Name: Heterotípica tridimensional In Vitro Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Aprenda a criar modelos 3D heterotípicos de câncer de ovário para estudar interações estroma-epiteliais. Este método utiliza fibroblastos e células epiteliais em esferoides para investigar a progressão tumoral.

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Esta pesquisa foi realizada na Escola Keck de Medicina da Universidade da Califórnia, EUA, e da University College de Londres, Reino Unido. KL é financiado pelo Instituto Nacional de Saúde concessão 5 U19 CA148112-02. BG foi financiado por uma doação do projeto da caridade de oncologia ginecológica Eve Appeal (Reino Unido). Parte deste trabalho realizado no UCLH / UCL foi parcialmente financiamento do Departamento de Saúde Biomédica esquema de financiamento da investigação NIHR Centro.

<ol><li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li>
<li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+registrations%3A+registrations+of+cancer+diagnosed+in+2008%22">Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008</a>. , England. (2011).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma%3A+insights+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases%3A+implications+for+biomarker+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232(2008).</li>
<li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer%3A+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li>
<li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length%2FDNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134(2011).</li>
<li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+%28TRAP%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li>
<li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li>
<li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li>
<li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li>
<li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li>
<li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+%28EOC%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li>
<li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases%3A+Biology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li>
<li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li>
<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
<li>Kurman, R. J., Shih, I. eM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A biologia da fase precoce de câncer epitelial de ovário (EOC) é mal compreendida. Talvez um dos principais impedimentos na matéria, durante muitos anos tem sido a falta de compreensão das origens de tecidos específicos da doença, e da importância do papel do microambiente no desenvolvimento AOE. Ao longo dos últimos anos, é tornou-se claro que EOC é uma doença heterogênea, com vários subtipos distintos histophathological, provavelmente com diferentes origens celulares para diferentes subtipos. Por exemplo, os dados act...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Fornecedor </td><td> Número de Catálogo </td></tr><tr><td> PolyHEMA, adequado para cultura de células </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Etanol de grau de biologia molecular </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Água estéril para cultura de células </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Meio 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Soro fetal de bovino Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> A anfotericina B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-higrômetro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% de tripsina-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Célula filtro (40 ou 70 mm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-anticorpo de fibroblastos proteína de superfície, clone 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-citoqueratina anticorpo (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (brometo Hexadimetrina) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Ensaio comprimento dos telômeros </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Reagentes e equipamentos referidos no estudo.

heterotípica tridimensional<em&gt; in vitro</em&gt; modelagem de estroma-epitelial de ovário interações durante o início e progressão do câncer

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Câncer epitelial de ovário (EOCs) são a principal causa de morte por neoplasia ginecológica nas sociedades ocidentais. Apesar dos avanços em tratamentos cirúrgicos e melhoradas baseadas em platina quimioterapias, houve pouca melhora nas taxas de sobrevivência do EOC por mais de quatro décadas 1,2. Enquanto tumores estádio I têm taxas de sobrevida em 5 anos&gt; 85%, as taxas de sobrevivência para a fase III / IV doença são &lt;40%. Assim, as elevadas taxas de mortalidade para EOC pode ser significativamente reduzida se os tumores foram detectados em anteriores, mais tratáveis, etapas 3-5. Neste momento, a base molecular genética e biológica da fase inicial de desenvolvimento da doença não é bem entendido. Mais especificamente, pouco se sabe sobre o papel do microambiente do tumor durante a iniciação, mas factores de risco conhecidos para EOCs (por exemplo, idade e paridade) sugerem que o microambiente desempenha um papel essencial na génese precoce de EOCs. Por isso, desenvolveu modelos tridimensionais heterotípicostanto de ovário normal e dos cânceres de ovário em estágio inicial. O ovário normal, que co-cultivadas superfície de ovário epitelial (Iosé) e de fibroblastos do estroma normais (INOF) células, imortalizado por transdução retrovrial da subunidade catalítica da holoenzima telomerase humana (hTERT) para prolongar o tempo de vida das células em cultura. Para modelar as primeiras fases da transformação da célula epitelial do ovário, a superexpressão do oncogene nas células CMYC Iosé, de novo co-cultivadas com células INOF. Estes modelos heterotípicas foram utilizados para investigar os efeitos do envelhecimento e a transformação em senescência e invasão de células epiteliais. Aqui descrevemos os passos metodológicos no desenvolvimento destes modelo tridimensional; estas metodologias não são específicos para o desenvolvimento de ovário normal e tecidos de cancro do ovário, e pode ser usado para estudar outros tipos de tecidos em que as interacções de células estromais e epiteliais são fundamentais aspecto da manutenção dos tecidos e didesenvolvimento Sease.

