Name: Detecção direta da Atividade Acetato de formação do Acetato Quinase Enzima (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Aprenda a medir diretamente a atividade da acetato quinase na formação de acetato usando espectrofotometria. Este ensaio determina parâmetros cinéticos enzimáticos baseados no consumo de acetil fosfato.

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Este trabalho foi financiado pela NSF prêmio # 0920274 e Carolina do Sul Experiment Station Project (SC-1700340) para KSS. Este artigo é Não. Contribuição Técnica 5929 da Estação Experimental de Clemson University.

O esquema geral deste protocolo é descrito na Figura 1. 1. Preparação solução para Curvas padrão e Ensaios <ol><li> Prepare 100 mL de solução 2 mol / L de hidroxilamina-HCl. Pesar 13,9 g de cloridrato de hidroxilamina (MW 69,49 g / mol) e dissolver em aproximadamente 50 mL de água destilada deionizada-(DDH 2 O). Ajustar o pH para 7,0 utilizando pellets de hidróxido de potássio ou uma solução concentrada. Reduzir o volume final de 100 mL. A solução pode ser armazenada à temperatura ambiente por até 30 dias ou a 4 ° C por até 90 dias. </li><li> Prepare 100 mL de um cloreto férrico / solução de ácido clorídrico. Pesar 13,5 g de cloreto férrico (MW 270,32 g / mol) e dissolver em aproximadamente 50 mL DDH 2 O. Adicionar 41,3 mL de ácido clorídrico concentrado (12,1 mol / L) e trazer para um volume final de 100 mL. A concentração final de cloreto férrico será de 0,5 mol / L ea concentração final de ácido clorídrico será de 5 mol/ L. A solução é armazenado em temperatura ambiente. </li><li> Prepare 100 mL de uma solução 1,84 mol / L de ácido trichoroacetic. Pesar 30,0 g de ácido tricloroacético (MW 163,39 g / mol), dissolver em DDH 2 O e trazer o volume final de 100 mL. A solução é armazenado em temperatura ambiente. </li><li> Prepare 5 mL de uma solução de fosfato 0,1 mol / L acetil. Pesar 0,092 g de fosfato de acetila (MW 184,06 g / mol), dissolver em DDH 2 O e trazer o volume final de 5 mL. Alíquota da solução para tubos de microcentrífuga (0,25 mL por tubo) e congelar a -20 ° C até o uso. Solução de descongelado deve ser colocado sobre o gelo e pode ser usado por aproximadamente 1 hora. Solução de fosfato acetil que foram descongelados não devem ser novamente congelados e reutilizados. </li><li> Prepare 5 mL de uma solução 0,1 mol / L de ADP. Pesar 0,24 g de ADP (MW 472,5 g / mol), dissolver em DDH 2 O, e trazer o volume final de 5 mL. Alíquota da solução em tubos de microcentrífuga (0,5 mL por tubo) e congelar a -20 ° C atéuso. Mantenha solução descongeladas em gelo até o uso. </li><li> Prepare 50 mL de uma solução a 1 mol / L de Tris. Pesar 6,06 g Tris (MW 121,14 g / mol), e dissolver em 40 mL DDH 2 O. Ajustar o pH da solução para 7,0 com ácido clorídrico e trazer um volume final de 50 mL. Solução de armazenamento em temperatura ambiente. </li><li> Prepare 10 mL de uma solução de cloreto de 1 mol / L de magnésio. Pesar 2,03 g de cloreto de magnésio (MW 203,31 g / mol), dissolver em DDH 2 O, e trazer um volume final de 10 mL. Guardar a solução em temperatura ambiente. </li><li> Prepare 25 mL solução de desenvolvimento através da mistura de volumes iguais da solução de ácido cloreto férrico / clorídrico e solução de ácido tricloroacético. Solução de desenvolvimento deve ser renovada diariamente e armazenados à temperatura ambiente. </li></ol> 2. Preparação de uma Curve Acetyl Phosphate Padrão <ol><li> Uma curva padrão acetil fosfato é gerado utilizando quantidades conhecidas de fosfato de acetila. Uma curva padrão de seis para dezoitopontos t é adequado. Os padrões deve variar de 0,03 a 0,9 μmoles μmoles por 300 mL, que correlaciona a concentração final de 0,1 a 3 mmol / L. Diluir a solução estoque acetil fosfato à concentrações adequadas em 100 mM Tris solução em um volume final de 300 mL. A amostra de controlo sem fosfato acetil também deve estar preparado. </li><li> Incubar cada padrão e o controle a 37 ° C em um bloco de aquecimento por 1 minuto. </li><li> Adicionar 50 mL da solução de cloridrato de hidroxilamina a cada padrão e o controle e misture agitando três vezes. Coloque o padrão em um bloco de aquecimento 60 ° C e incubar por cinco minutos. </li><li> Adicionar 100 mL de solução de desenvolvimento para os padrões eo controle, misture agitando três vezes, e permitir que a cor se desenvolva, pelo menos, um minuto à temperatura ambiente. </li><li> Centrífuga todas as normas e o controle em uma microcentrífuga a 18.000 xg por 1 minuto. </li><li> Medições com as amostras espectrofotometricamente umat 540 nm usando 1mL cubetas de plástico, usando o controle como o branco para espectrofotometria. </li><li> Gerar uma curva padrão de análise de dados apropriado e software gráficos (por exemplo, Kaleidagraph Software Synergy). Valores de R 2 de 0,99 ou superior são desejáveis. Os dados são representados como absorbância a 540 nm contra μmoles de fosfato presente acetil. </li></ol> 3. Ensaio para a atividade da quinase Acetato <ol><li> Usando as soluções descritas, prepare uma mistura de reação contendo uma concentração final de 0,1 mol / L Tris buffer, 10 mmol / L de cloreto de magnésio, 5 mmol / L ADP, fosfato e 2 mmol / L acetil. A mistura de reação 10 mL 8,2 mL exigirá DDH 2 O, 1,0 mL de solução Tris, 0,1 mL de solução de cloreto de magnésio, 0,5 mL de solução ADP, e 0,2 mL de solução de fosfato de acetila. Distribua a mistura de reacção em 300 mL alíquotas para tubos de microcentrífuga. Para a determinação de parâmetros cinéticos e otimização das concentrações de substrato, um substrato podem servariada e a outra segurava a uma concentração constante nas reações. </li><li> Pré-incubar a reação por 1 minuto a 37 ° C em um bloco de calor. </li><li> Adicionar uma quantidade desejada de enzima para a reação e devolver imediatamente o tubo para o bloco de aquecimento 37 ° C. Incluir também uma reação de controle para que não enzima é adicionado. Se várias reações são realizadas, adicione enzima para os tubos em intervalos de tempo específicos. Certifique-se de manter o controle de tempo. (NOTA: A quantidade de enzima a ser utilizada terá que ser optimizados para garantir que todos os acetil fosfato ou substrato ADP não estarão esgotados - ver secção Discussão) </li><li> Após 5 minutos, adicionar 50μl da solução de cloridrato de hidroxilamina a cada reação e no controle, misture e coloque os tubos em um bloco de aquecimento 60 ° C. Se diversas reações estão sendo realizadas, isso deve ser feito no mesmo intervalo de tempo como a enzima foi adicionada. </li><li> Incubar as reações e do controle por 5 minutos a 60 ° C. </li><li> Adicionar 100 &amp;mu; L da solução de desenvolvimento para cada reação e do controle, misture e coloque em um suporte de tubos na bancada do laboratório. Permitem que a cor se desenvolva durante pelo menos 1 minuto. </li><li> Centrifugar todos os tubos em uma microcentrífuga a 18.000 xg por 1 minuto. </li><li> Amostras medida espectrofotometricamente em 540 nm usando 1mL cubetas de plástico e determinar a quantidade de fosfato presente acetil em comparação com a curva de acetil fosfato padrão. </li><li> A quantidade de substrato fosfato de acetil esgotados pode ser determinado subtraindo-se a quantidade de fosfato acetil remanescente após a reação enzimática a partir da quantidade de fosfato de acetila presente na enzima controle faltando. Realizar a análise de dados usando dados apropriados e software gráficos (por exemplo, Kaleidagraph Software Synergy). Valores de R 2 superiores a 0,97 são desejáveis. </li></ol> 4. Resultados representativos: O objetivo deste ensaio é medir a atividade quinase de acetato na diretaion de formação de acetato. Isto é feito através da medição de consumo do substrato fosfato de acetil, como não há medição, fácil e direta para a produção de acetato. Fosfato acetil remanescentes após um determinado tempo durante a reação enzimática é convertido em acetil hidroxamato e, posteriormente, para o complexo hidroxamato férrico, que tem uma cor avermelhada (Figura 2) que pode ser medido em 540 nm. A curva padrão traçando absorbância versus μmoles presente acetil fosfato nos padrões é usado para determinar a quantidade de fosfato acetil remanescentes em cada reação. A curva padrão deve ser linear através do ponto zero. A curva representativa padrão mostrado na Figura 3 tem uma inclinação de 1,2332 unidades de absorbância por apresentar fosfato μmole acetil e um valor de R 2 de 0,99, indicando os dados ajusta a equação linear assim. A equação para o ajuste linear para os dados da curva padrão é usado para calcular a quantidade de fosfato de acetil remanescentes na reação. O μmolesde fosfato de acetil consumida é determinada como a diferença entre o μmoles de fosfato de acetila presentes na reação controle sem enzima e do μmoles de fosfato de acetil remanescente após a reação enzimática. Purificada, M. recombinante thermophila acetato quinase foi quantificada usando o protocolo descrito. Para o experimento mostrado na Figura 4, a concentração de ADP foi mantida constante em 5 mmol / L ea concentração de fosfato de acetila na reação foi variado para determinar o K m para o fosfato de acetila. Como esperado, este experimento demonstra que a enzima segue padrão de Michaelis-Menten-like cinética para cada substrato e produziu uma curva de saturação hiperbólica ao plotar atividade versus concentração de fosfato de acetila. A aparente K valor m para o fosfato de acetila foi de 0,27 ± 0,01 mmol / L, o que compara favoravelmente