Induzindo lesão do nervo fibular em um camundongo para estudar a regeneração da junção neuromuscular

Coloque um camundongo anestesiado com a pata traseira raspada sob um microscópio cirúrgico.

Incise a pele da perna raspada e, em seguida, corte as camadas de tecido conjuntivo para expor os músculos subjacentes.

Usando afastadores, separe os músculos para expor o nervo fibular comum.

O nervo contém neurônios motores, cujos terminais axônicos se conectam com as fibras musculares para formar junções neuromusculares ou NMJs.

Localize a interseção do nervo com o tendão do músculo gastrocnêmio no joelho.

Segure o nervo com uma pinça e aplique pressão para induzir lesões.

Um local de lesão translúcido indica dano axonal, o que leva ao comprometimento da JNM.

Certifique-se de que a camada externa de epineuro do nervo esteja intacta para orientar a regeneração axonal.

Remova os afastadores e realinhe os músculos. Suture o local da incisão e permita que o camundongo se recupere.

Os sinais dos axônios danificados recrutam macrófagos para limpar os detritos axonais, o que suporta a regeneração axonal e o restabelecimento de NMJs.

Coloque o mouse na placa cirúrgica e confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé. Alinhe os membros dentro das restrições, com o membro posterior alvo em uma posição anatomicamente natural e a articulação do joelho ligeiramente estendida sem rotação interna ou externa.

Em seguida, transfira o animal para um microscópio cirúrgico. E ajuste a prancha até que a articulação óssea do joelho e a crista entre os músculos tibial anterior e gastrocnêmio sejam visíveis através da objetiva. Usando um bisturi e uma pinça, faça uma incisão de aproximadamente três centímetros através da pele perpendicular ao curso subjacente do nervo fibular comum. Continue a incisão através da fáscia superficial, expondo os músculos bíceps femoral e vasto lateral, seguida por uma incisão de 1 a 2 centímetros através da fáscia profunda de conexão para separar os músculos.

Em seguida, use afastadores mecânicos para recuar o músculo bíceps femoral caudalmente para revelar o nervo fibular comum. Trace o nervo proximalmente até que sua interseção com o tendão da cabeça lateral do músculo gastrocnêmio seja encontrada. Em seguida, use uma pinça fina para agarrar o nervo, alinhando as pontas paralelamente à borda lateral do tendão gastrocnêmio. E aplique pressão concentrada constante por 5 segundos para esmagar o nervo fibular comum.

Segurando a pinça perpendicular à fibra, segure o tecido com a área logo atrás da ponta da pinça. E aplique pressão firme, mas suave, para um esmagamento limpo e linear do nervo ao longo da borda do tendão.

Inspecione visualmente o nervo através do microscópio cirúrgico para confirmar um esmagamento completo do tecido. O nervo parecerá translúcido no local da lesão. Se o nervo tiver sido suficientemente danificado, remova os afastadores. E realinhe os músculos em suas posições anatômicas. Em seguida, use suturas de seda 6-0 para fechar o local da incisão com uma a três suturas simples e interrompidas e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento em uma gaiola limpa com monitoramento até que esteja totalmente recuperado.