O Teste de Suspensão da cauda
January 28th, 2012
O teste de tail-suspensão é validado como um procedimento experimental para avaliar a eficácia antidepressiva de tratamentos com drogas em camundongos. Os ratos são suspensos por suas caudas de seis minutos e escapar comportamentos relacionados são avaliados. Descrevemos os procedimentos utilizados na condução do teste de suspensão da cauda.
O teste de suspensão da cauda é um teste comportamental comum usado para prever a eficácia antidepressiva de várias manipulações experimentais. Este filme demonstra os procedimentos deste teste. O teste de suspensão da cauda é validado para o camundongo e não é recomendado para roedores maiores.
No teste de suspensão da cauda, os ratos são suspensos por suas caudas. O mouse permanece suspenso por seis minutos. Os comportamentos do sujeito são registrados durante esse período.
No final do período de teste de seis minutos, a fita é removida da cauda do sujeito. Após a conclusão do teste, as gravações visuais são transferidas para um computador ou monitor de vídeo. Para análise, um observador mede o tempo que um camundongo passa lutando durante toda a sessão de seis minutos.
Compostos com propriedades antidepressivas aumentam a quantidade de tempo que passo lutando. Isso se reflete em períodos mais curtos de imobilidade. Por exemplo, relatamos que o medicamento estabilizador do humor lítio, que é clinicamente útil como medicamento antidepressivo adjuvante, diminuiu o tempo de imobilidade no teste de suspensão da cauda.
Olá, meu nome é Sean do laboratório do Dr. Todd Gould no Departamento de Psiquiatria da Escola de Medicina da Universidade de Maryland em Baltimore. Olá, sou Chantel, do mesmo laboratório. Neste vídeo, mostraremos como realizar e pontuar o teste de suspensão traseira.
O teste de suspensão da cauda é usado para avaliar a eficácia potencial dos tratamentos antidepressivos. Então, vamos ao laboratório e mostrar como executar o experimento. Embora não seja obrigatório, usamos caixa de suspensão traseira especialmente projetada.
Para este teste. Nossa caixa de suspensão traseira é dividida em quatro compartimentos, cada um reservado para um único mouse. As divisórias impedem que os ratos se observem durante o teste.
No entanto, é possível usar uma prateleira ou outra estrutura para suspender os ratos. As dimensões da caixa de teste de suspensão da cauda são selecionadas para evitar que os ratos alcancem e segurem as bordas. Antes de iniciar o experimento, corte fragmentos de fita suficientes e marque o segmento que será usado para adesão à cauda.
Em nosso laboratório, usaremos fragmentos de fita de 17 centímetros. Dois centímetros do final deste fragmento de fita devem ser marcados e serão usados para aderir à cauda. Colocamos a cauda no meio dessa porção de dois centímetros.
Posicione a caixa de teste da suspensão traseira e a câmera de vídeo. Antes de introduzir os animais, a caixa deve ser cuidadosamente limpa com uma solução esterilizante para neutralizar os odores deixados pelos sujeitos anteriores. Em nosso laboratório, usamos duas caixas de suspensão traseira diferentes, idênticas em todos os aspectos, exceto na cor.
Para camundongos albinos, uma caixa cinza escura oferece bom contraste para gravações de vídeo. Para cepas de camundongos de cores mais escuras, uma caixa branca é apropriada. Inicie a máquina de ruído branco.
Deve mascarar quaisquer sons intermitentes. Traga os ratos para a sala de procedimentos para se aclimatar. As condições da sala devem ser mantidas constantes e livres de ruídos, mudanças nos níveis de luz e outras possíveis interrupções.
Este período é geralmente de pelo menos uma hora. Uma vez terminado o período de aclimatação, o teste pode prosseguir para evitar que certas cepas de camundongos subam em suas caudas. Durante o teste de suspensão traseira, usamos cilindros de plástico que colocamos sobre as caudas.
Esses cilindros repousam na base de sua cauda durante o teste. Em nosso laboratório, usamos cilindros de plástico com quatro centímetros de comprimento, um centímetro de diâmetro e pesando 1,5 gramas. Se cilindros de plástico estiverem sendo usados para evitar a escalada, eles devem ser colocados nas caudas antes de aplicar a fita.
Aplicamos fita adesiva no final da cauda com dois a três milímetros da cauda permanecendo fora da fita. Cole a fita nas caudas dos ratos em sua gaiola doméstica. Use a extremidade marcada da fita e certifique-se de que a fita grude na cauda e de volta sobre si mesma.
Depois que a fita for aplicada, prenda cada rato nas paredes da gaiola para evitar o emaranhamento da fita presa a diferentes animais. Conclua esse processo rapidamente. Caso contrário, os ratos serão submetidos a estresse desnecessário.
