Testes clínicos e Remoção da Medula Espinhal em um modelo do rato para a Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA)

Um modelo do rato para a esclerose lateral amiotrófica (ELA) é examinado clinicamente e comportamentalmente. Como um pré-requisito para uma análise imuno acompanha a preparação da medula espinal é descrito em detalhe.

Olá, meu nome é Lar Turner. Sou pós-doutorando no Departamento de Neurologia da Universidade de Ingham, Alemanha. Olá, meu nome é Lin Gunda.

Sou estudante de medicina e estou fazendo meu trabalho de tese neste laboratório. Hoje vamos mostrar a vocês os testes clínicos do SODG 93, um modelo de Moss de esclerose lateral atrófica. Além disso, demonstraremos o teste de função motora com o chamado teste de rotor e, adicionalmente, outro teste de função motora com a empunhadura de arame suspensa para realizar uma análise imunológica.

Após o teste funcional dos camundongos as, um procedimento necessário consiste na remoção da medula espinhal, do nervo STIC e do músculo gastronômico. Queremos mostrar esses procedimentos cirúrgicos em detalhes e apresentar alguns achados imunológicos exemplares no final. Ok, mas agora vamos começar com os testes clínicos.

Este é um MOE do tipo selvagem em movimento livre que não apresenta nenhum sintoma clínico como tremor muscular ou parse em nosso sistema de classificação clínica. Isso seria o ponto quatro. Este é um moe transgênico A LS.

Em um estágio inicial da doença, exibe um tremor severo do membro direito da cabeça que o classifica como ESCORE três E.As anormalidades graves da marcha Classifique este animal como escore dois. O arrasto de pelo menos um membro posterior é classificado como escore clínico um no teste do fio pendurado, a força bruta das costelas musculares é avaliada. Cada mouse é colocado em um fio CustomMade e cuidadosamente virado de cabeça para baixo acima do botão coberto de canudo.

Após o treinamento por três vezes consecutivas de pelo menos 180 segundos, a latência para quedas foi medida. Cada mouse tem até três tentativas de segurar a tampa invertida por no máximo 180 segundos, e o período mais longo é registrado em comparação com o mouse do tipo fio branco no lado direito. O camundongo transgênico de placa à esquerda é muito fraco e cai da tampa antes de atingir o máximo.

O aparelho de haste do rotor é usado para medir a coordenação motora, o equilíbrio e a capacidade de aprendizado motor. Um bom desempenho requer um alto decreto de coordenação sensório-motora. Consiste em um fuso rotativo controlado por computador, acionado por motor, e cinco pistas para cinco m.

As falhas dos ratos são detectadas automaticamente por pressão na placa de plástico inferior. Após o treinamento por três vezes consecutivas de pelo menos 180 segundos a uma velocidade constante de 15 rodadas por minuto, o tempo pelo qual um animal pode permanecer na podridão rotativa é medido. Cada animal passa por três tentativas e a maior latência sem queda é registrada.

O mos do tipo selvagem saudável no lado esquerdo está funcionando sem dificuldade na haste do rotor. Em contraste, o transgênico a s mo no lado direito tem sérios problemas para permanecer na haste do rotor e escorrega depois de um tempo observado por trás. Você vê as graves dificuldades de corrida do mouse retre esquerdo.

Em comparação com o mouse de torneira de arame saudável, ele não é capaz de acompanhar a velocidade da haste do rotor e não pode empurrar para cima com os membros HIN. Para realizar uma análise imunoquímica da medula espinhal, os animais devem ser sacrificados. É muito importante sempre seguir rigorosamente as diretrizes locais para a condução adequada de experimentos com animais.

Neste contexto, Neste Visão geral muito simplificada da coluna vertebral e seus tecidos circundantes, as principais estruturas anatômicas são representadas. Vamos colocar o animal em seu lado ventral e começar a preparar os músculos da bolsa dorsal. Após a remoção do tecido muscular, acessaremos a coluna vertebral que envolve a medula espinhal.

