Name: Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Aprenda a técnica de janela craniana para visualização da artéria cerebral média em ratos durante oclusão induzida por endotelina-1. Este método permite quantificar alterações no diâmetro vascular em tempo real.

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Este trabalho foi financiado por doações do American Heart Association Maior filial Sudeste (09GRNT2060421), a Associação Médica Americana, e da Universidade da Flórida Clínica e Translacional Science Institute. Adam Meca é um NIH / NINDS, companheiro NRSA predoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt recebeu apoio comunhão predoctoral da Universidade da Flórida Programa de Formação Multidisciplinar em Hipertensão (T32 HL-083810).

Este protocolo foi aprovado pelo Animal Care Institucional e Comitê de Uso (IACUC) da Universidade da Flórida e está em conformidade com o &quot;Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório&quot; (oitava edição, a National Academy of Sciences, 2011). Materiais <ol><li> Animais: Oito semanas de idade, macho, Sprague Dawley (Farms Charles River, Wilmington, MA, EUA) pesando 250-300 g no momento da cirurgia. </li><li> Anestesia <ol class="lalpha"><li> Sistema de anestesia por inalação (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EUA) </li><li> Anestésico isoflurano (Baxter Farmacêutica, em Deerfield, Illinois, EUA) </li></ol></li><li> Estereotáxico sistema (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA) <ol class="lalpha"><li> Sistema estereotáxico de pequenos animais </li><li> Não-ruptura de ouvido barras para ratos </li><li> Gás titular cabeça anestesia para ratos </li></ol></li><li> Regulação da temperatura <ol class="lalpha"><li> BAT-12 termômetro microssonda (WorldPrecision Instruments, Inc., Sarasota, Flórida, EUA) </li><li> T / BOMBA, TP600 manta térmica (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, EUA) </li></ol></li><li> Instrumentos cirúrgicos <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum tesoura, íris fórceps, afastadores braçadeira bulldog, seringa de 10 ul com agulha de calibre 26 chanfrado, Bovie cautério kit (Precision Mundial Instruments, Inc., Sarasota, Flórida, EUA) </li><li> Micromotor broca (Stoelting, Wood Dale, IL, EUA) </li><li> 0,8 milímetros rodada broca broca (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EUA) </li><li> STORZ Bonn Sutura Pinças (Bausch e Lomb, Inc., Rochester, NY, EUA) </li></ol></li><li> Material cirúrgico <ol class="lalpha"><li> 3,0 nylon sutura (Oasis, Mettawa, IL, EUA) </li><li> Cotonetes, pomada Puralube (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EUA) </li><li> Pontos cirúrgicos e tiras (Medtronic Xomed, Inc., Jacksonville, FL, EUA) </li><li> Elétrica de cortar cabelo (Oster, Providence, RI, EUA) </li></ol></li&gt; <li> Produtos químicos <ol class="lalpha"><li> A endotelina-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, EUA) </li><li> Clorexidina 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, EUA) </li></ol></li><li> Equipamento de visualização <ol class="lalpha"><li> Microscópio cirúrgico (Seiler Instrumento e Manufatura; St. Louis, MO, EUA) </li><li> Sony Handycam HDR-SR12 (Sony, Minato, Tokyo, Japão) </li><li> Iluminador de fibra óptica (TechniQuip Corp, Livermore, CA, EUA) </li></ol></li><li> Medição do diâmetro do vaso <ol class="lalpha"><li> VLC media player (Paris, França) </li><li> Image J software (ImageJ 1.42q software, EUA National Institutes of Health, Bethesda, MA, EUA) </li></ol></li></ol> 1. Pré-cirúrgicos Passos <ol><li> Antes da cirurgia, os ratos são alojados sob um ciclo de luz / escuridão 12:12, com livre acesso à água e à ração de roedores. </li><li> A anestesia é induzida com 4% de isoflurano em 100% de mistura de gás O2, em uma câmara de indução. </li><li> O corvo<html> n da cabeça é raspada com cortar cabelo elétrica. </li><li> O rato é colocado numa posição de bruços sobre uma almofada absorvente encontra-se sobre uma superfície de funcionamento com temperatura controlada (manta térmica) e a cabeça é colocada no aparelho estereotáxico de partida com a colocação da máscara de gás anestésico. </li><li> Em seguida, as barras de orelha são inseridos e apertados. </li><li> Durante o procedimento de anestesia é mantida com isoflurano a 2% em 100% de mistura de gás de O 2. </li><li> Pomada lubrificante oftálmico é aplicada em ambos os olhos e as pálpebras são fechadas para evitar ressecamento dos olhos durante o procedimento cirúrgico. </li><li> Uma sonda de temperatura rectal é inserido para manter uma temperatura constante de animais núcleo de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Com a cabeça do rato anestesiado firmemente mantido no dispositivo estereotáxico da área cirúrgica é lavada com a alternância de clorexidina e solução salina três vezes. </li></ol> 2. Pré-craniana Preparação Janela ONTEÚDO &quot;&gt; Antes de criar uma janela craniana, o rato deve estar preparado para todas as experiências de implantação de hardware necessário outro e deve receber quaisquer procedimentos necessários cirúrgicos. Para este protocolo, já implantada uma cânula guia para endotelina-1 (ET- 1) induzida OACM como mostra uma publicação companheiro intitulado &quot;A endotelina-1 Induzida Médio modelo de oclusão da artéria cerebral para AVC isquêmico com Laser Orientação dopplerfluxometria em rato.