Name: Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-13T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprenda a realizar a lesão por constrição crônica do nervo ciático em ratos para estudar dor neuropática. Este método permite medir comportamentos de dor mecânica e térmica quantitativamente.

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Os autores gostariam de agradecer a descrição original do modelo de CCI por Bennett e Xie (1988). Este trabalho foi financiado parcialmente por concessões do National Health and Medical Research Council da Austrália (ID # 568637) e do Instituto NSW para a Ciência e Investigação Médica ao GMT.

1. Constrição do nervo ciático crônica Técnicas assépticas deve ser utilizado para o procedimento cirúrgico. Desinfectar a superfície de trabalho cirúrgico com etanol a 70% e em preparar Advance Instruments estéril (por exemplo, tesouras finas, fórceps e afastador), gazes, grampos e esfregaços por autoclavagem. Para cirurgias múltiplas, limpar e instrumentos reesterilizar com etanol a 70% ou um esterilizador seco grânulo entre ratos. Uma máscara cirúrgica, gorro cabelo e luvas estéreis devem ser usadas. Para constrição do nervo, preparar a sutura intestino crómico cortando-o em pequenos pedaços de cerca de 3 cm de comprimento imersos em solução salina estéril, para evitar a secagem. Para fechar a ferida, usar comercialmente disponíveis suturas de seda estéreis. <ol><li> Anestesiar o rato em uma câmara de indução usando 5% de isoflurano em O 2, em seguida, entregar 2% de isoflurano em O 2 através de uma máscara facial feitos, e monitorar o animal anestesiado durante o procedimento. Anestésicos comuns alternativos são inalados halotano ou pentobarbital sódico intraperitoneal. A cetamina, como um antagonista do receptor N-metil-D-aspartato (NMDA), deve ser evitado uma vez que estes receptores são importantes no desenvolvimento de dor neuropática. </li><li> Raspar a pata traseira esquerda do rato. Em seguida, coloca o animal sobre uma esteira de aquecimento termo-regulada a 37 ° C e aplicar pomada oftálmica lubrificante para os olhos. </li><li> Esterilizar a área rapada com três aplicações alternadas de 70% de álcool isopropílico e uma solução de iodo. </li><li> Com o rato deitado no seu peito / tórax, elevar a perna esquerda e segure na posição com o Femor a 90 ° para a coluna usando fita adesiva no pé. </li><li> Fazer uma incisão na pele paralelamente, mas 3-4 mm abaixo da Femor, ea pele do livre a partir do músculo circundante da incisão através do corte através do tecido conjuntivo. </li><li> Com uma tesoura sem corte, cortam o tecido conjuntivo entre os glúteos superficial e os bícepsfemoris. </li><li> Utilize um afastador para alargar o fosso entre os dois músculos, permitindo a visualização clara do nervo ciático. </li><li> Usando curvas atraumáticas, fórceps e micro-tesouras, suavemente cerca de 10 mm livre do nervo ciático (proximal à trifurcação ciática) a partir do tecido conjuntivo circundante. </li><li> Sob o microscópio e uma boa fonte de luz, amarrá quatro ligaduras (crómico intestino 4,0, Ethicon, EUA) com um nó duplo, 1 mm entre si, proximal à trifurcação do nervo ciático. Para cada ligadura, comece com um único laço solto, segure as duas extremidades perto do loop e apertar até que o loop é apenas um pouco confortável ea ligadura não deslizar ao longo do nervo. Para segurar o lacete na sua posição correcta, colocar uma segunda alça no topo da primeira para completar o nó. Por fim, corte as pontas soltas da ligadura para cerca de 1mm. Constrição do nervo deve ser mínima, e imediatamente interrompido se uma contração breve é ​​observado, para evitar a prisão de the fluxo de sangue epineural. O aperto excessivo das ligaduras leva a axotomia e autotomia (auto-mutilação), ambos os indesejados efeitos colaterais que impedem teste de hipersensibilidade sucesso dor. </li><li> Use suturas (Mersilk 5,0, Ethicon) para fechar a camada muscular e grampos (Autoclip, 9 mm) para prender a pele. Em seguida, utilizar solução de iodo (Riodine) para esterilizar a ferida. </li><li> Observar o rato intimamente durante o período de recuperação da anestesia, e permitir que ele se recuperar numa gaiola separada com cama de papel plano (não o padrão da cama criação animal), a fim de impedir que o animal inconsciente asfixia. Antes de dar qualquer investigadores analgesia pós-operatória deve considerar o fato que pode interferir com o teste de hipersensibilidade à dor. De facto, há evidências de que a aplicação local de anestésico, lidocaína, no momento da lesão pode alterar o desenvolvimento de dor neuropática, e diminuir o grau de hiperalgesia nas semanas anteriores 7. Para mais discussão sobre esse mAtter ver revisão por Bennett et al 8. </li></ol> 2. Medidas de Comportamentos Dor <ol><li> Manipulação diária de ratos durante vários dias antes do início do experimento é recomendado para acostumar os animais ao seu manipulador, reduzir o estresse eo risco de morder. </li><li> Antes dos testes comportamentais, os ratos têm de ser habituados ao procedimento de teste e do invólucro animal. O ambiente de teste deve ser mantido calmo e bem controlado, com temperatura constante e os níveis de umidade e realizado em um tempo similar de dias de cada sessão de teste. </li><li> Teste de hipersensibilidade a dor deve ser realizada várias vezes antes de ICC (linha de base) e em pontos de tempo diferentes após ICC, como desejado. </li></ol> 3. Limiar de retirada mecânica <ol><li> No dia do teste, os ratos