Name: Modelo rato ortotópico de câncer colorretal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Aprenda a estabelecer um modelo ortotópico de câncer colorretal em camundongos para estudar a progressão tumoral e testar novos agentes terapêuticos. Este método oferece insights valiosos sobre o comportamento do tumor.

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Departamento de Cirurgia da Universidade da Califórnia, San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. Preparação celular <ol><li> Células de câncer colorretal são cultivadas em cultura e colhidos quando confluentes. </li><li> A suspensão única célula é preparada em tampão fosfato salina e mantidos em gelo. </li></ol> II. Preparação do tumor <ol><li> Um rato com um tumor colorretal previamente estabelecidos subcutânea é eutanasiado. </li><li> O tumor subcutâneo é removido usando técnica estéril e dividido em pedaços 2-3 milímetros </li><li> As peças tumor são mantidos em tampão fosfato salino no gelo. </li></ol> III. Preparação do mouse Nota: Em nosso laboratório usamos isoflurano inalado para anestesiar o rato, alternativamente, pode-se usar anestésicos injetáveis ​​para alcançar o mesmo efeito <ol><li> A profundidade da anestesia é avaliada através de pinch dedo do pé. Não deve haver reflexo retirar com pitada dedo do pé. </li><li> Antibióticos pode ser dada neste momento. </li><li> O rato anestesiado, que anteriormente era raspada, está posicionada corretamente. </li><li> O abdômen é preparado com uma solução de betadine. </li><li> Do abdômen e do sítio cirúrgico é coberto de forma estéril. </li></ol> IV. Laparotomia <ol><li> Um nick pequeno é feito na pele </li><li> A musculatura da parede abdominal é agarrado e levantado </li><li> A cavidade abdominal é inserido e uma única lâmina da tesoura é usada para empurrar o conteúdo intra-abdominal de distância </li><li> A incisão é estendida a 2-3 cm </li></ol> V. exposição do ceco <ol><li> O ceco com sua bolsa terminando cego é identificado e exteriorizado </li><li> O ceco é isolado do resto do mouse usando um pré-corte de gaze estéril, </li><li> Salina morna é usada para manter a umidade do ceco </li></ol> VI. Injeção de células para a parede do ceco <ol><li> A G 27 ou mais fina agulha é usada para injetar um volume de 50 mL de células na parede cecal </li><li> A agulha é removida </li><li> O local da injeção é inspecionado para garantir que não haja vazamento </li><li> O ceco é retornado para a cavidade abdominal </li></ol> VII. Transplante de Tumor sobre o Ceco Nota: Além de injetar células na parede cecal, uma abordagem alternativa é o transplante tumor para o ceco <ol><li> Uma figura de oito ponto é colocado no ceco com 6-0 ou 7-0 sutura tamanho </li><li> A parede cecal é levemente danificados </li><li> Então, o pedaço do tumor é posicionado </li><li> O ponto é amarrado </li><li> O ceco é retornado para a cavidade abdominal </li></ol> VIII. Rato fechamento da parede abdominal e recuperação <ol><li> A parede abdominal do rato é fechado com três pontos interrompidos com 3-0 ou 4-0 sutura tamanho </li><li> Alternativamente, pode-se usar um ponto simples execução </li><li> Pós-operatório de analgésicos e um bolus de fluido pode ser dada neste momento </li><li> O mouse é permitida a recuperação anestésica. </li></ol> Nota: Com anestésicos inalatórios isso normalmente leva 30 segundos IX. Resultados - tumor primário e metástase hepática <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Tumor primário - mostrado in situ (A) e com evidência de neovascularização (B); na coloração H &amp; E, os tumores são localmente invasivos (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> As metástases no fígado - mostrado ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Embora os modelos de tumor subcutâneo do rato são fáceis de estabelecer e monitorar, é claro que este modelo não pode replicar o site original anatômica do câncer colorretal. Devido à diferença de microambiente, células de câncer colorretal crescer sob a pele têm sido mostrados para mudar seu fenótipo e quase sempre falham ao progresso e metástases 1,2. Na verdade, a resposta do tumor à terapia pode variar drasticamente, dependendo se as células cancerosas são implantados em uma gravidez ectópica (subcutânea) versus localização o...

