Name: Imagem Glioma Iniciação Em Vivo Através de um polido e reforçado Janela crânio-Thin craniana (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Aprenda a visualizar a iniciação de glioma em células de glioblastoma injetadas em camundongos usando uma janela craniana fina polida e reforçada. Este método permite imagens longitudinais in vivo por microscopia de dois fótons.

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Este trabalho é apoiado pelo Laboratório Jackson Câncer Piloto Centro Grant e The Maine Cancer Foundation.

1. Protocolo <ol><li> Anestesiar o rato com cetamina e xilazina na dose de 0,1 mg de cetamina e 0,01 mg de xilazina por 1 g de peso corporal. Carprofeno (0,005 mg por 1 g de peso corporal) é utilizado para a analgesia e é administrado antes da cirurgia. </li><li> Todos os instrumentos cirúrgicos, incluindo a broca dental, são esterilizados a vapor em autoclave. Se cirurgias de lote devem ser realizados, as pontas dos instrumentos cirúrgicos devem ser re-esterilizado com uma esfera de vidro esterilizador (Fine Ciência Ferramentas FST 250) antes de cada cirurgia subsequente. </li><li> Uma vez que o rato atingiu um plano cirúrgico de anestesia, avaliada pela ausência de uma resposta a uma pitada dedo do pé, que é colocado sobre uma almofada de algodão, que é então colocado sobre uma almofada de aquecimento para manter a temperatura do corpo de ~ 37 ° C. A profundidade da anestesia é frequentemente monitorizado durante a cirurgia. </li><li> Pele é removida da cabeça do dorso, em uma área de aproximadamente triangular ~ 3 milímetros caudal para as narinas e estendendo-se caudalmente para as cervical vértebras. Pomada oftálmica é aplicada para os olhos para protegê-los de desidratação e irritação. </li><li> O rato é colocado na recumbancy ventral e a pele é desinfectada com iodo cirúrgico, etanol a 70%, e compressas estéreis. A 0,8 x 1,0 cm aba de pele que cobre a região dorsal dos ossos frontal e parietal do crânio é removida usando tesoura fina. </li><li> Um analgésico tópico, lidocaína a 0,5%, é aplicado localmente ao periósteo e os tecidos expostos na periferia da ferida. O periósteo é removida por raspagem suave do crânio com uma lâmina de bisturi, o que irá ajudar a cola de cianoacrilato para aderir ao osso. </li><li> A área cortical de interesse é delineada no crânio com um marcador. A área de interesse não deve ser localizado por cima das linhas de sutura do crânio, a fim de evitar danos para os grandes vasos subjacentes. </li><li> Uma fina camada de adesivo de cianoacrilato é aplicado às margens da ferida, para impedir a infiltração de fluido serosanguinolento, e ao crânio, excepto ema área de interesse. </li><li> Activado pela luz cimento dentário é utilizado no protocolo para a selagem do crânio. Antes da aplicação do cimento dental, tudo crânio exposta à excepção da área destinada ao desbaste é tratado com os iniciadores e subsequentemente com o agente de ligação do kit de cimento activado pela luz dental. Uma vez que o agente de ligação é seco, o cimento dental activado pela luz é aplicado para cobrir o crânio. Para estabilizar a cabeça do rato para cirurgia posterior e de imagem, uma porca hexagonal de estéril # 00-90 está incorporado no cimento dentário a uma distância da área a ser diluído. O uso da luz ativado cimento dental permite-nos preparar o crânio, sem ter que se apressar para terminar todo o procedimento. Uma vez que a preparação do cimento dental no crânio é completada, o cimento dentário é curado com luz visível. </li><li> Após o cimento dentário é curado, um suporte do dispositivo de capacete estereotáxica é montada na porca hexagonal na cabeça do rato utilizando um parafuso # 00-90. </li><li> A drop da temperatura ambiente, 0,9% de solução salina estéril é aplicada à área do crânio para ser diluído. Com o auxílio de um estereomicroscópio, uma broca de alta velocidade de micro-é utilizado para diluir uma área circular do crânio (tipicamente 4-5 mm ~ de diâmetro) através da região de interesse. Perfuração e a aplicação de uma solução salina para a área perfurada são realizados de forma intermitente durante o procedimento de desbaste para evitar lesão térmica do tecido cerebral subjacente. Salina absorve o calor e também ajuda a amaciar o osso. </li><li> O crânio do rato compreende duas camadas finas de osso compacto, imprensando uma espessa camada de osso esponjoso. A camada externa de osso compacto e a maior parte do osso esponjoso são removidos com um berbequim. </li><li> Depois