colocá-las no elevada gaiola de testes de malha floored 15-30 minutos antes de medir limiares de retirada, permitindo gaiola de exploração e Grooatividades ming para cessar e ratos para tornar-se relaxado e parado. </li><li> Usando uma dinâmica plantar von Frey aesthesiometer (Ugo Basile, Itália), a posição da unidade de contato estimulador com o filamento diretamente abaixo da superfície meados de plantar da pata traseira, evitando a malha de metal, e pressione a tecla start. Este levanta o filamento para mecanicamente estimular a superfície plantar da pata posterior do com uma força crescente. </li></ol> Cabelos de von Frey manuais são uma série de filamentos aumentando de diâmetro que são calibrados para induzir uma força específica quando aplicado à pele. Eles podem ser utilizados como uma alternativa para uma electrónica plantar von Frey dinâmica aesthesiometer para a medição de limiar de retirada da pata, como descrito anteriormente 4. Existem também vários fabricantes alternativos de von Frey eletrônico aesthesiometers (por exemplo IITC, EUA e Somedic, Suécia). <ol start="3"><li> Registre o limiar de retirada mecânica de hindpa tanto lesadas ews, em ordem contrabalanceada. Este dispositivo aplica-se pressão para a pata e após reacção de retirada o sistema automaticamente grava e exibe a força máxima aplicada (em gramas). Se uma resposta ambígua ocorre (isto é, no caso de deambulação ou preparação), repetir o estímulo e gravar o limiar de novo. Lamber ou agitação da estimulação seguinte pata é um sinal de comportamento associadas à dor. </li><li> Repita a estimulação mecânica 3 vezes com um intervalo de cerca de 5 min entre os estímulos, registrar os limiares, e depois calcular a média dos limiares de retirada da pata. </li></ol> 4. Latência Retirada térmica A intensidade de calor de infravermelhos (IR) do instrumento de teste plantar deve ser ajustado antes de iniciar a experiência. Em nosso laboratório, nós ajustar a intensidade IR para dar uma latência média de abandono pata de cerca de 10 segundos em ratos ingênuos, e vamos definir a latência de corte, 20 segundos para evitar danos tecidoidade em caso de falha para remover uma pata. <ol><li> No dia do teste, os ratos lugar no interior da gaiola de testes de vidro com piso de 15-30 minutos antes de medir a latência, permitindo a exploração gaiola e tosa actividades de cessar e ratos para se tornar relaxado e estacionários. </li><li> Usando um instrumento de analgesia térmica plantar (Ugo Basile, Itália), a posição da fonte de infravermelho diretamente abaixo da superfície meados de plantar da pata traseira, e pressione a tecla start. Isto expõe a superfície plantar da pata posterior do a um feixe de calor radiante através de uma superfície de vidro transparente. Há também fabricantes alternativos de térmicas instrumentos de analgesia plantar (por exemplo, IITC, EUA e Stoelting, EUA). </li><li> Registre a latência de retirada de patas traseiras tanto lesadas e não lesadas, em ordem contrabalanceada. Este dispositivo regista automaticamente o tempo decorrido (em segundos) a partir do início do estímulo térmico para a retirada da pata da fonte de calor. Se uma resposta ambígua ocorre (isto é, no caso de ambulação ou grooming), repita o estímulo e gravar a latência novamente. Lamber ou agitação da estimulação seguinte pata é um sinal de comportamento associadas à dor. </li><li> Repita a estimulação de calor, pelo menos, 3 vezes com um intervalo de cerca de 5 min entre estímulos, gravar as latências e, em seguida o cálculo da média das latências de retirada da pata. </li></ol> 4. Os resultados representativos Um exemplo de limiar de retirada mecânica e latência de retirada térmica nas patas ipsilateral (lesionado) e contralateral (não lesionado) de ratos Wistar é mostrado antes (linha de base) e 2-12 dias após ICC na Figura 3A, e Figura 3B. A partir destes dados pode ser visto que a CCI, provoca uma redução significativa em ambos os limiares de retirada mecânicas e as latências de retirada térmicas da pata posterior ipsilateral, indicando a presença de hipersensibilidade dor mecânica e térmica, ambas as características de dor neuropática crónica . <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Um esquemático que ilustra o posicionamento das ligaduras no modelo de ICC. Este modelo animal de dor neuropática envolve a colocação de quatro soltas crômico intestino-ligaduras sobre o nervo ciático, no meio da coxa nível. Isso resulta em ferindo apenas uma porção das fibras aferentes que vão para o hipersensibilidade dor no pé e subsequente da pata posterior. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3393/3393fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Diagrama da área pata posterior utilizado para testes de dor. A superfície meados de plantar apenas posterior para as patas, como indicado pelo círculo vermelho pontilhado, é utilizado para testes de dor. Esta área é inervada principalmente pelos ramos terminais do nervo ciático. O calcanhar e patas devem ser evitados devido à sensibilidade da pele diferencial. 3.jpg "/&gt; Figura hipersensibilidade Dor 3. Após constrição crônica do nervo ciático em ratos. Depois de ICC, há uma redução significativa no limiar de retirada da pata a estímulos mecânicos (A) e latência de retirada da pata a estímulos térmicos (B) na ferida (ipsilateral) pata posterior comparação com o não lesionado (contralateral) pata posterior (P &lt;0,01 medidas repetidas 2 -way ANOVA). Os dados mostram média ± EPM, n = 7 ratos Wistar.