O registo deve ser iniciado antes de os animais serem suspensos. Suspenda os animais colocando a extremidade livre da fita na barra de suspensão em uma ordem que seja contrabalançada entre os grupos de tratamento e de forma que não obstrua a visão da câmera. Como os camundongos são suspensos um a um, cada animal tem um horário de início ligeiramente diferente para o teste.
Certifique-se de começar a marcar cada mouse exatamente no início de seu período de suspensão. Não obstruir a visão da câmera é importante. Como toda a sessão de suspensão da cauda será marcada como obstrução, a visão da câmera pode levar à falta de dados.
Certifique-se de que todas as extremidades da fita estejam perpendiculares à barra de suspensão com o mesmo comprimento de folga. Para cada assunto, inicie o cronômetro. O teste de suspensão da cauda é de seis minutos.
Decorrido o período de teste de seis minutos, remova a fita da extremidade de cada cauda e devolva os ratos à gaiola de origem. No final do teste, as informações do sujeito devem ser gravadas em vídeo. Depois que os camundongos são devolvidos à sala da colônia, a caixa de teste deve ser completamente limpa e limpa com uma solução de esterilização.
Agora que terminamos o teste, discutiremos a pontuação dos comportamentos. A única variável que normalmente é avaliada ao pontuar o teste de suspensão da cauda é o tempo que os animais ficam imóveis Para obter o tempo de imobilidade, mediremos o tempo que os camundongos são móveis e deduziremos isso do tempo de teste de seis minutos. Estaremos marcando todos os seis minutos do teste.
Primeiro, cobrimos os camundongos que não estão sendo avaliados para permitir que o observador se concentre em um animal apenas para cada tempo gasto no camundongo. O celular é medido por um cronômetro na tela controlado por um dispositivo gamepad. Aqui, como você pode ver, existem dois cronômetros separados na tela que são controlados simultaneamente.
O primeiro cronômetro faz a contagem regressiva de 360 segundos e indica a duração do teste ao observador. O segundo cronômetro mede o tempo que os sujeitos permanecem móveis. Como você pode notar, o segundo cronômetro é coberto pelo primeiro cronômetro e apenas seus decimais de milissegundos são visíveis para o observador.
Desta forma, o observador poderá ver se o cronômetro está contando, mas não poderá ver o tempo total de mobilidade até que a pontuação seja concluída. Fazemos isso para evitar que o viés do observador afete os resultados. Os ratos, especialmente no início da sessão, manifestam comportamentos relacionados à fuga.
Esses comportamentos incluem tentar alcançar as paredes do aparelho e a barra de suspensão, fortes tremores do corpo e movimentos dos membros semelhantes à corrida. Esses movimentos constituem claramente mobilidade. No entanto, à medida que o teste avança, os movimentos se tornam mais sutis.
Em nosso laboratório, não contamos os pequenos movimentos que estão confinados às patas dianteiras, mas sem nenhum movimento das patas traseiras como mobilidade. Além disso, oscilações semelhantes a pêndulos que são devidas ao ganho de impulso durante as crises de mobilidade anteriores não são consideradas mobilidade. Agora vamos ver a pontuação de uma sessão de teste de suspensão de cauda real.
O tempo de imobilidade, não o tempo de mobilidade, é geralmente relatado. O tempo de imobilidade pode ser calculado subtraindo o tempo total de mobilidade do tempo de teste de 360 segundos. Marcar. O teste de suspensão da cauda requer treinamento e prática.
É importante estabelecer um padrão interno de laboratório e treinar novos observadores até que atinjam um alto nível de confiabilidade. Neste artigo, explicamos como realizar e pontuar o teste de suspensão da cauda. Boa sorte com seus experimentos futuros.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Visão geral
O teste de suspensão da cauda é um procedimento comportamental validado usado para avaliar a eficácia antidepressiva de tratamentos medicamentosos em camundongos. Durante este teste, os camundongos são suspensos por suas caudas por seis minutos, e seus comportamentos relacionados à fuga são registrados.
Componentes principais do estudo
Área da ciência
- Neurociência comportamental
- Psicofarmacologia
- Modelos animais de depressão
Fundo
- O teste de suspensão da cauda é amplamente utilizado na pesquisa para avaliar os efeitos antidepressivos.
- Este teste é especificamente validado para uso em camundongos e não é adequado para roedores maiores.
- Fornece insights sobre a eficácia de várias manipulações experimentais.
- Observações comportamentais durante o teste podem indicar o nível de desespero ou disposição para escapar.