<table><tbody><tr><td>Meios e componentes de cultura celular</td><td></td><td></td><td>variarão conforme a linhagem celular utilizada</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>também vendida por diversos outros fornecedores</td></tr><tr><td>Tubos cónicos de 15 mL, polipropileno</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 6 poços com tampa</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de íris, reta, com pontas serrilhadas</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>é recomendável ter um par desses instrumentos</td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação de íris, reta, afiada</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha (regular)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulha (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>os instrumentos devem ser autoclavados periodicamente, mas também podem ser esterilizados por imersão em Cidex</td></tr><tr><td>Fio cirúrgico 6-0 ou 7-0</td><td></td><td></td><td>para ceco; cortesia do Departamento de Cirurgia, UCSF</td></tr><tr><td>Fio cirúrgico 3-0 ou 4-0</td><td></td><td></td><td>para parede abdominal; cortesia do Departamento de Cirurgia, UCSF</td></tr><tr><td>Máquina de anestesia / Isoflurano</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>também vendida por diversos outros fornecedores</td></tr><tr><td>Almofada térmica descartável, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Fita laranja, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>para imobilizar o camundongo anestesiado</td></tr><tr><td>Pro-Cord/Cortador sem fio</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>para depilar o pêlo do camundongo</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>pode também ser adquirido em qualquer loja de material médico</td></tr><tr><td>Gaze 2 x 2, 3 camadas</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>pode também ser adquirido em qualquer loja de material médico</td></tr><tr><td>Campo estéril, barreira, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>pode também ser adquirido em qualquer loja de material médico</td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>pode também ser adquirido em qualquer loja de material médico</td></tr><tr><td>Seringa, 10 cc, ponta Luer lock</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Seringa, 1 cc, tuberculina, ponta lisa</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 27 1/2 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Agulha 30 G</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo rato ortotópico de câncer colorretal

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

O modelo tradicional tumor subcutâneo é menos do que ideal para estudar o câncer colorretal. Modelos de ratos ortotópico de câncer colorretal, que apresentam células cancerosas em crescimento em sua localização natural, replicar a doença humana com alta fidelidade. Duas técnicas podem ser usadas para estabelecer este modelo. Ambas as técnicas são semelhantes, e requer anestesia mouse e laparotomia para exposição do ceco. Uma técnica envolve a injeção de uma suspensão de células do câncer colorretal na parede cecal. As células cancerosas são primeiramente cultivadas na cultura, colhidas quando confluentes e preparado como uma suspensão única célula. Um volume pequeno de células é injetado lentamente para evitar fugas. A outra técnica envolve o transplante de uma peça de tumor subcutâneo para o ceco. Um rato com um tumor colorretal previamente estabelecidos subcutânea é eutanásia eo tumor é removido utilizando técnica estéril. A peça de tumor é dividido em pequenos pedaços para transplante para outro mouse. Antes do transplante, a parede cecal é levemente danificada para facilitar a infiltração de células tumorais. O tempo para o desenvolvimento de tumores primários e metástases hepáticas irá variar dependendo da técnica, linha celular, e as espécies de mouse usado. Este modelo do rato ortotópico é útil para estudar a progressão natural do câncer colo-retal e testes de novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal.

Duas técnicas podem ser usadas para estabelecer esse modelo: injeção de uma suspensão de células de câncer na parede cecal ou transplante de um pedaço de tumor subcutâneo para o ceco. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colo-retal e testes de novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal.

Modelo rato ortotópico de câncer colorretal

O modelo tradicional de tumor subcutâneo é menos do que ideal para estudar o câncer colorretal. Modelos ortotópicos de camundongo para câncer colorretal, que apresentam...

Olá, meu nome é William Sang. Sou do laboratório do Dr. Edgar Engelman do Departamento de Patologia da Universidade de Stanford. Também sou residente de cirurgia na Universidade da Califórnia em São Francisco.Hoje vou mostrar como estabelecer um modelo ortotópico de câncer colorretal em camundongos. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colorretal e para testar novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal. Isso contrasta com o modelo tradicional de tumor subcutâneo.O modelo de tumor subcutâneo é menos que ideal, pois as células tumorais que crescem sob a pele apresentam frequentemente um fenótipo alterado e falham em progredir e metastatizar. Na verdade, a resposta do tumor ao tratamento pode variar amplamente dependendo de se as células tumorais são implantadas em um local subcutâneo ou ortotópico. Duas técnicas podem ser utilizadas para estabelecer um modelo de câncer colorretal ortotópico em camundongos.Uma técnica envolve a injeção de uma suspensão de células de câncer colorretal na parede do SQL. A outra técnica envolve o transplante de um fragmento de tumor subcutâneo para o ceco. Ambas as técnicas são semelhantes e envolvem os seguintes pass

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo descreve o protocolo para gerar um modelo de camundongo de câncer colorretal de xenoenxerto ortotópico derivado de paciente para estudar a progressão de células de câncer colorretal em camundongos diabéticos/imunodeficiência combinada grave (NOD/SCID) não obesos. Este modelo murino ajuda a entender o crescimento do tumor primário e o padrão de metástases.