&quot; 3. Criação da Janela craniana Após a colocação de uma cânula guia ou equipamento necessário para a experimentação, uma janela craniana é criado para visualizar diretamente porções proximais da artéria cerebral média, durante um procedimento de acidente vascular cerebral. <ol><li> Em primeiro lugar, são utilizadas tesouras a incisão da pele que cobre o músculo temporal e medialmente começando a trabalhar lateralmente. </li><li> O músculo temporal é cortada utilizando o eletrocautério, e depois recuou 3,0 utilizando fio de náilon ao vi<html> lize a escama do osso temporal. </li><li> Um quadrado de aproximadamente 3-4 milímetros é desenhada na parte escamosa do osso temporal caudal para a órbita e superior para a base do processo zigomático uma vez que reflecte para fora do osso temporal. </li><li> Uma broca é utilizada para reduzir gradualmente o pedaço de osso esboçada livre a partir do osso temporal. Deve ser tomado cuidado para evitar a aplicação de pressão excessiva ao perfuração uma vez que é possível danificar a dura ou no córtex cerebral. </li><li> Lavagens freqüentes com solução salina estéril são realizadas para melhorar a visualização do campo cirúrgico e evitar o superaquecimento do crânio. </li><li> A partir de um canto solto, o pedaço de osso temoporal é cuidadosamente removido usando finas rato de dentes fórceps enquanto tomando cuidado para não rasgar os vasos associados com a dura. </li><li> A dura-máter é deixada intacta e detritos é lavado com solução salina estéril. </li></ol> 4. Gravação de constrição da artéria cerebral &gt; tenda &quot;Para demonstrar como a captura de imagens em tempo real, um rato que está passando por ET-1 induzida OACM é usado para esse protocolo. <ol><li> Antes da aplicação de compostos vasoactivos, uma linha de base de vídeo deve ser registada durante pelo menos 1 min. Para ET-1 induzida por MCAO, a gravação é feita referência, uma vez que a agulha tenha sido baixada para dentro do parênquima do cérebro, mas antes da injecção de ET-1. </li><li> A bomba de seringa é iniciado por injecção e registados durante 1 hora ou até que o ponto final desejado. A agulha é deixada no local durante a gravação de video, a fim de evitar perturbações no plano focal. </li><li> O rato deve ser profundamente anestesiados e sacrificados de acordo com um protocolo aprovado seguindo este procedimento. </li></ol> 5. Análise de Imagem Diâmetro do vaso pode ser determinada para qualquer parte do MCA visualizado. Como exemplo, vamos usar um ramo da MCA para medir o diâmetro dos vasos em tempo-pontos antes e depois da injeção de ET-1. Still quadros do vídeo são capturados em intervalos de 1 min usando VLC media player (VideoLAN). <ol><li> VLC player está instalado e aberto. </li><li> Ao selecionar ferramentas e, em seguida, as preferências, o cenário é alterado para &quot;Todos&quot; em &quot;Mostrar configurações&quot;. </li><li> O menu &quot;vídeo&quot; é ampliado na barra do lado esquerdo e &quot;Módulos de saída&quot; é então expandido. &quot;Filtros de Cena&quot; é selecionado para abrir o menu de vídeo cena filtro. </li><li> &quot;Scene&quot; é digitado na caixa de prefixo do nome. </li><li> Um prefixo caminho do diretório está definido. Este é o lugar onde ainda quadros são salvos. </li><li> Um rácio de gravação é seleccionado com base na taxa desejada de captura de quadros. Se um vídeo foi capturado em 29 frames por segundo, em seguida, &quot;1749&quot; (29 frames / seg x 60 seg / min) deve ser inserido na caixa para salvar uma ainda enquadrar cada 1 min. Todas as mudanças são salvos. </li><li> O vídeo desejado é então aberto em player VLC para salvar automaticamente quadros ainda uma vez a cada 1 min. </li><li> Diâmetro do vaso é então medida utilizando estesimagens. Em primeiro lugar, o software ImageJ (NIH) é aberta. </li><li> Em seguida, os quadros ainda que você vai medir são abertos no ImageJ. </li><li> Ao selecionar a &quot;analisar&quot; menu &quot;, definir medidas&quot; é então aberto e todas as caixas estão