Objetivo do estudo
- Demonstrar os procedimentos do teste de suspensão da cauda.
- Validar o teste como uma medida confiável de eficácia antidepressiva.
- Fornecer um método padronizado para avaliar respostas comportamentais em camundongos.
Métodos utilizados
- Os camundongos são suspensos por suas caudas por uma duração de seis minutos.
- Respostas comportamentais são registradas e analisadas durante o período de suspensão.
- O teste avalia comportamentos relacionados à fuga indicativos de níveis de humor e ansiedade.
- Procedimentos padronizados são seguidos para garantir consistência e confiabilidade.
Principais resultados
- Dados comportamentais coletados durante o teste podem ser correlacionados com resultados de tratamento antidepressivo.
- O teste efetivamente diferencia entre os efeitos de vários medicamentos no humor.
- Os resultados contribuem para a compreensão da depressão e eficácia do tratamento em modelos animais.
- Resultados padronizados podem auxiliar no desenvolvimento de novas terapias antidepressivas.
Conclusões
- O teste de suspensão da cauda é uma ferramenta valiosa para avaliar a eficácia antidepressiva em camundongos.
- Fornece um método confiável para os pesquisadores avaliarem respostas comportamentais aos tratamentos.
- O uso contínuo deste teste pode melhorar a compreensão da depressão e seus tratamentos farmacológicos.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
The tail suspension test provides a standardized behavioral readout for evaluating antidepressant-like activity in preclinical models, supporting early-stage target validation and mechanistic de-risking of CNS-active compounds. By quantifying escape-oriented behaviors as a proxy for behavioral despair, the assay enables high-throughput screening of prospective therapeutics with predictive confidence in mood disorder indications. This assay informs go/no-go decisions in discovery pipelines by linking pharmacological modulation to quantifiable behavioral outputs relevant to antidepressant efficacy.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Interrogates therapeutic hypotheses related to monoaminergic and glutamatergic pathways implicated in mood regulation.
- Operational Value: Enables functional validation of targets through dose-responsive changes in immobility time, reducing false positives in target engagement.
- Predictive Value: Supports portfolio triage by identifying compounds with sustained effects on behavioral despair across multiple chemotypes.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Delivers quantitative, time-based immobility metrics suitable for automation and plate-based screening formats.
- Reproducibility: Standardized suspension duration and scoring protocols minimize inter-observer variability when internal reliability thresholds are met.
- Scalability: Compatible with multi-compartment testing boxes and video tracking systems for parallel evaluation of compound libraries.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Models behavioral despair constructs with construct validity to human depression symptomatology, supporting translational biomarker alignment.
- Preclinical Continuity: Bridges target validation to efficacy testing in chronic stress models by providing an early-phase behavioral screen.
- Risk-Adjusted Advancement: Enables go/no-go decisions based on statistically significant reductions in immobility versus vehicle controls, de-risking later-stage investment.
Pipeline & Workflow Integration
The tail suspension test fits within the discovery continuum from target hypothesis testing through lead identification to preclinical efficacy assessment, particularly for CNS depression indications where behavioral despair is a measurable endpoint.
- Discovery Biology: Tests mechanistic hypotheses by measuring behavioral responses to pharmacological or genetic manipulations of mood-regulating circuits.
- Screening: Provides assay-ready output (immobility time) that enables comparison across treatment groups in dose-response studies.
- Analytics: Generates continuous, quantifiable data (seconds of immobility) suitable for statistical comparison and effect size calculation.
- Translational Research: Aligns with FDA guidance on animal models for psychiatric disorders by assessing core symptomatology domains relevant to clinical endpoints.
- Enterprise Reuse: Establishes a transferable behavioral platform applicable across indication areas involving motivation, reward, and affective processing.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target validation by linking molecular modulation to ethologically relevant behavioral outputs.
- Operational Value: Enhances reproducibility through standardized training protocols and scorer reliability benchmarks.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early elimination of compounds lacking behavioral efficacy.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by identifying compounds with dose-dependent and reproducible effects on behavioral despair.
Implementation Considerations
- Requires behavioral neuroscience expertise in rodent handling and ethogram interpretation to ensure accurate scoring of mobility versus immobility.
- Depends on video recording infrastructure and controlled environmental conditions (light, sound, odor) to minimize confounding variables.
- Necessitates cross-team standardization of scoring criteria and inter-rater reliability testing before deployment in screening campaigns.
- Involves adaptation considerations for mouse strain-specific behaviors (e.g., tail climbing in C57BL/6) requiring mechanical interventions such as tail cylinders.
- Limited to mice due to apparatus size and behavioral validity; not scalable to rats or non-rodent species without significant redesign.