com a publicação de valor K m de 0,47 ± 0,01 mmol / L usando o juntamente comodigo 13. O ensaio direto também pode ser usado para medir a atividade de quinases de acetato que utilizam outros substratos de ATP, o que não é possível usando o ensaio padrão acoplado. Purificada E. recombinante acetato quinase histolytica 16, que produz PP i ao invés de ATP na direção de acetato de formação, foi submetido a este ensaio utilizando fosfato de sódio no lugar de ADP. A concentração de fosfato de sódio na reação foi mantida constante em 0,2 mol / L ea concentração de fosfato de acetil foi variado. Quanto ao M. thermophila acetato quinase, o E. histolytica acetato quinase seguido Michaelis-Menten-like cinética para o fosfato de acetila e uma curva de saturação hiperbólica foi observada (Figura 5). A aparente K valor m para o fosfato de acetila foi de 0,50 ± 0,006 mmol / L. Reeves e Guthrie 15 determinou um valor de K m de 0,06 mmol / L de fosfato para a enzima acetil nativas; como nunca, a sua enzima foi parcialmente purificada e suas ensaio envolveu quatro enzimas de acoplamento que também foram apenas parcialmente purificada. Assim, é difícil comparar diretamente esses valores. Protocolo Scheme <ol><li> Gerar uma curva padrão acetil fosfato </li><li> Enzima para diluir a concentração desejada </li><li> Preparar a reação da mistura e alíquota 300 ml para tubos de microcentrífuga </li><li> Reações Pré-incubação a 37 ° C por 1 minuto </li><li> Iniciar reações adicionando enzima em intervalos de tempo específicos </li><li> Adicionar hidroxilamina com os mesmos intervalos para parar as reações e incubar a 60 ° C por 5 minutos </li><li> Adicionar cloreto férrico / solução de ácido tricloroacético para o desenvolvimento de cor </li><li> Centrifugar a 18.000 xg tubos durante 1 minuto </li><li> Medir a absorvância a 540 nm </li><li> Determinar a quantidade de fosfato de acetil consumida por comparação com a curva padrão </li></ol>tp_upload/3474/3474fig1.jpg "/&gt; Figura 1. Scheme Protocolo <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3474/3474fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Acetyl padrões de fosfato. Concentrações crescentes de fosfato de acetila foram reagiu com hidroxilamina e cor foi desenvolvida como descrito. O controle falta de fosfato de acetila é amarelo brilhante, e as reações contendo quantidades crescentes de fosfato de acetil são sucessivamente de cor mais escura. Esta mudança de cor é medida em 540 nm. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3474/3474fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Sample curva padrão acetil fosfato. Diferentes quantidades de fosfato de acetila foram reagiu com hidroxilamina, e a solução de desenvolvimento de cor e absorbância foi medida em 540 nm. A absorvância a 540 nm contra μmoles fosfato de acetil foi plotada e um ajuste linear aos dados foi aplicado. &lt;/ P&gt; <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3474/3474fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Utilização de fosfato de acetil pela M. ATP de produção thermophila quinase acetato. Atividade enzimática foi determinada na direção da formação de acetato na presença de 5 mmol / L ADP com diferentes concentrações de fosfato de acetila. A quantidade de fosfato consumido acetil foi determinada como a diferença entre o montante inicial de fosfato de acetila na reação e da quantidade de fosfato de acetil remanescente após a reação enzimática. Os ensaios foram realizados em triplicata com barras de erro mostrada. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/3474/3474fig5.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. Utilização de fosfato de acetil pelo PP i-produzindo E. histolytica quinase acetato. Atividade enzimática na direção da formação de acetato foi determinada na presença de 0.Fosfato de sódio 2 mol / L com diferentes concentrações de fosfato de acetila. A quantidade de fosfato consumido acetil foi determinada como a diferença entre o montante inicial de fosfato de acetila na reação e da quantidade de fosfato de acetil remanescente após a reação enzimática. Os ensaios foram realizados em triplicata com barras de erro mostrada.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A detecção de fosfato de acetil neste ensaio é dependente de uma concentração suficiente de cloridrato de hidroxilamina, e da concentração e da acidez da solução de cloreto férrico. Alteração do volume de ensaio requer a reconsideração de ambos os componentes. As reações enzimáticas descritas aqui foram realizados a 37 ° C com o término hidroxilamina realizada a 60 ° C por 5 minutos. Esta temperatura mais elevada é fundamental para permitir a rápida conversão do fosfato restantes acetil para hidroxamato acetil. O moment...