desmarcadas. </li><li> Em seguida, a ferramenta de linha reta é selecionada. </li><li> O atalho &quot;Ctrl +&quot; é usado para fazer zoom conforme necessário e uma linha é colocado perpendicularmente ao caminho vaso para medir o diâmetro do vaso. </li><li> Finalmente, comprimento do vaso é obtida selecionando a &quot;analisar&quot; no menu e, em seguida, &quot;medida&quot; (ctrl + M) para obter comprimento do vaso. </li><li> Este processo é repetido pelo menos três vezes, e calculada a média para cada recipiente de medição medidos em cada fotograma. </li><li> Diâmetro do vaso em cada ponto de tempo é normalizado para o diâmetro do vaso de linha de base de modo a que possam ser feitas comparações múltiplas utilizando ratos. Para fazer isso, utilizar a fórmula diâmetro diâmetro / corrente de linha de base x 100% para calcular o diâmetro da linha de base% de cada vaso. </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Em resumo, esta técnica de preparação de janela craniana é muito versátil uma vez que podem ser alterados para satisfazer as necessidades das várias experiências com pequenas modificações, 4, 5. Por exemplo, conseguimos monitorado o fluxo sanguíneo cerebral em ramos específicos MCA usando a dopplerfluxometria a laser para se concentrar diretamente em uma artéria cerebral visualizado através de uma janela de crânio (Meca AP 2009 e 2011). Além disso, uma preparação semelhante com a incisão dura pode ser utiliza...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Sistema de anestesia por inalação </td><td> VetEquip Inc., Pleasanton, CA, EUA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Anestésico isoflurano </td><td> Pharmaceutics Baxter, Deerfield, IL, EUA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Sistema estereotáxico de pequenos animais </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> Não-ruptura barras de ouvido de ratos, </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> Rat gás suporte da cabeça anestesia </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 termômetro microssonda </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> BAT-12 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> T / BOMBA, manta térmica </td><td> Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, EUA </td><td> T / BOMBA, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum Tesoura </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> Iris fórceps </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td> Afastadores bulldog braçadeira </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> Seringa de 10 ul de 26 gaugue </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, kit cautério alta temperatura </td><td> Precisão mundo Instruments, Inc., Sarasota, FL, EUA </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> Dente rato fórceps 0,12 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Broca Micromotor </td><td> Stoelting,Wood Dale, IL, EUA </td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0,8 broca de perfuração milímetros rodada </td><td> Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, EUA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ Bonn sutura fórceps </td><td> Bausch e Lomb, Inc., Rochester, NY, EUA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nylon de sutura, de tamanho 3,0 </td><td> Oasis, Mettawa, IL, EUA </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> Cotonetes </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EUA </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube pomada </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, EUA </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> Elétrica de cortar cabelo </td><td> Oster, Providence, RI, EUA </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> ET-1 diluído a 80 μ M de concentração em PBS </td><td> American Peptide, Sunnyvale, CA, EUA </td><td> 88-1-10A </td><td></td></tr><tr><td> Clorexidina, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, St. Joseph, MO, EUA </td><td> 1040, Rev. 6-06, NAC n º: 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio cirúrgico </td><td> Seiler Instrumento e Manufatura, St. Louis, MO, EUA </td><td> Evolução XR6 </td><td></td></tr><tr><td> Sony Handycam </td><td> Sony, Minato, Tokyo, Japão </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> Iluminador de fibra óptica </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, EUA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC Media Player </td><td> (Paris, França) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Image J software </td><td> EUA National Institutes of Health, Bethesda, MA, EUA </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