Gerando modelo de camundongo PDOX de câncer colorretal: estudando a progressão do câncer colorretal em um modelo murino

Este vídeo descreve a técnica de geração de organoides CRC transduzidos por partículas lentivirais GFP para permitir imagens fluorescentes. Esses organoides marcados com GFP, quando colocados em modelos animais, ajudam a estudar a invasão tumoral e a metástase.

Marcação de células organoides CRC: um método para gerar células organoides de câncer colorretal transduzidas por lentivírus GFP

Este vídeo descreve o protocolo para estabelecer um modelo de camundongo com metástase espontânea de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer colorretal ou PDXs. Esses modelos de xenoenxerto imitam parcialmente as características dos carcinomas humanos e entendem os aspectos críticos das malignidades humanas, incluindo invasão e metástase.

Modelos de camundongos com metástase espontânea: uma plataforma para estudar o potencial metastático de células de câncer colorretal injetadas ortotopicamente

O vídeo descreve a técnica de injeção intracecal de células cancerígenas para desenvolver um modelo de camundongo ortotópico com tumores altamente uniformes. Portanto, o modelo ortotópico de camundongo permite a simulação realista de metástases, fornecendo uma ferramenta valiosa para estudar as mudanças fenotípicas durante o crescimento e disseminação do tumor.

Injeção de células tumorais intracecais: uma técnica para entregar células cancerígenas para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer colorretal

O objetivo deste protocolo é aplicar ressonância magnética com contraste dinâmico (DCE-MRI) para xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em camundongos. A DCE-MRI é um método não invasivo para analisar a microvasculatura em um tecido-alvo e útil para avaliar a resposta vascular em um tumor após uma nova terapia.

Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato

A capacidade dos clones metastáticos de colonizar locais distantes depende de sua capacidade de proliferação e/ou de sua capacidade de sobreviver no microambiente hospedeiro sem proliferação significativa. Aqui, apresentamos um modelo animal que permite a visualização quantitativa de ambos os tipos de colonização hepática por clones metastáticos.

Modelo Animal avançado de Colorectal metástase no fígado: técnicas de imagem e Propriedades de metastáticos Clones

Descrevemos o estabelecimento de tumores colorretais ortotópicos através da injeção de células tumorais ou organoides no ceco de camundongos e o subsequente isolamento de células tumorais circulantes (CTCs) deste modelo.

Isolamento de células tumorais circulantes em um modelo de rato ortotópico de câncer colorretal

É apresentado um protocolo para o estabelecimento de um modelo de ratinho geneticamente modificado de câncer colorretal por infecção segmentar adeno-cre e sua vigilância através de colonoscopia de alta resolução.

Um modelo de mouse de engenharia genética de câncer colorretal esporádico

Este protocolo descreve a geração de modelos transplantação orthotopic do paciente-derivados do xenograft por intra-vesically incutir pilhas urotelial de primeira qualidade da carcinoma da pilha ou de injetar intra-rectal pilhas de cancro colorretal em não-obeso diabético/severo combinado ratos da imunodeficiência (NOD/SCID) para o crescimento preliminar do tumor e metástases espontâneas a influência de pilhas stromal do nó de linfa, que imita a progressão de doenças metastáticas humanas.

Modelos de xenoenxertos Ortotópicos derivados do paciente para Carcinoma de células urotelial humana e crescimento do tumor do câncer colorretal e metástase espontânea

Este protocolo descreve o implante ortotópico de células cancerosas derivadas de pacientes na parede do ceco de camundongos imunodeficientes. O modelo recapitula a doença metastática avançada do câncer colorretal e permite a avaliação de novas drogas terapêuticas em um cenário clinicamente relevante de metástases pulmonares e hepáticas.

Implante Ortotópico de Células Cancerosas Derivadas do Paciente em Camundongos Recapitula o Câncer Colorretal Avançado

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Injeção subcutânea de células de câncer colorretal humano em camundongos nus atímicos para avaliar a eficácia antitumoral

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