de a maior parte do osso esponjoso é removida, as cavidades remanescentes dentro do osso esponjoso pode ser vista sob um microscópio de dissecação, o que indica que se aproxima a perfuração da camada interna do osso compacto. Nesta fase, a espessura crânio deve ainda ser mais do que 50 um. Crânio de desbaste deve sercontinuou com cuidado para se obter uma preparação muito fina (~ 20 mm) e liso. </li><li> Uma vez que a espessura desejada do crânio é atingida (~ 20 mm), o crânio é primeiramente polida usando um chicote de silicone feito por medida com pasta de diamante (6-15 mm) para cerca de 10 min. O polimento de diamantes colar serve a dois propósitos. Primeiro, ele ainda dilui o crânio, sem a aplicação de pressão sobre o crânio diluído, evitando danos acidentais no tecido cerebral subjacente. Em segundo lugar, serve como um passo inicial para o polimento do crânio diluído antes do óxido de estanho de grão fino é utilizado para o polimento crânio adicional. </li><li> Seguindo o polimento pasta de diamante, o crânio diluído é polido com óxido de estanho por aproximadamente 10 min. Uma vez que o crânio é polido, o óxido de estanho é lavada com solução salina fora do crânio até diluído aparece limpo. </li><li> Neste passo, se a janela craniana é para ser utilizado para imagem in vivo longitudinal, a área limpa crânio fino é seco. Uma pequena gota de claracola de cianoacrilato é aplicado a vedar a janela craniana. A camada de cola de cianoacrilato entre o crânio e diluído a lamela deverá ser tão fino quanto possível. </li><li> Se uma injecção está a ser realizado após a criação de uma janela craniana portos, neste passo, uma agulha de seringa de calibre 26 é usado para criar uma pequena abertura de um lado da janela do crânio fino polido. Esta abertura é utilizada para a injecção das células de GBM. </li><li> Uma pipeta de vidro esterilizada com uma ponta de abertura de cerca de 50 um de diâmetro, é puxada através de um extractor de pipeta. Esta pipeta será usado para a injecção de células de GBM, e é carregado em um micromanipulador. A pipeta é carregado com um ângulo de 30 graus de modo que o local da injecção das células será GBM para longe do local de imagem final. A ponta da pipeta é removida sob um microscópio de dissecação. A suspensão de células de GBM é concentrada na fase inicial para a pipeta por sucção através de uma bomba de seringa. </li><li> Uma vez que a pipeta de injeção é carregado com células GBM, o mouse é movido para trás em pomicroscópio e. A pipeta de injecção é reduzida para a pequena abertura na janela craniana e, finalmente, inserido no cérebro através da abertura usando um micromanipulador. 1 ul de uma suspensão de células de GBM é injectado no cérebro 100-200 ^ M a partir da superfície do cérebro (velocidade: 0,1 ul / min, a duração: 10 min). </li><li> O crânio é seco, uma pequena gota de cola de cianoacrilato claro é aplicado ao crânio seco, e uma peça de 3 mm de tamanho # 1 lamela é aderida à superfície do crânio fino e polido. O espaço entre as lamelas e cimento dental adjacente é selada com cola de cianoacrilato. </li><li> Após a cirurgia, o rato é injectado subcutaneamente com 1 ml de solução salina estéril quente e provido de calor suplementar para manter a temperatura corporal até totalmente recuperado da anestesia. </li><li> Para imagiologia, os ratos são anestesiados com cetamina e xilazina na dose de 0,1 mg de cetamina e 0,01 mg de xilazina por 1 g de peso corporal. Ratos são imobilizadas utilizando uma moldura estereotáxica personalizadosob o microscópio. Se repetitivo imagem in vivo é realizada em base diária, isofluorano vai ser uma opção melhor, como os ratos mostram sinais de dependência com o uso repetitivo da cetamina. </li></ol> 2. Resultados representativos Um sucesso portos cirurgia craniana janela permite que a janela craniana permanecer claro durante semanas a meses. Figura 1 mostra a vasculatura debaixo de uma janela Portas craniana como visualizado utilizando luz retroespalhados. Estas imagens vasculatura foram usados ​​como pontos de referência para localizar as mesmas áreas do cérebro para imagens repetitivo. Para visualizar tanto as células endoteliais e células vasculatura GBM, atravessamos a B6.Cg-Tg (Tek-CRE) 1Ywa / J mouse, que rotula células endoteliais vasculares com o B6.Cg-Gt (ROSA) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato ) HZE / J rato e ratos gerados com células endoteliais vasculares relacionados com a tdTomato proteína fluorescente vermelha. Em seguida, realizou