Depois que o animal foi sacrificado e perfundido com uma solução contendo altura paraforma, a medula espinhal pode ser removida. O animal é colocado em uma mesa de operação e os membros inteiros são fixados nas laterais e para expor a parte traseira do rato. O animal é umedecido para achatar a pelagem e facilitar a incisão cutânea seguinte.

Para isso, é utilizado um bisturi afiado. Tenha o cuidado de esticar a pele para ambos os lados. Para facilitar o corte, o músculo da perna deve ser preparado.

Sua pele também deve ser incisada. Depois que a incisão na pele é concluída, ela é gentilmente puxada para o lado. Com uma pinça tendo removido os músculos da perna e o nervo ciático, continuamos a nos aproximar da medula espinhal e colocamos o animal em uma nova mesa de operação.

Agora é fácil identificar o crânio, pescoço, músculos e coluna vertebral. Tendo identificado todas essas estruturas, é fácil prosseguir para a próxima etapa. Os músculos do pescoço e o ligamento nu devem ser removidos.

Tenha cuidado para não incisar muito profundamente e conduzir a coluna vertebral. Na próxima etapa, os músculos paravertebrais são removidos inteiramente para expor a coluna vertebral. Para acessar a coluna vertebral, várias ectomias devem ser feitas.

Partimos da parte cervical da coluna vertebral, incluindo a articulação occipital atlântica. Para realizar a laminectomia, temos que cortar o arco vertebral para poder remover todos os processos vertebrais do corpo vertebral. Como explicado antes da laminectomia, comece com o corte dos arcos vertebrais.

Então o laina pode ser puxado. Novamente, tome cuidado para não lesionar a medula espinhal, pois muitos mais ral precisam ser removidos. É muito útil usar tesouras angulares e inci vários arcos vertebrais de ambos os lados ao mesmo tempo.

Em seguida, puxe os processos dorsais para remover completamente a lamina vertebral e o close-up. Você vê que a tesoura deve ser cuidadosamente inserida mais lateralmente ao lado do canal espinhal. As partes laterais restantes da coluna vertebral devem ser removidas para facilitar a remoção completa posterior da medula espinhal.

Um marco anatômico da medula espinhal são as chamadas esencia cervical e lombar. Tendo terminado as ectomias de toda a medula espinhal, certifique-se de que você também transecciona todas as raízes ventrais da medula espinhal e libere-a da matéria das meninges. Em seguida, a medula espinhal cervical é cortada.

Cranialmente e sua remoção é iniciada novamente. Toque a medula espinhal com muita cautela para não danificar esse tecido, pois isso pode causar graves limitações para posterior análise imunoimunoquímica. A remoção da medula espinhal é continuada no nível torácico e prosseguida para a parte lombar.

É Finalmente cortado novamente desta vez ao lado do cordão equino. Agora somos capazes de liberá-lo completamente. Aqui você vê a medula espinhal colocada ao lado de sua localização original na coluna RAL.

Em última análise, ele é colocado em uma solução de fixação de postes Paraform Hyde. Como um exemplo clássico para análise imuno-histoquímica da medula espinhal, você pode aplicar um anticorpo que reconhece colina, acetiltransferase para identificar neurônios motores no corno anterior da medula espinhal. Aqui você vê um grande número de neurônios motores em um animal saudável do tipo selvagem.

Em contraste, o animal transgênico um LS no estágio final exibe um número muito menor de neurônios motores no corno anterior. Assistindo a este artigo em vídeo, você deve ter aprendido o exame clínico básico do SODG 93. Um modelo de camundongo de esclerose lateral atrófica.

Dois testes comportamentais motores foram demonstrados: o teste do rotor e o teste do fio suspenso. Eles fornecem uma boa possibilidade de avaliar a função motora básica. São fáceis de executar, sensíveis na detecção de déficit motor e eficientes em termos de tempo.

A parte principal deste vídeo consiste em uma demonstração da técnica de preparação da medula espinhal. É claro que isso pode ser aplicado a qualquer outro modelo de doença de camundongo e é uma etapa essencial para a análise imunoquímica posterior da patologia da doença na medula espinhal. Obrigado por assistir.

Esperamos que este artigo em vídeo seja útil para seus experimentos futuros.