<table border="1"><tr><td width="160"> Nome do reagente </td><td width="108"> Companhia </td><td width="134"> Número de catálogo </td><td width="103"> Comentários </td></tr><tr><td> Fosfato de acetila </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 01409 </td><td> Sal de lítio (97%) </td></tr><tr><td> Fosfato de sódio monobásico (desidratar) </td><td> ThermoFisher </td><td> S381 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfato de sódio dibásico (anidro) </td><td> ThermoFisher </td><td> S374 </td><td></td></tr><tr><td> Cloreto de magnésio (hexa) </td><td> ThermoFisher </td><td> M33 </td><td></td></tr><tr><td> Tris Base de Dados </td><td> ThermoFisher </td><td> B152 </td><td></td></tr><tr><td> Cloreto férrico (hexa) </td><td> ThermoFisher </td><td> I88 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido tricloroacético </td><td> ThermoFisher </td><td> A324 </td><td></td></tr><tr><td> Cloridrato de hidroxilamina </td><td> ThermoFisher </td><td> H330 </td><td></td></tr><tr><td> Adenosina 5&#39;-difosfato sal de sódio </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2754 </td><td></td></tr><tr><td> BIOMATE III Espectrofotômetro </td><td> ThermoFisher </td><td> 142982082 </td><td> Espectrofotômetro UV / Vis padrão </td></tr></table>

detecção direta da atividade acetato de formação do acetato quinase enzima

Direct Detection of the Acetate-forming Activity  of the Enzyme Acetate Kinase

Quinase acetato, um membro do acetato e-quinase Hsp70-actina açúcar superfamília de enzimas (ASKHA) 1-5, é responsável pela fosforilação reversível de acetato de acetil fosfato ATP, utilizando como substrato. Acetato de quinases são onipresentes na bactéria, encontrada em um gênero de Archaea, e também estão presentes em micróbios da Eukarya 6. O acetato quinase mais bem caracterizado é que a partir do metano produzindo archaeon Methanosarcina thermophila 14/07. Uma quinase de acetato, que só pode utilizar PP i ATP, mas não na direção do acetil-fosfato formando foi isolado de Entamoeba histolytica, o agente causador da disenteria amebiana, e até agora só foi encontrado nesta 15,16 gênero. Na direção da formação de fosfato de acetil, acetato de atividade da quinase é normalmente medido utilizando o ensaio de hidroxamato, primeiramente descrita por Lipmann17-20, um ensaio acoplado em que a conversão de ATP a ADP é acoplada a oxidação de NADH para NAD + pela enzimas piruvato quinase e lactato desidrogenase 21,22, ou um ensaio de medição de liberação de fosfato inorgânico após a reação do produto acetil fosfato com hidroxilamina 23. Atividade no lado oposto, o acetato de formação de sentido é medida pelo acoplamento formação de ATP a partir de ADP para a redução do NADP + a NADPH pela hexoquinase enzimas e glicose 6-fosfato desidrogenase 24. Aqui nós descrevemos um método para a detecção de atividade de acetato quinase na direção da formação de acetato de que não necessita de enzimas de acoplamento, mas em vez disso é baseada na determinação direta do consumo de fosfato de acetila. Após a reação enzimática, permanecendo acetil fosfato é convertido em um complexo hidroxamato férrico que pode ser medido espectrofotometricamente, como para o ensaio hidroxamato. Assim, ao contrário do stensaio acoplado andard para esta direcção, que é dependente da produção de ATP a partir de ADP, este ensaio direto podem ser utilizados para quinases acetato que produzem ATP ou PP i.

Um método para a determinação da atividade da quinase de acetato é descrito. Este ensaio utiliza uma reação direta para determinar a atividade enzimática e cinética de acetato quinase na direção de formação de acetato com diferentes aceptores fosforil. Além disso, este método pode ser utilizado para a dosagem de fosfato de acetila ou outras enzimas acetil-CoA utilizando.

Detecção direta da Atividade Acetato de formação do Acetato Quinase Enzima

A acetato quinase, membro da superfamília de enzimas acetato e açúcar quinase-Hsp70-actina (ASKHA)1-5, é responsável pela fosforilação reversível de ...

Este experimento tem como objetivo medir diretamente a atividade formadora de acetato da acetato quinase. Inicie a reação adicionando a enzima a uma mistura de reação contendo os substratos acetil fosfato e DP. Em seguida, adicione hidroxilamina hidrocloreto para converter o acetil fosfato remanescente em acetil hidroxilato.Adicione a solução reveladora para converter o acetil hidroxilato em um complexo colorido de hidroxilato férrico que pode ser medido espectrofotometricamente. Com base na quantidade de substrato de acetil fosfato consumido na reação, os resultados permitem a determinação dos parâmetros cinéticos da enzima. A vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes é que ela se baseia na medição direta do consumo de acetil fosfato, em vez do desacoplamento da produção de TP à redução de um ADP. Como este ensaio não depende da produção de TP, pode ser utilizado para um novo grupo de acetato quinases, que produzem fosfato de poder em vez de TP. Para uma curva padrão de seis a oito pontos, dilua a solução estoque de acetil fosfato em triss 100 milimolar até um volume final de amostra de 300 microlitros; inclua também uma amostra controle sem acetil fosfato. Equilibr

direct-detection-acetate-forming-activity-enzyme-acetate

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este protocolo descreve as etapas necessárias para executar ensaios de desacetilação in vitro e in vivo, a fim de estabelecer o papel das proteínas como substratos específicos de desacetilação para sirtuínas e estudar ainda mais o papel da acetilação reversível - lisina como uma modificação pós-tradução.

Desacetilação Ensaios para desvendar a interação entre Sirtuins (SIRT2) e Proteína-substratos específicos

Este trabalho apresenta um método de triagem de alto rendimento usando um sistema universal de triagem enzimática genética que pode ser teoricamente aplicado a mais de 200 enzimas. Aqui, o sistema de triagem único identifica três enzimas diferentes (lipase, celulase e fosfatase alcalina) simplesmente alterando o substrato usado (acetato de p-nitrofenila, p-nitrofenil-β-D-celobiosídeo e fenil fosfato).

Multi-enzima Triagem Usando um de alta capacidade Enzyme genética Sistema de Triagem

Descrevemos um protocolo básico para quantificar a atividade da ATPase in vitro. Este protocolo pode ser otimizado com base no nível de atividade e requisitos para uma determinada ATPase purificada.

Medindo<em&gt; In Vitro</em&gt; Actividade ATPase para enzimática Caracterização

Aqui, nós descrevemos a preparação e utilização de uma sonda com base na actividade (ARN14686, undec-10-ynyl- N - [(3 S) -2-oxoazetidin-3-il] carbamato de metilo), que permite a detecção e quantificação da forma activa da enzima pró-inflamatória N-amidase ácido -acylethanolamine (NAAA), tanto in vitro como ex vivo.

preparação e<em&gt; In Vivo</em&gt; O uso de uma sonda baseado em atividades para<em&gt; N</em&gt; Amidase Ácido -acylethanolamine

As cinases de proteínas são altamente evoluídas sinalizando enzimas e andaimes que são críticos para a transdução de sinal inter e intracelular. Nós apresentamos um protocolo para medir a atividade de quinase através do uso de adenosina trifosfato radiomarcado ([γ- 32 P] ATP), um método confiável para auxiliar na elucidação da regulação da sinalização celular.

Ensaio da Actividade da Proteína Quinase com ATP Radiomarcado

Expansão do código genético serve como uma ferramenta poderosa para estudar uma grande variedade de processos biológicos, incluindo acetilação de proteínas. Aqui vamos demonstrar um protocolo fácil de explorar esta técnica para gerar homogeneamente acetilado proteínas em locais específicos em células de Escherichia coli .

Um protocolo Facile para gerar proteínas Site-Specifically acetiladas em Escherichia Coli

O objetivo do presente protocolo é rotular, enriquecer e identificar substratos de proteína quinase CK2 de uma amostra biológica complexa como um lisado celular ou homogeneizado de tecido. Este método utiliza aspectos únicos da biologia CK2 para essa finalidade.

Identificação de substratos de quinase CK2 novela usando uma abordagem bioquímica versátil

Nós caracterizamos uma proteína nova da quinase usando aproximações bioquímicas robustas: análise ocidental do borrão com um anticorpo específico dedicado em linhas e em tecidos diferentes da pilha, interações por experimentos do coimmunoprecipitação, atividade da quinase detectada por ocidental Blot usando um anticorpo fosho-específico e por γ [32P] rotulagem ATP.

Caracterização no nível molecular usando abordagens bioquímicas robustas de uma nova proteína quinase

Apresentamos aqui um ensaio de fluorescência sensível para monitorar a atividade da apolipoproteína N-aciltransferase usando peptídeo diacilglicerilo e alquino-fosfolipídios como substratos com click-química.

Ensaio fluorométrico baseado em química de cliques para apolipoproteína N-aciltransferase da caracterização enzimática à triagem de alto rendimento

Neste trabalho, são apresentados métodos ecotoxicológicos padronizados para a avaliação de biomarcadores em espécies de anuros neotropicais. Especificamente, este artigo detalha várias metodologias em diferentes escalas de avaliação ecotoxicológica, como os níveis genético, celular-histológico, bioquímico, morfológico e individual.

Metodologias ecotoxicológicas para avaliação de biomarcadores em diferentes escalas em anuros neotropicais

Ensaios químicos rápidos e precisos para triagem de inibidores específicos são uma ferramenta importante no arsenal de desenvolvimento de fármacos. Aqui, apresentamos um ensaio químico escalável de acetil-clique para medir a inibição da atividade de acetilação do HAT1.

Um ensaio químico de acetil-clique para medir a acetilação de histona acetiltransferase 1

Aprenda a medir diretamente a atividade da acetato quinase na formação de acetato usando espectrofotometria. Este ensaio determina parâmetros cinéticos enzimáticos baseados no consumo de acetil fosfato.

Detecção direta da Atividade Acetato de formação do Acetato Quinase Enzima

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