o procedimento de craniotomia portas nestes milhasce, e injectado GFP marcadas com células de GBM em seus cérebros através de uma pequena abertura no lado de uma janela craniana. Procedeu-se então in vivo de dois fotões imaging longitudinalmente sobre os ratos injectados. O comprimento de onda de excitação de laser foi de 910 nm, o que resultou na excitação de GFP e tdTomato ambos. Dois fótons de imagem foi realizada num construído sob encomenda de dois fotões microscópio de varredura a laser com dois detectores para a capacidade de detecção simultânea verde / vermelho de fluorescência. Figura 2 mostra um exemplo em vivo de iniciação a partir de células de glioma de GBM injetados perto da vasculatura. A janela Portas craniana também é uma excelente opção para crônica lapso de tempo em imagem in vivo. Figura 3 mostra coloração GFAP de seções corticais de um mouse sem cirurgia portas, um rato 7 dias após a cirurgia portos, e um rato 7 dias após a cirurgia portos e injecção de solução salina. É evidente a partir das imagens que o mouse sem cirurgia e do rato com PORTS cirurgia não tem gliose, enquanto que após a injecção de soro fisiológico, gliose é observada no tecido do cérebro do rato, devido ao pipetar penetração e injecção de soro fisiológico no cérebro. Este resultado demonstra que gliose não ocorre sob a janela Portas craniana, proporcionando validação independente de que as portas janela craniana descritos aqui não levar à gliose que é tipicamente associada com um &quot;crânio aberto&quot; janela crônica craniano. Figura 4 mostra de alta resolução imagem de espinhas dendríticas do mesmo mouse no dia da cirurgia (dia 0) e 32 dias após a criação da janela Portos (dia 32), demonstrando que a janela de portas também é uma excelente opção para alta resolução de imagem in vivo. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig1.jpg" /> Figura 1. Visualização dos vasos sob uma janela crânio polido e reforçado diluído craniana usando luz retroespalhados. Dias representam t<html> ele o número de dias após a cirurgia, e as imagens foram tiradas com início no dia da cirurgia, imediatamente após a conclusão do GBM injecção das células. Barra de escala:. 0,5 milímetros <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver maior figura</a> . <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig2.jpg" /> Figura 2. Visualização de células injectadas GBM e vasculatura in vivo. Camundongos portadores tanto Tek-Cre e Rosa26 CAG-tdTomato foram usados ​​para injeção de células GBM. As células endoteliais vasculares foram marcadas com tdTomato (vermelho), e as células foram marcadas com GBM GFP (verde). As imagens foram adquiridas começando 24 horas após a injecção das células de GBM. Um total de 10-12 campos adjacentes de vista foram colhidas e foram montadas adjacentes uma à outra, com as células identificadas GBM injectadas no centro do campo total, para produzir as imagens finais. Dias representam o número de dias após a cirurgia. Barra de escala: 100 m.href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Clique aqui para ver maior figura. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig3.jpg" /> Figura 3. Gliose não ocorrer após a cirurgia portas janela craniano. Painéis superiores: seção Rato cérebro coronal em baixa ampliação. Painel esquerdo: um rato sem qualquer cirurgia janela craniana; nenhuma activação GFAP é observado no tecido cerebral. Painel do meio: um rato com uma janela craniana portos gerado no lado direito do cérebro, sem activação GFAP é observado no tecido cerebral. Painel da direita: um mouse com uma janela Portas craniano e injeção de solução salina do lado da janela Portas. Activação GFAP é observado do lado da janela portas, mas não sobre o lado do tecido do cérebro intacto. Barra de escala: 1 mm. Painel inferior: maior potência imagens dos tecidos cerebrais em áreas como indicado na caixa em branco das imagens superior do painel. Barra de escala: 100 m. <ahref = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig3large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Clique aqui para ver maior figura. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig4.jpg" /> Figura 4. Imagens de alta resolução de espinhos dendríticos de Thy-1 ratos YFPH. As imagens foram adquiridas no dia da cirurgia portos, e 32 dias após a cirurgia portas. É evidente a partir das imagens que a maioria dos espinhos apresentam no dia 0 são claramente visíveis 32 dias após a cirurgia portas. Barra de escala: 2 m.

