Modelo rato ortotópico de câncer colorretal

Olá, meu nome é William Sang. Eu sou do laboratório do Dr. Edgar Engelman no Departamento de Patologia da Universidade de Stanford. Também sou residente de cirurgia na Universidade da Califórnia em São Francisco.

Hoje vou mostrar como estabelecer um modelo de camundongo ortotópico de câncer colorretal. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colorretal e para testar novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal. Isso contrasta com o modelo tradicional de tumor subcutâneo.

O modelo de tumor subcutâneo é menos do que ideal, pois as células tumorais crescem sob a pele de um fenótipo alterado e freqüentemente não progridem e metastatizam. De fato, a resposta do tumor à terapia pode variar muito, dependendo se as células tumorais são implantadas em um local subcutâneo versus ortotópico. Duas técnicas podem ser usadas para estabelecer um modelo ortotópico de câncer colorretal em camundongos.

Uma técnica envolve a injeção de uma suspensão de células cancerígenas colorretais na parede SQL. A outra técnica envolve o transplante de um pedaço de tumor subcutâneo para o ceco. Ambas as técnicas são semelhantes e envolvem as seguintes etapas, uma, preparação celular ou tumoral.

Dois, preparo de camundongos, laparotomia e exposição do ceco. Três injeções de células ou transplante de tumor e quatro fechamento e recuperação da parede abdominal de camundongos. Vamos começar.

Portanto, para o procedimento de hoje, temos vários instrumentos diferentes que usamos. São pinças, tesouras, um porta-agulhas comum, um porta-agulhas Castro Viejo ne. E o mais importante para o procedimento, temos um pedaço pré-cortado de gaze estéril.

As células cancerígenas colorretais são cultivadas em cultura e colhidas quando subconfluentes, uma única suspensão celular é preparada em solução salina tamponada com fosfato e mantida em gelo. Uma malícia com um tumor colorretal subcutâneo previamente estabelecido é sacrificada. O tumor subcutâneo é removido usando técnica estéril e dividido em pedaços de dois a três milímetros.

Os pedaços do tumor são mantidos em solução salina tamponada com fosfato no gelo. Em nosso laboratório, usamos um anestésico inalado de flúor. Alternativamente, pode-se usar anestésicos injetáveis para obter o mesmo efeito.

A profundidade da anestesia é avaliada usando pinça do dedo do pé. Não deve haver um reflexo de retirada ao beliscar o dedo do pé. Antibióticos podem ser administrados neste momento.

O mouse anestesiado, que foi previamente barbeado, está posicionado corretamente. O abdômen é preparado três vezes com solução de Betadine e, em seguida, o abdômen e o local da cirurgia são cobertos de forma estéril. Um pequeno corte é feito na pele.

A musculatura da parede abdominal é enxertada e levantada. A cavidade abdominal é lesionada e uma única lâmina da tesoura é usada para afastar o conteúdo intra-abdominal. A incisão é estendida para dois a três centímetros.

O secum com sua bolsa cega é identificado e exteriorizado. O secum é isolado do resto do camundongo. Usando uma gaze estéril pré-cortada, solução salina quente é usada para manter o ceco úmido.

Uma agulha de calibre 27 ou mais fina é usada para injetar um volume de 50 microlitros de células na parede SQL. A agulha é removida. O local da injeção é inspecionado para garantir que não haja vazamento, além da injeção de células na parede SQL, uma abordagem alternativa é transplantar o tumor para o ceco.

Um ponto em forma de oito é colocado no ceco usando uma sutura de tamanho seis oh ou sete oh. A parede seca está levemente danificada. Em seguida, a peça do tumor é posicionada corretamente.

O ponto está amarrado. O secum é devolvido à cavidade abdominal. A parede abdominal do camundongo é fechada usando três pontos interrompidos usando sutura de tamanho três oh ou quatro oh.

Alternativamente, pode-se usar um ponto corrido simples, analgésicos pós-operatórios e um bolus de fluido pode ser administrado. Nesse ponto, o camundongo pode se recuperar da anestesia com anestésicos inalatórios. O camundongo normalmente se recupera da anestesia em 30 segundos.

Acabei de mostrar como estabelecer um modelo ortotópico de câncer colorretal em camundongos. O tempo para desenvolver tumores primários e metástases hepáticas dependerá da técnica utilizada, da linhagem celular utilizada e da espécie de camundongo utilizada. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colorretal e para testar novas terapias contra o câncer colorretal.

Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.