a ligação do cálcio para rastrear a dinâmica do cálcio subcelular.
Adicione meios contendo íons de cálcio e cubra a câmara para evitar a evaporação.
Coloque a câmara sob um microscópio de fluorescência.
Os íons de cálcio se ligam a proteínas sensíveis ao cálcio. Após a irradiação com luz azul, as proteínas sensíveis ao cálcio na membrana externa do RE fluorescem em verde. Use esta fluorescência verde para localizar astrócitos.
Em seguida, irradie com luz verde. As proteínas sensíveis ao cálcio na membrana plasmática fluorescem em vermelho. Confirme a presença de fluorescência vermelha no mesmo astrócito exibindo fluorescência verde.
Registre imagens de lapso de tempo de proteínas sensíveis ao cálcio na membrana plasmática, seguidas pelas proteínas sensíveis ao cálcio na membrana externa do RE.
Analise as imagens para observar a atividade espontânea de cálcio específica do compartimento no astrócito selecionado.
Montar a lamínula contendo as células transfectada
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos