Name: Heterotípica tridimensional In Vitro Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Aprenda a criar modelos 3D heterotípicos de câncer de ovário para estudar interações estroma-epiteliais. Este método utiliza fibroblastos e células epiteliais em esferoides para investigar a progressão tumoral.

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Esta pesquisa foi realizada na Escola Keck de Medicina da Universidade da Califórnia, EUA, e da University College de Londres, Reino Unido. KL é financiado pelo Instituto Nacional de Saúde concessão 5 U19 CA148112-02. BG foi financiado por uma doação do projeto da caridade de oncologia ginecológica Eve Appeal (Reino Unido). Parte deste trabalho realizado no UCLH / UCL foi parcialmente financiamento do Departamento de Saúde Biomédica esquema de financiamento da investigação NIHR Centro.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A biologia da fase precoce de câncer epitelial de ovário (EOC) é mal compreendida. Talvez um dos principais impedimentos na matéria, durante muitos anos tem sido a falta de compreensão das origens de tecidos específicos da doença, e da importância do papel do microambiente no desenvolvimento AOE. Ao longo dos últimos anos, é tornou-se claro que EOC é uma doença heterogênea, com vários subtipos distintos histophathological, provavelmente com diferentes origens celulares para diferentes subtipos. Por exemplo, os dados act...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Fornecedor </td><td> Número de Catálogo </td></tr><tr><td> PolyHEMA, adequado para cultura de células </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Etanol de grau de biologia molecular </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Água estéril para cultura de células </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Meio 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Soro fetal de bovino Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> A anfotericina B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-higrômetro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% de tripsina-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Célula filtro (40 ou 70 mm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-anticorpo de fibroblastos proteína de superfície, clone 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-citoqueratina anticorpo (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrene (brometo Hexadimetrina) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Ensaio comprimento dos telômeros </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Reagentes e equipamentos referidos no estudo.

heterotípica tridimensional<em&gt; in vitro</em&gt; modelagem de estroma-epitelial de ovário interações durante o início e progressão do câncer

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Câncer epitelial de ovário (EOCs) são a principal causa de morte por neoplasia ginecológica nas sociedades ocidentais. Apesar dos avanços em tratamentos cirúrgicos e melhoradas baseadas em platina quimioterapias, houve pouca melhora nas taxas de sobrevivência do EOC por mais de quatro décadas 1,2. Enquanto tumores estádio I têm taxas de sobrevida em 5 anos&gt; 85%, as taxas de sobrevivência para a fase III / IV doença são &lt;40%. Assim, as elevadas taxas de mortalidade para EOC pode ser significativamente reduzida se os tumores foram detectados em anteriores, mais tratáveis, etapas 3-5. Neste momento, a base molecular genética e biológica da fase inicial de desenvolvimento da doença não é bem entendido. Mais especificamente, pouco se sabe sobre o papel do microambiente do tumor durante a iniciação, mas factores de risco conhecidos para EOCs (por exemplo, idade e paridade) sugerem que o microambiente desempenha um papel essencial na génese precoce de EOCs. Por isso, desenvolveu modelos tridimensionais heterotípicostanto de ovário normal e dos cânceres de ovário em estágio inicial. O ovário normal, que co-cultivadas superfície de ovário epitelial (Iosé) e de fibroblastos do estroma normais (INOF) células, imortalizado por transdução retrovrial da subunidade catalítica da holoenzima telomerase humana (hTERT) para prolongar o tempo de vida das células em cultura. Para modelar as primeiras fases da transformação da célula epitelial do ovário, a superexpressão do oncogene nas células CMYC Iosé, de novo co-cultivadas com células INOF. Estes modelos heterotípicas foram utilizados para investigar os efeitos do envelhecimento e a transformação em senescência e invasão de células epiteliais. Aqui descrevemos os passos metodológicos no desenvolvimento destes modelo tridimensional; estas metodologias não são específicos para o desenvolvimento de ovário normal e tecidos de cancro do ovário, e pode ser usado para estudar outros tipos de tecidos em que as interacções de células estromais e epiteliais são fundamentais aspecto da manutenção dos tecidos e didesenvolvimento Sease.

Descrevemos metodologias para estabelecer<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotípicas modelos tridimensionais compreendendo fibroblastos de ovário e de superfície do ovário normal ou células ovarianas cancerosas epiteliais. Discute-se o uso desses modelos para estudar estromal-epiteliais interações que ocorrem durante o desenvolvimento do câncer de ovário.

Heterotípica tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer

Os cânceres epiteliais de ovário (CEOs) são a principal causa de morte por malignidade ginecológica nas sociedades ocidentais. Apesar dos avanços na cirurgia...

O objetivo geral do experimento a seguir é gerar modelos tridimensionais típicos do desenvolvimento do câncer de ovário em estágio inicial. Primeiro, gere linhagens celulares imortalizadas H turt derivadas de tecidos epiteliais ovarianos normais primários e de fibroblastos. Em seguida, para recriar a arquitetura in vivo e as interações complexas entre células presentes no ovário, co-cultive linhagens celulares epiteliais e estromais em modelos de esferoides tridimensionais, prossiga com a fixação e coloração das culturas de organoides e analise a expressão de marcadores específicos, a fim de estudar as características moleculares das interações estromais e epiteliais.Os resultados obtidos demonstram como alterações no compartimento de células estromais em modelos tridimensionais típicos podem influenciar o fenótipo de células epiteliais cultivadas em co-cultura. Modelos tridimensionais típicos podem ajudar a responder perguntas fundamentais na área de pesquisa do câncer de ovário, como explorar as origens dessa doença e elucidar o papel do microambiente estromal na iniciação e no desenvolvimento tumoral. As aplicações dessas técnicas estendem-se ao diagnóstico e à terapia de doença

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O ensaio de depuração mesotelial descrito aqui leva vantagem das células marcadas com fluorescência e de microscopia de lapso de tempo de vídeo para visualizar e medir quantitativamente as interações de esferóides de câncer de ovário multicelulares e monocamadas de células mesoteliais. Este ensaio modela os passos iniciais da metástase do câncer de ovário.

Ensaio in vitro de Apuramento mesotelial que os modelos dos primeiros passos da metástase do câncer de ovário

Neste vídeo, demonstramos o desenvolvimento de um modelo tridimensional in vitro do revestimento da cavidade peritoneal. Essa cultura organotípica pode ajudar a investigar a adesão, invasão e proliferação de células de câncer de ovário.

Modelagem de metástase de câncer de ovário no revestimento da cavidade peritoneal: um método para estabelecer um modelo 3D in vitro do revestimento peritoneal

Aqui apresentamos um protocolo de co-cultura em três dimensões, que é útil para investigar interações multicelulares e modulação dependente de matriz extracelular do comportamento das células cancerígenas. Neste modelo experimental, as células cancerígenas são cultivadas em géis de colágeno incorporados com fibroblastos associados ao câncer humano.

Tridimensional modelo de co-cultura para Interaction Tumor estromal-

Aqui, apresentamos um protocolo para construir um modelo tridimensional in vitro do revestimento da cavidade peritoneal, composto por células mesoteliais humanas primárias e fibroblastos estratificados com matriz extracelular, como uma ferramenta para investigar a adesão, invasão e proliferação de células de câncer de ovário.

Modelando os passos iniciais do cancro do ovário Divulgação em uma cultura organotípicas do Peritoneal Cavity Humano

Demonstramos um método para gerar substitutos de câncer de mama 3D, que podem ser cultivados usando um sistema de biorreator de perfusão para fornecer oxigênio e nutrientes. Após o crescimento, os substitutos são fixados e processados em parafina para avaliação dos parâmetros de interesse. A avaliação de um desses parâmetros, a densidade celular, é explicada.

Elaboração e análise de<em&gt; In Vitro</em&gt; Três mama Dimensional Carcinoma Surrogates

Para estudar a progressão do tumor do ovário num modelo fisiologicamente relevante, esferóides multicelulares foram cultivadas num microdispositivo sob fluxo de fluido simulado. Este modelo 3D dinâmica emula o ambiente intraperitoneal com os componentes celulares e mecânicas onde ocorre a metástase do cancro do ovário.

Modelagem do comportamento do cancro do ovário multicelular Spheroid em um microdispositivos 3D Peritoneal Dinâmico

As células-tronco do câncer de ovário (OCSC) são responsáveis pelo início, recorrência, resistência terapêutica e metástase do câncer. Considera-se que o nicho vascular do OCSC promove a auto-renovação dos OCSCs, levando à quimiorresistência. Este protocolo fornece a base para o estabelecimento de um modelo de nicho vascular OCSC reprodutível in vitro.

Avaliando as propriedades angiogenéticas de células-tronco do câncer de ovário usando o Sistema de Cocultura Tridimensional, NICO-1

Este protocolo descreve o estabelecimento de um modelo tridimensional (3D) ex vivo de interação célula-omento canceroso. O modelo fornece uma plataforma para elucidar mecanismos pró-tumorais dentro do nicho adiposo e para testar novas terapias.

Modelo Ex Vivo de Metástase Peritoneal de Câncer de Ovário Utilizando Omento Humano

Há uma necessidade crítica de modelos 3D de câncer que capturem crosstalk heterocelular para estudar a metástase do câncer. Nosso estudo apresenta a geração de estroma-epitelial heteromulticelular em um ambiente scaffold e scaffold-free que pode ser usado para estudar a invasão e as distribuições espaciais celulares.

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Este protocolo detalha o desenvolvimento de modelos de camundongos com carcinoma seroso de ovário de alto grau (HGSOC) in vitro e in vivo. A partir da derivação de organoides das trompas de Falópio murina, sua modificação genética para recapitular a genética do HGSOC humano e sua introdução na bursa ovariana de camundongos singênicos para o desenvolvimento in vivo de tumores.

Desenvolvimento de Linhagens Organoides Derivadas de Camundongos a partir de Células Epiteliais da Trompa de Falópio para Modelagem de Carcinoma Seroso de Ovário de Alto Grau

Aprenda a criar modelos 3D heterotípicos de câncer de ovário para estudar interações estroma-epiteliais. Este método utiliza fibroblastos e células epiteliais em esferoides para investigar a progressão tumoral.

Heterotípica tridimensional In Vitro Modelagem de Estroma-epitelial de ovário Interações durante o início e progressão do câncer (Vídeo) | JoVE Journal

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