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</ol>

Experimentos com animais foram aprovados pelo Animal Care e Comitê de Ética da Universidade de New South Wales, Austrália, e seguiu as orientações formuladas pela Associação Internacional para o Estudo da Dor.

CCI é amplamente utilizado modelo de lesão de nervo periférico da dor neuropática crônica. É relativamente simples de executar, e produz hipersensibilidade dor robusta e estável durante pelo menos um mês após a lesão. Após CCI, os ratos apresentam postura anormal da pata ferida (dedos unidos e plantar-flexionados e pata evertido), bem como repetidos tremores, guarda e lambendo da pata ferida sugerindo a presença de dor espontânea 9. Além disso a disfunção sensorial, vários investigadores demonstraram que evoc...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente / equipamentos </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Gut crômico </td><td> Ethicon </td><td> G-211 </td><td> Espessura 4-0 </td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> Delvet Pty. Ltd., Sete Colinas, NSW </td><td> n / a </td><td></td></tr><tr><td> Mersilk </td><td> Ethicon </td><td> W-580 </td><td> 5-0 espessura </td></tr><tr><td> Autoclip </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427631 </td><td> 9 milímetros de aço inoxidável </td></tr><tr><td> Riodine </td><td> Orion </td><td> R1000802F </td><td> 1% de iodo w / v </td></tr><tr><td> Instrumento analgesia térmica plantar </td><td> Ugo Basile </td><td> 37370 </td><td></td></tr><tr><td> Aesthesiometer plantar dinâmica </td><td> Ugo Basile </td><td> 37400 </td><td></td></tr></tbody></table>

