Constrição crônica do nervo ciático e Teste de Hipersensibilidade dor em ratos

O objetivo geral deste procedimento é realizar constrição crônica, lesão do nervo ciático, um modelo de roedor comumente usado de dor neuropática, e medir quantitativamente os comportamentos de dor resultantes. Isso é feito colocando primeiro quatro ligaduras intestinais crômicas ao redor do nervo ciático exposto no nível médio da coxa para criar uma lesão de constrição no nervo ciático. Em seguida, monitore os comportamentos de dor na pata traseira nos pontos de tempo desejados, medindo quantitativamente o limiar de retirada da pata ao estímulo mecânico usando um von fray anthes e a latência de retirada da pata ao estímulo térmico usando um medidor de analgesia plantar.

Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram a existência de dor mecânica e térmica, hipersensibilidade da pata traseira lesionada através da medição de respostas evocadas de retraimento a estímulos mecânicos e térmicos. Este método de lesão do nervo periférico desenvolvido pela primeira vez por bene e Z pode nos ajudar a responder a questões-chave no campo da dor crônica, como quais são os mecanismos periféricos e centrais pelos quais a dor neuropática é gerada. As implicações dessa técnica se estendem à terapia da dor neuropática porque esse modelo fornece a base para examinar novas estratégias para reduzir a hipersensibilidade à dor.

Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque colocar as suturas intestinais cômicas ao redor do nervo estático e um aperto apropriado para causar lesão nervosa suficiente, mas não excessiva, é particularmente desafiador. Para iniciar este procedimento, desinfete a superfície de trabalho cirúrgico com etanol a 70% e prepare os grampos de gaze e cotonetes estéreis, que foram previamente autoclavados. Em seguida, anestesiar o rato em uma câmara de indução usando flúor 5% ISO.

Forneça flúor 2% ISO por meio de uma máscara facial personalizada durante a cirurgia. Depois disso, raspe a pata traseira esquerda do rato e coloque o animal em um tapete de aquecimento termorregulado a 37 graus Celsius. Aplique pomada oftálmica lubrificante nos olhos.

Em seguida, prepare a sutura intestinal crômica cortando-a em pequenos pedaços de cerca de três centímetros, mergulhe-os em solução salina estéril. Em seguida, esterilize a área raspada com três aplicações alternadas de álcool e solução de iodo. Com o animal deitado sobre o tórax, eleve a pata traseira esquerda e segure o fêmur a 90 graus em relação à coluna usando fita adesiva no pé.

Em seguida, faça uma incisão na pele cerca de três a quatro milímetros abaixo do fêmur. Separe a pele do músculo ao redor da incisão cortando o tecido conjuntivo. Use uma tesoura romba para cortar o tecido conjuntivo entre os músculos glúteo superficial e bíceps feminino.

Em seguida, use um afastador para ampliar a lacuna entre os dois músculos, a fim de permitir uma visualização clara do nervo ciático e, em seguida, use a pinça e a microtesoura para liberar suavemente aproximadamente 10 milímetros do nervo ciático do tecido conjuntivo circundante. Amarre a primeira ligadura proximal à trifurcação do nervo ciático para cada ligadura. Comece com um único laço solto.

Em seguida, segure as duas extremidades perto do laço e puxe até que o laço esteja apenas um pouco confortável e a ligadura não deslize ao longo do nervo. Em seguida, segure o laço em sua posição correta e coloque um segundo laço em cima do primeiro laço para completar o nó. Em seguida, corte as pontas soltas da ligadura para uma constrição redonda de um milímetro do nervo deve ser mínima.

Repita as etapas para as três ligaduras restantes amarrando cada ligadura adicional um milímetro mais proximal do que a anterior. Também com o mínimo de constrição no final da cirurgia, use suturas para fechar a camada muscular e grampos para prender a pele. Em seguida, use solução de iodo para esterilizar a ferida.

Observe o animal de perto durante o período de recuperação da anestesia e deixe-o se recuperar em uma gaiola separada com cama de papel plana. Antes de iniciar o experimento. Manuseie o animal diariamente por vários dias.

Então, antes do teste comportamental, habitue o rato no recinto. O ambiente de teste deve ser mantido silencioso e bem controlado com níveis constantes de temperatura e umidade, e cada sessão de teste deve ser realizada em um horário semelhante do dia. Para estudar o limiar de retirada mecânica no dia do teste, coloque o rato na gaiola de teste de piso de malha elevada, 15 a 30 minutos antes do experimento, usando um plantar dinâmico de von fray anter posicione a unidade estimuladora de toque com o filamento diretamente abaixo da superfície do plantador médio da pata traseira e pressione a tecla start.

Isso levanta o filamento para estimular mecanicamente a superfície da plantadeira da pata traseira com uma força crescente. Em seguida, registre o limite de retirada mecânica das patas traseiras lesionadas e não lesionadas. Este dispositivo registra e exibe automaticamente o máximo para fornecido após a reação de retirada.

Repita a estimulação mecânica três vezes com um intervalo de cerca de cinco minutos entre o teste de estímulos e as patas traseiras não lesionadas em uma ordem contrabalançada e, em seguida, calcule a média dos limiares de retirada da pata. Para estudar a latência de retirada térmica no dia do teste, coloque o rato no piso de vidro. Gaiola de teste 15 a 30 minutos antes do experimento usando um instrumento de analgesia térmica para plantadeira, posicione a fonte infravermelha diretamente abaixo da superfície intermediária da pata traseira e pressione a tecla Iniciar.

Isso expõe a superfície da plantadeira da pata traseira a um feixe de calor radiante através de uma superfície de vidro transparente. Em seguida, registre a latência de retirada das patas traseiras lesionadas e não lesionadas. Este dispositivo registra automaticamente o tempo gasto desde o início do estímulo térmico até a retirada da pata da fonte de calor.

Repita a estimulação por calor pelo menos três vezes com um intervalo de cerca de cinco minutos entre os estímulos testando as patas traseiras lesionadas e não lesionadas em uma ordem contrabalançada e, em seguida, calcule a média de retirada da pata As latências aqui mostram o limiar de retirada mecânica nas patas lesionadas e não lesionadas de ratos wistar antes e até 12 dias após a constrição crônica do nervo ciático. Há uma redução significativa no limiar de retirada da pata para estímulos mecânicos na pata traseira ipsilateral lesionada em comparação com a pata traseira contralateral não lesionada. Aqui é mostrada a latência de retirada térmica em patas lesionadas e não lesionadas antes e até 12 dias após a constrição crônica do nervo ciático.

Da mesma forma, a latência de retirada térmica é significativamente reduzida na pata traseira ipsilateral lesionada em comparação com a pata traseira contralateral não lesionada. Uma vez dominada, a cirurgia CCI pode ser realizada adequadamente em apenas 20 minutos por animal, resultando em hipersensibilidade à dor a longo prazo da pata traseira. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de amarrar frouxamente as ligaduras, pois é o auto-estrangulamento sob as ligaduras após o edema, que causa uma constrição após seu desenvolvimento.

Esta técnica de lesão do nervo periférico combinada com o teste da onda P de hipersensibilidade à dor para pesquisadores no campo da dor neuropática explorarem os mecanismos subjacentes à dor crônica devido à lesão nervosa.