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<li>Gilbertson, R. J., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+a+tumour%27s+bed%3A+glioblastoma+stem+cells+and+the+vascular+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Making a tumour's bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A chave para uma janela portuária craniana é o desbaste e polimento. Enquanto o desbaste inicial pode ser realizada rapidamente, deve ser tomado cuidado para assegurar homogeneidade adelgaçamento do crânio sobre uma grande área. Nós tipicamente aplicar uma camada fina de solução salina ao crânio, e depois dilua o crânio uma passagem de cada vez, de tal modo que a solução salina se evapora logo após a microdrill passou sobre o crânio de uma só vez. Isto permite-nos lentamente, mas de forma homogênea mais fina do crânio. ...

<table border="1"><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> DMEM/F12 (1:1), com piruvato de sódio </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Suplemento livre de soro (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> GlutaMax-1 Suplemento </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilina-Estreptomicina Solução </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Accutase Enzyme-Médio Destacamento celular </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 frascos-vent tampa verde </td><td> SARSTEDT </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> Álcool a 70% </td><td> JAX SCAF </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% de solução de iodo-povidona tópica </td><td> JAX SCAF </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ketamina HCl </td><td> Butler Abastecimento Saúde Animal </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Xilazina </td><td> Akorn, Inc. </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofeno </td><td> JAX SCAF </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pomada oftálmica </td><td> Produtos Veterinários Dechra </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5% de lidocaína HCl </td><td> REGENT, Inc. </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> Cola de cianoacrilato </td><td> Henkel Corp </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> Swabs estéreis </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> Pasta de diamante </td><td> Fonte Widget </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> Óxido de estanho </td><td> LORTONE, Inc. </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> Forro de Bond 2V </td><td> KURARAY Medical Inc. </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> KURARAY Medical Inc. </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> JAX SCAF </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tampa de vidro </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> Porca Hex </td><td> Peças pequenas, Inc. </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> Bomba de seringa </td><td> Syringepump.com </td><td> NE-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Two-Photon sistema de imagem </td><td> Personalizado construído (Qualquer sistema comercial seriatrabalhar) </td><td></td><td></td></tr></table>

imagem glioma iniciação<em&gt; em vivo</em&gt; através de um polido e reforçado janela crânio-thin craniana

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Glioma é a uma das formas mais mortais de cancro humano. A terapia mais eficaz para glioma a data da cirurgia, seguida de radioterapia oferece apenas pacientes benefícios modestos, como a maioria dos pacientes não sobrevivem mais de cinco anos após o diagnóstico, devido à glioma 1,2 recaída. A descoberta de células-tronco cancerosas em tumores cerebrais humanos tem a promessa de ter um enorme impacto sobre o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para glioma 3. As células-tronco cancerosas são definidas pela sua capacidade tanto de se auto-renovar e diferenciar, e acredita-se ser as únicas células em um tumor que têm a capacidade de iniciar novos tumores 4. Glioma recaída radioterapia seguinte é pensado para surgir a partir da resistência de células estaminais de glioma (GSCS) à terapia 5-10. In vivo, GSCS são mostrados a residir num nicho perivascular, que é importante para manter as suas células estaminais características semelhantes a 11-14 . Central para a organizaçãozação do nicho SGC são células endoteliais vasculares 12. Evidências sugerem que o GSCS e sua interação com as células endoteliais vasculares são importantes para o desenvolvimento do tumor e identificar GSCS e sua interação com células endoteliais como importantes alvos terapêuticos para glioma. A presença de GSCS é determinado experimentalmente pela sua capacidade de iniciar novos tumores após transplante ortotópico 15. Isto é normalmente conseguido através da injecção de um número específico de células de GBM isoladas a partir de tumores humanos no cérebro de severamente imunodeficientes ratos, ou de células de rato GBM em cérebros de ratinhos congénicos hospedeiras. Os ensaios para o crescimento do tumor são, em seguida, realizada de acordo com o tempo suficiente para permitir que GSCS entre as células injectadas GBM para dar origem a novos tumores, tipicamente várias semanas ou meses. Assim, os ensaios existentes não permitem a análise do processo patológico de iniciação do tumor de GSCS individuais in vivo. Conseqüentemente, essencial insights para as funções específicas de GSCS e sua interação com as células endoteliais vasculares nos primeiros estágios de iniciação do tumor estão faltando. Tais revelações são críticos para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para glioma, e terá grandes implicações para a prevenção de recaídas em pacientes glioma. Aqui nós adaptamos as portas procedimento de janela craniana 16 e in vivo de dois fótons de microscopia para permitir a visualização de iniciação do tumor a partir de células de GBM injetadas no cérebro de um rato vivo. Nossa técnica irá pavimentar o caminho para futuros esforços para elucidar os principais mecanismos de sinalização entre GSCS e células endoteliais vasculares durante o início glioma.

Ao combinar um polido e reforçado crânio-fino (portas) craniana janela e injeção de células do glioblastoma (GBM), podemos observar glioma iniciação e crescimento de células GBM injetadas no cérebro de um rato vivo longitudinalmente.

Imagem Glioma Iniciação<em&gt; Em Vivo</em&gt; Através de um polido e reforçado Janela crânio-Thin craniana

O glioma é uma das formas mais letais de câncer humano. A terapia mais eficaz para glioma até o momento — cirurgia seguida de tratamento radioterápico — oferece...

O objetivo geral deste procedimento é visualizar os estágios iniciais da iniciação de glioma a partir de células individuais de glioblastoma injetadas in vivo. Isso é realizado primeiramente afinando uma área do crânio de camundongo até uma espessura adequada para fins de imagem in vivo. Em seguida, a área afinada do crânio é polida.Em seguida, células de glioblastoma marcadas com GFP são injetadas no cérebro do camundongo e a janela craniana é selada para imageamento in vivo. Por fim, as células de glioblastoma injetadas são submetidas a imageamento diário para visualizar a iniciação do glioma a partir das células de glioblastoma injetadas, in vivo. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram a iniciação in vivo de glioma a partir de uma única injeção de células de glioblastoma e sua relação com células endoteliais vasculares por meio de microscopia de dois fótons in vivo com dupla coloração.Este método pode ajudar a responder perguntas-chave na área de células-tronco cancerígenas, como o papel crítico da interação entre células-tronco de glioma e células endoteliais vasculares, bem como o início do glioma in vivo, demonstrando que o procedimento será conduzido

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Implantação intracraniana de GL261 células em camundongos C57BL / 6 produz gliomas malignos que recapitulam muitas das características de glioblastoma multiforme humano. Usamos GL261 células expressando estavelmente luciferase para nos permitir...

Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

Nós apresentar um método para formar uma janela de imagem no crânio do rato que se estende por milímetro e é estável durante meses sem inflamação do cérebro. Este método é bem adequado para estudos longitudinais de fluxo de sangue, a dinâmica celular, e as células / estrutura vascular utilizando dois fotões microscopia.

A polido e reforçado Janela afinado crânio para longo prazo de imagens do cérebro de camundongo

Este vídeo apresenta um procedimento cirúrgico para implantar janela craniana em um modelo de camundongo para acesso óptico estável a diferentes regiões do cérebro.

Implantação de janela de imagem craniana em modelo de camundongo: um procedimento cirúrgico para implantar lamínula à base de vidro para acesso óptico estável a regiões do cérebro murino

Apresenta-se um método de criação de uma janela diluído crânio-cortical (TSCW) em um modelo de rato...

Diluído crânio-técnica de janela cortical para<em&gt; Em Vivo</em&gt; Tomografia de coerência óptica

A Novel de alta resolução<em&gt; In vivo</em&gt; Técnica de Imagem para estudar a resposta dinâmica de estruturas intracranianas ao crescimento do tumor e Terapêutica

Nós estabelecemos um modelo de glioblastoma ortotópico cortical em camundongos para microscopia de dois fótons intravital que recapitula as restrições biofísicas normalmente no jogo durante o crescimento do tumor. Uma janela de vidro crônica substituir o crânio acima do tumor permite o acompanhamento da progressão do tumor ao longo do tempo por meio de microscopia de dois fótons.

Um Glioblastoma Rato modelo ortotópico Manter restrições Cérebro parênquima físicas e Adequado para intravital dois fótons Microscopia

Aqui nós descrevemos um método para a imagem latente high-resolution do multifotônica do tempo-lapso de pilhas do tumor cerebral antes e depois da intervenção cirúrgica invasora (por exemplo, biópsia) dentro do mesmo animal vivo. Este método permite estudar o impacto destes procedimentos cirúrgicos invasivos no comportamento migratório, invasivo e proliferativo das células tumorais em um único nível de células.

Imagem latente longitudinal de intravital do comportamento da pilha do tumor cerebral em resposta a uma biópsia cirúrgica invasora

Este protocolo descreve uma técnica crônica de implantação de janelas cranianas que pode ser usada para imagens longitudinais de estruturas neuro-glio-vasculares, interações e função em condições saudáveis e doentes. Serve como uma alternativa complementar à abordagem de imagem transcranária que, embora muitas vezes preferida, possui algumas limitações críticas.

Mapeamento cerebral preciso para realizar imagens repetitivas in vivo da dinâmica neuro-imune em camundongos

Apresentado aqui é um protocolo para a implantação de uma janela craniana crônica para a imagem longitudinal de células cerebrais em camundongos acordados e com a cabeça.

Implantação de uma janela craniana para imagem repetida em vivo em ratos acordados

Este estudo demonstra a entrega de um traumatismo cranioencefálico repetitivo em camundongos e o implante simultâneo de uma janela craniana para posterior imagem intravital de um EGFP expresso por neurônio usando microscopia de dois fótons.

Imagem Intravital da Expressão de Proteínas Fluorescentes em Camundongos com Traumatismo Cranioencefálico de Crânio Fechado e Janela Craniana Usando um Microscópio de Dois Fótons

Apresentamos uma nova abordagem para microscopia de dois fótons da liberação tumoral de nanopartículas de óxido de ferro marcadas fluorescente para glioblastoma em um modelo de camundongo.

Microscopia Intravital de Dois Fótons de Glioblastoma em Modelo Murino

Aprenda a visualizar a iniciação de glioma em células de glioblastoma injetadas em camundongos usando uma janela craniana fina polida e reforçada. Este método permite imagens longitudinais in vivo por microscopia de dois fótons.

Imagem Glioma Iniciação

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