constrição crônica do nervo ciático e teste de hipersensibilidade dor em ratos

Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats

Dor neuropática crônica, resultante de danos ao sistema nervoso central ou periférico, é uma condição prevalente e incapacitante, afetando 7-18% da população 1,2. Os sintomas incluem dor (queimação, formigamento, choque elétrico como) espontânea, disestesia, parestesia, alodinia (dor resultante de normalmente não dolorosos estímulos) e hiperalgesia (um aumento de resposta a estímulos dolorosos). Os sintomas sensoriais são co-mórbidas com deficiências comportamentais, tais como insônia e depressão. Para estudar a dor neuropática crónica vários modelos animais que imitam a lesão do nervo periférico têm sido desenvolvidos, um dos mais amplamente utilizado é Bennett e (1988) unilateral de Xie lesão do nervo ciático constrição crónica (ICC) 3 (Figura 1). Aqui apresentamos um método para executar ICC e teste de hipersensibilidade a dor. ICC é realizada sob anestesia, com o nervo ciático de um lado exposto fazendo comoincisão parentes, e cortando o tecido conjuntivo entre as superficial glúteos e bíceps femoral. Quatro ligaduras intestino crômico são amarrados frouxamente ao redor do nervo ciático em intervalos de 1 mm, apenas para ocluir, mas não deter o fluxo de sangue epineural. A ferida é fechada com suturas no músculo e grampos na pele. O animal é então permitido recuperar da cirurgia durante 24 horas antes do teste de hipersensibilidade dor começa. Para os testes comportamentais, os ratos são colocados no dispositivo de ensaio e são permitidos para habituar o procedimento de teste. A área de teste é a superfície mid-plantar da pata posterior (Figura 2), que cai dentro da distribuição do nervo ciático. Limiar de retirada mecânica é avaliado por ambas as patas traseiras mecanicamente estimulando lesadas e usando um eletrônico dinâmico plantar von Frey aesthesiometer ou manual von Frey cabelos 4. O limiar de retirada mecânica é a pressão máxima exercida(Em gramas) que desencadeia retirada da pata. Para a medição da latência de retirada térmica, primeiro descrito por Hargreaves et ai (1988), a pata posterior é exposta a um feixe de calor radiante através de uma superfície de vidro transparente com um medidor de analgesia plantar 5,6. A latência de retirada ao estímulo de calor é registrado como o tempo para retirada da pata nas duas patas traseiras lesadas e não lesadas. ICC sequência, limiar de retirada mecânica, bem como a latência de retirada térmica na pata lesada são ambos significativamente reduzido, em comparação com as medições de linha de base e da pata não lesionado (Figura 3). O modelo ICC de lesão do nervo periférico combinados com testes de hipersensibilidade à dor fornece um sistema modelo para investigar a eficácia de agentes terapêuticos potenciais para modificar a dor neuropática crônica. No nosso laboratório, nós utilizamos ICC ao lado de sensibilidade térmica e mecânica das patas traseiras para investigar o papel das interacções neuro-imunes na patogénesee tratamento da dor neuropática.

Devido à simplicidade da cirurgia e os resultados robusto comportamental, constrição crónica do nervo ciático é um dos modelos pré-eminentes animais de dor neuropática. Dentro de 24 horas após a cirurgia, hipersensibilidade à dor é estabelecido e pode ser medida quantitativamente utilizando um von Frey aesthesiometer (teste mecânico) e medidor de analgesia plantar (teste térmico).

Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

A dor neuropática crônica, resultante de danos ao sistema nervoso central ou periférico, é uma condição prevalente e debilitante, afetando de 7 a 18% de...

O objetivo geral deste procedimento é realizar uma constrição crônica, lesão do nervo ciático, um modelo comumente utilizado em roedores para dor neuropática, e medir quantitativamente os comportamentos de dor resultantes. Isso é realizado primeiramente posicionando quatro ligaduras de tripa crômica ao redor do nervo ciático exposto ao nível da região medial da coxa, para criar uma lesão por constrição no nervo ciático. Em seguida, monitoram-se os comportamentos de dor na pata traseira nos pontos temporais desejados, medindo-se quantitativamente o limiar de retirada da pata a um estímulo mecânico usando um estilete von Frey e a latência de retirada da pata a um estímulo térmico usando um analgesímetro plantar.Resultados finais podem ser obtidos demonstrando a existência de dor mecânica e térmica, bem como hipersensibilidade na pata traseira lesionada, por meio da medição das respostas evocadas de retirada a estímulos mecânicos e térmicos. Esse método de lesão do nervo periférico, inicialmente desenvolvido por Bene e Z, pode nos ajudar a responder questões fundamentais no campo da dor crônica, como quais são os mecanismos periféricos e centrais pelos quais a dor neuropática é gerada

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Poupado do Nervo modelo animal de lesão é descrita aqui como um modelo do rato da dor neuropática periférica seguintes denervação parcial do nervo ciático por a lesão do tibial e nervo peroneal comum ramos, deixando o nervo sural restante intacto. Modificação comportamental resultante da alodinia mecânica é quantificada por filamentos de von Frey.