Descrevemos metodologias para estabelecer<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotípicas modelos tridimensionais compreendendo fibroblastos de ovário e de superfície do ovário normal ou células ovarianas cancerosas epiteliais. Discute-se o uso desses modelos para estudar estromal-epiteliais interações que ocorrem durante o desenvolvimento do câncer de ovário.

Heterotípica tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer

Os cânceres epiteliais de ovário (CEOs) são a principal causa de morte por malignidade ginecológica nas sociedades ocidentais. Apesar dos avanços na cirurgia...

O objetivo geral do experimento a seguir é gerar modelos tridimensionais típicos do desenvolvimento do câncer de ovário em estágio inicial. Primeiro, gere linhagens celulares imortalizadas H turt derivadas de tecidos epiteliais ovarianos normais primários e de fibroblastos. Em seguida, para recriar a arquitetura in vivo e as interações complexas entre células presentes no ovário, co-cultive linhagens celulares epiteliais e estromais em modelos de esferoides tridimensionais, prossiga com a fixação e coloração das culturas de organoides e analise a expressão de marcadores específicos, a fim de estudar as características moleculares das interações estromais e epiteliais.Os resultados obtidos demonstram como alterações no compartimento de células estromais em modelos tridimensionais típicos podem influenciar o fenótipo de células epiteliais cultivadas em co-cultura. Modelos tridimensionais típicos podem ajudar a responder perguntas fundamentais na área de pesquisa do câncer de ovário, como explorar as origens dessa doença e elucidar o papel do microambiente estromal na iniciação e no desenvolvimento tumoral. As aplicações dessas técnicas estendem-se ao diagnóstico e à terapia de doenças, em comparação com outros métodos de cultivo tridimensional.Essa técnica pode ser aplicada a uma gama mais ampla de volumes de cultivo celular e aplicações posteriores. Por exemplo, cultivos tridimensionais homotípicos e heterotípicos podem ser utilizados para testes de fármacos in vitro. Essa abordagem também pode ser aplicada a outros sistemas modelo, como no estudo de outros tipos de tumores sólidos ou em doenças benignas.Transporte o tecido ovariano fresco para o laboratório de cultura celular em meio de crescimento para fibroblastos ovarianos normais imortalizados, suplementado com antibióticos e antimicóticos extras. Lave a amostra três vezes com cinco mililitros de PBS para remover quaisquer células epiteliais que permaneçam fracamente aderidas ao tecido. Em seguida, transfira a amostra com o PBS para uma placa de cultura P 100 limpa. Usando instrumentos estéreis, transfira o tecido para uma segunda placa de cultura P 100 seca e limpa.Corte o tecido em pedaços de 0,5 centímetro quadrado e transfira cada pedaço para uma placa P 100 separada. Continue cortando o tecido em pedaços com menos de um milímetro quadrado de tamanho. Em seguida, adicione 20 mililitros de meio INOF GM e cultive, monitorando o crescimento celular por microscopia de contraste de fase.Confirme que as células aderem à placa dentro de 24 horas. Monitore o crescimento celular utilizando microscopia de contraste de fase. Geralmente, as células aderem à placa dentro de 24 horas. Após uma semana, remova qualquer tecido não aderente por aspiração, reponha o meio e, posteriormente, troque o meio das culturas duas vezes por semana, entre uma e três semanas, quando as colônias celulares tiverem cerca de 500 micrômetros de tamanho.Isole os clones utilizando triplicatas e discos de clonagem revestidos. A fim de confirmar células fibroblásticas a 100%. Plaque uma amostra da linhagem celular sobre lamínulas de vidro e realize coloração por imunofluorescência para um marcador fibroblástico, um marcador epitelial e um marcador de células endoteliais.Um dia antes da transdução retroviral da passagem H Turt, isole as células de fibroblastos ovarianos normais de um único prato P 100 em três pratos P 100. O sobrenadante viral pré-fabricado pode ser adquirido comercialmente ou produzido internamente utilizando protocolos padrão de cotransfecção de células HEC 2 9 3 T. Para preparar a solução de poli-Hema, pese 1,5 grama de poli-Hema e coloque em um frasco estéril.Adicione 95 mililitros de etanol absoluto grau biologia molecular e 5 mililitros de água destilada grau cultura celular. Coloque a solução de poli-Hema em banho-maria a 65 graus Celsius até dissolução completa. Revesta as placas de cultura de tecidos com a solução de poli-Hema recém-preparada.Deixe secar ao ar as placas de cultura celular dentro da capela de fluxo laminar. Uma agitação suave em uma plataforma oscilante pode ser utilizada para garantir um revestimento uniforme de placas ou frascos de maior tamanho. Se a solução de poli-L-lisina secar muito rapidamente, a superfície não ficará lisa.Se desejar, pré-trate os fibroblastos antes do cultivo 3D; por exemplo, para indução de senescência, trate as células com doses subletais de peróxido de hidrogênio. Recupere e expanda os cultivos de INOF e células epiteliais in vitro para preparar quantidade suficiente de células para o estabelecimento de esteroides heterotópicos 3D. Após uma lavagem com PBS de cinco minutos, adicione 15 mililitros de meio à placa de poli-hema.Enquanto isso, adicione tripsina às células de fibroblastos ovarianos normais imortalizadas para destacá-las do recipiente de cultura. Após três a cinco minutos, neutralize a tripsina com um volume igual de meio de cultura e recolha as células por centrifugação. Suspender o pellet celular em cinco mililitros de meio e misture bem pipetando para cima e para baixo ou agitando suavemente.Em seguida, utilize uma amostra de 10 microlitros para enumerar células viáveis usando trian blue. Agora, adicione 4 milhões de células INOF ao meio já distribuído na placa revestida com poli-hema. Complete o volume do meio de cultura até 20 mililitros e incube a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono.Monitore a agregação celular em esferoides multicelulares por microscopia de contraste de fase para repor os cultivos de esferoides S a cada dois ou três dias. Incline as placas sobre uma pipeta. Deixe os esferoides sedimentarem e remova cuidadosamente cerca de 16 mililitros do meio exaurido com uma pipeta de cinco mililitros.Adicione 16 mililitros de meio fresco à cultura e retorne à incubadora no dia sete. Crie culturas heterotípicas adicionando células epiteliais aos fibroblastos phe. Primeiro, prepare suspensões de células epiteliais ovarianas por tripsina, conforme descrito anteriormente, após a contagem celular.Lave uma vez com meio GM INOF para evitar que quaisquer fatores de crescimento sejam transferidos do meio de crescimento epitelial. Após repor o meio das culturas de OID de fibroblastos, adicione as células epiteliais numa proporção de quatro para um, fibroblastos para células epiteliais. Os OID heterotópicos em GM INOF são reabastecidos tipicamente a cada dois ou três dias por um período adicional de 14 dias.Para imunohistoquímica, fixe o PHE com formalina tamponada neutra, agregue o PHE e substitua a formalina por etanol 70%. Prossiga com o processamento em parafina utilizando protocolos padrão usados para tecidos humanos. Os esteroides emblocados em parafina podem ser seccionados e corados com hematoxilina e eosina ou com marcadores moleculares específicos utilizando imunohistoquímica.Alternativamente, lave os esteroides em PBS e fixe em paraformaldeído a 4%. Em seguida, inclua as amostras em meio OCT e congele rapidamente para corte em criostato e coloração por imunofluorescência para análise por citometria de fluxo. Lave os esteroides em PBS e dissocie por digestão com tripsina ou Accutase a 37 graus Celsius.A dissociação completa de esteroides em uma suspensão de células únicas pode ser promovida por pipetagem da solução para cima e para baixo com uma ponteira de pipeta de um mililitro. Tenha cuidado para não romper as células; neutralize a reação com um volume igual de meio de cultura e remova agregados celulares passando a suspensão por uma peneira celular de 40 a 70 mícrons. Em seguida, pelote as células, lave com PBS, conte-as, ressuspenda o número desejado de células em tampão facts e realize a coloração de acordo com as instruções do fabricante. Em nosso laboratório, transformamos parcialmente células epiteliais ovarianas e cultivamos essas células em co-cultura com fibroblastos ovarianos normais e senescentes para simular o desenvolvimento do câncer de ovário em estágio inicial.Em um ovário pré-menopausado, a coloração por imunofluorescência de fibroblastos ovarianos normais imortalizados h hert mostra que tanto os fibroblastos ovarianos normais primários quanto os imortalizados expressam a proteína específica de fibroblastos, mas não expressam a citoceratina sete e expressam mentona. Células de fibroblastos ovarianos normais cultivadas isoladamente em 3D sobre PHE exibem uma morfologia fusiforme e abundante matriz extracelular. Aqui, os fibroblastos ovarianos normais foram expostos ao peróxido de hidrogênio para induzir senescência durante sete dias e, em seguida, cultivados com células epiteliais ovarianas parcialmente transformadas por 14 dias.Para distinguir os dois tipos celulares, os esteroides resultantes foram imunomarcados para mim-1 como marcador de proliferação e para pan-citoceratina como marcador epitelial. A quantificação dos dados sugere que o microambiente envelhecido promove características neoplásicas de células epiteliais parcialmente transformadas, enquanto um microambiente normal inibe a progressão neoplásica, sendo que características histológicas de células normais e malignas, não detectáveis quando as células são cultivadas em monocamadas, são restauradas. Quando as células são transferidas para cultivo em esferoides, por exemplo, características histológicas de cânceres ovarianos de células claras podem ser detectadas em cultivos tridimensionais de linhagens celulares de câncer de ovário de células claras, mas não em cultivos em monocamada das mesmas células.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como montar culturas tridimensionais típicas para estudar as interações entre células epiteliais e estromais durante a gênese tumoral inicial. Ao estabelecer uma cultura 3D, é importante ajustar o número de células de acordo com a aplicação posterior, prevendo alguma perda de material durante o processamento.Uma vez dominadas, as culturas tridimensionais podem ser estabelecidas em uma hora seguindo este procedimento. Outros métodos, como citometria de fluxo combinada com perfis de expressão gênica em micromatrizes, podem ser realizados para analisar as alterações globais na expressão gênica que ocorrem em culturas tridimensionais típicas, mas que não são detectadas sob condições de cultura em monocamada. Isso permitirá a análise das vias de sinalização bidirecionais que ocorrem especificamente em um microambiente de cultura tridimensional em núcleo.

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O ensaio de depuração mesotelial descrito aqui leva vantagem das células marcadas com fluorescência e de microscopia de lapso de tempo de vídeo para visualizar e medir quantitativamente as interações de esferóides de câncer de ovário multicelulares e monocamadas de células mesoteliais. Este ensaio modela os passos iniciais da metástase do câncer de ovário.

Ensaio in vitro de Apuramento mesotelial que os modelos dos primeiros passos da metástase do câncer de ovário

Neste vídeo, demonstramos o desenvolvimento de um modelo tridimensional in vitro do revestimento da cavidade peritoneal. Essa cultura organotípica pode ajudar a investigar a adesão, invasão e proliferação de células de câncer de ovário.

Modelagem de metástase de câncer de ovário no revestimento da cavidade peritoneal: um método para estabelecer um modelo 3D in vitro do revestimento peritoneal

Aqui apresentamos um protocolo de co-cultura em três dimensões, que é útil para investigar interações multicelulares e modulação dependente de matriz extracelular do comportamento das células cancerígenas. Neste modelo experimental, as células cancerígenas são cultivadas em géis de colágeno incorporados com fibroblastos associados ao câncer humano.

Tridimensional modelo de co-cultura para Interaction Tumor estromal-

Aqui, apresentamos um protocolo para construir um modelo tridimensional in vitro do revestimento da cavidade peritoneal, composto por células mesoteliais humanas primárias e fibroblastos estratificados com matriz extracelular, como uma ferramenta para investigar a adesão, invasão e proliferação de células de câncer de ovário.

Modelando os passos iniciais do cancro do ovário Divulgação em uma cultura organotípicas do Peritoneal Cavity Humano

Demonstramos um método para gerar substitutos de câncer de mama 3D, que podem ser cultivados usando um sistema de biorreator de perfusão para fornecer oxigênio e nutrientes. Após o crescimento, os substitutos são fixados e processados em parafina para avaliação dos parâmetros de interesse. A avaliação de um desses parâmetros, a densidade celular, é explicada.

Elaboração e análise de<em&gt; In Vitro</em&gt; Três mama Dimensional Carcinoma Surrogates

Para estudar a progressão do tumor do ovário num modelo fisiologicamente relevante, esferóides multicelulares foram cultivadas num microdispositivo sob fluxo de fluido simulado. Este modelo 3D dinâmica emula o ambiente intraperitoneal com os componentes celulares e mecânicas onde ocorre a metástase do cancro do ovário.

Modelagem do comportamento do cancro do ovário multicelular Spheroid em um microdispositivos 3D Peritoneal Dinâmico

As células-tronco do câncer de ovário (OCSC) são responsáveis pelo início, recorrência, resistência terapêutica e metástase do câncer. Considera-se que o nicho vascular do OCSC promove a auto-renovação dos OCSCs, levando à quimiorresistência. Este protocolo fornece a base para o estabelecimento de um modelo de nicho vascular OCSC reprodutível in vitro.

Avaliando as propriedades angiogenéticas de células-tronco do câncer de ovário usando o Sistema de Cocultura Tridimensional, NICO-1

Este protocolo descreve o estabelecimento de um modelo tridimensional (3D) ex vivo de interação célula-omento canceroso. O modelo fornece uma plataforma para elucidar mecanismos pró-tumorais dentro do nicho adiposo e para testar novas terapias.

Modelo Ex Vivo de Metástase Peritoneal de Câncer de Ovário Utilizando Omento Humano

Há uma necessidade crítica de modelos 3D de câncer que capturem crosstalk heterocelular para estudar a metástase do câncer. Nosso estudo apresenta a geração de estroma-epitelial heteromulticelular em um ambiente scaffold e scaffold-free que pode ser usado para estudar a invasão e as distribuições espaciais celulares.

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Este protocolo detalha o desenvolvimento de modelos de camundongos com carcinoma seroso de ovário de alto grau (HGSOC) in vitro e in vivo. A partir da derivação de organoides das trompas de Falópio murina, sua modificação genética para recapitular a genética do HGSOC humano e sua introdução na bursa ovariana de camundongos singênicos para o desenvolvimento in vivo de tumores.

Desenvolvimento de Linhagens Organoides Derivadas de Camundongos a partir de Células Epiteliais da Trompa de Falópio para Modelagem de Carcinoma Seroso de Ovário de Alto Grau

Aprenda a criar modelos 3D heterotípicos de câncer de ovário para estudar interações estroma-epiteliais. Este método utiliza fibroblastos e células epiteliais em esferoides para investigar a progressão tumoral.

Heterotípica tridimensional In Vitro Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer (Vídeo) | JoVE Journal

Heterotípica tridimensional

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