Poupado da lesão do nervo Model (SNI) de alodinia mecânica induzida em camundongos

Descrevemos dois métodos táteis testes sensoriais para períodos agudos ou crônicos de lesão medular em ratos. Estes procedimentos validados pode detectar o desenvolvimento e manutenção da alodinia-like sensações.

Aguda e crônica teste sensorial tátil após a lesão medular em ratos

A dor neuropática é uma conseqüência de uma lesão ou doença que afeta o sistema somatossensorial. O "modelo cuff" da dor neuropática em ratos consiste na implantação de um manguito de polietileno em todo o ramo principal do nervo ciático. A alodinia mecânica é testado usando filamentos de von Frey.

O ciático Nervo cuffing Modelo de Dor Neuropática em Ratos

Fornecido aqui é um protocolo que detalha etapas para estabelecer um modelo animal da dor crônica do borne-isquemia (CPIP). Este é um modelo bem reconhecido imitando a síndrome da dor regional complexa humana tipo I. As hipersensibilidades mecânicas e térmicas são avaliadas, bem como comportamentos nocifensivos induzidos por capsaicina observados no modelo de ratazana CPIP.

Modelo crônico da dor da Borne-Isquemia para a síndrome regional complexa da dor tipo-I nos ratos

Para desenvolver novas intervenções terapêuticas para a prevenção e manejo da dor nas costas, modelos animais são necessários para examinar os mecanismos e a eficácia dessas terapias a partir de uma perspectiva translacional. O presente protocolo descreve o teste BMS, um método padronizado para avaliar a sensibilidade mecânica de retorno no rato.

Avaliação da Sensibilidade Mecânica das Costas no Rato para Investigação Mecanicista da Dor Lombar Crônica

A ligadura parcial do nervo ciático induz dor neuropática crônica de longa duração, caracterizada por respostas exageradas a estímulos térmicos e mecânicos. Este modelo murino de dor neuropática é comumente usado para estudar terapias inovadoras para o tratamento da dor. Este artigo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico para melhorar a padronização e reprodutibilidade.

Ligadura parcial do nervo ciático: um modelo murino de dor neuropática crônica para estudar o efeito antinociceptivo de novas terapias

Apresentamos um protocolo para o uso do agulhamento subcutâneo de Fu em um modelo de lesão por constrição crônica para induzir dor no nervo ciático em ratos.

Eficácia do Agulhamento Subcutâneo de Fu na Dor do Nervo Ciático: Alterações Comportamentais e Eletrofisiológicas em Modelo de Lesão por Constrição Crônica em Rato

A lesão por constrição crônica do nervo infraorbital distal em camundongos induz mudanças no comportamento espontâneo (aumento da atividade de limpeza facial) e no comportamento nocifensivo em resposta à estimulação tátil (hiperresponsividade à estimulação capilar de von Frey) que são sinais de dor contínua e alodinia e serve como modelo para a dor neuropática do trigêmeo.

Lesão por Constrição Crônica do Nervo Infraorbital Distal (DIoN-CCI) em Camundongos para Estudo da Dor Neuropática do Trigêmeo

Aqui, apresentamos um método para avaliar a ativação e o bloqueio dos axônios sensoriais nos nervos periféricos em experimentos agudos, anestesiados e in vivo com ratos, utilizando dois tipos de medições eletrofisiológicas da coluna vertebral que podem discriminar a atividade dos subtipos de fibras nervosas: Potenciais de Campo Local e registros de neurônios únicos em Faixa Dinâmica Ampla.

Métodos eletrofisiológicos para avaliar o bloqueio de dor periférica em um rato anestesiado

Nós descrevemos um procedimento passo a passo para a criação de sobrecarga de pressão e hipertrofia ventricular esquerda em ratos Wistar pela constrição da aorta ascendente com clipe metálico pequeno. Este modelo é amplamente utilizado para o estudo de alterações de remodelação durante a hipertrofia cardíaca e para identificar e avaliar estratégias para a regressão de tais mudanças.

Aorta ascendente constrição em ratos para a criação de sobrecarga de pressão Cardíaca Hipertrofia Modelo

Aprenda a realizar a lesão por constrição crônica do nervo ciático em ratos para estudar dor neuropática. Este método permite medir comportamentos de dor mecânica e térmica quantitativamente.

Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

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