utilizando uma janela craniana para visualizar a artéria cerebral média durante endotelina 1 induzida por oclusão da artéria cerebral média

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Criação de uma janela craniana é um método que permite a visualização directa das estruturas sobre a superfície cortical do cérebro 1-3. Esta técnica pode ser realizada em diversos locais do cérebro de rato que se sobrepõem, mas é mais facilmente realizado através da criação de uma craniectomia sobre os ossos de fácil acesso frontal ou parietal. Mais frequentemente, temos usado esta técnica, em combinação com o modelo de oclusão endotelina-1 na artéria cerebral média de AVC isquémico para quantificar as alterações no diâmetro dos vasos da artéria cerebral média, que ocorrem com a injecção de endotelina-1 para o parênquima cerebral adjacente ao MCA proximal 4, 5. A fim de visualizar a porção proximal da MCA, durante endotelina -1 induzida MCAO, usamos uma técnica para criar uma janela craniana no osso temporal na face lateral do crânio de rato (Figura 1). Artérias cerebrais pode ser visualizada quer com a dura intacta ou com a dura-máter e incisa RetraCTED. Mais comumente, deixamos a dura intacta durante a visualização desde a endotelina-1 induzida por MCAO envolve a entrega do péptido vasoconstritor para o parênquima cerebral. Isto evita a necessidade de incisão na dura directamente sobre os vasos visualizado para a entrega da droga. Este protocolo irá descrever como criar uma janela craniana para visualizar artérias cerebrais de uma forma faseada, bem como a forma de evitar muitas das armadilhas potenciais referentes a este método.

As imagens fixas tiradas do programa de vídeo captada que a mudança de diâmetro da artéria cerebral após a injecção de ET-1 pode ser facilmente observado utilizando esta técnica janela craniana (Figura 2). Poucos minutos após a injeção de ET-1, o navio começará a se contrair. Eventualmente, os vasos será difícil de visualizar o tecido cerebral e irá tornar-se clara. Após cerca de 20 min os efeitos de ET-1 irá diminuir e os vasos começará a dilatar gradualmente voltando ao diâmetro de linha de base, após...

Este artigo descreve um método para a visualização de artérias cerebrais de rato através de uma janela craniana via craniectomia temporal, a fim de visualizar partes proximais da artéria cerebral média (<strong&gt; Figura 1</strong&gt;). Este método versátil, pode ser combinada com várias técnicas de administração de fármacos para medir a reactividade da artéria cerebral<em&gt; In vivo</em&gt;.

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Neste protocolo em vídeo, vamos demonstrar o uso de uma janela craniana para visualizar a artéria cerebral média durante a oclusão induzida por endotelina-1 da artéria cerebral média. Para o preparo dessa janela craniana, realiza-se uma craniectomia temporal a fim de visualizar porções proximais da artéria cerebral média. A criação de uma janela craniana é um método que permite a visualização direta de estruturas na superfície cortical do cérebro.Essa técnica pode ser realizada em diversos locais sobrepostos ao cérebro do rato, mas é mais facilmente executada por meio da criação de uma craneotomia em C sobre os ossos frontal ou parietal, de fácil acesso. Com maior frequência, utilizamos essa técnica em combinação com o modelo de oclusão da artéria cerebral média induzida por endotelina-1 ou o modelo de AVE isquêmica induzida por ET-1 (MCAO). Um procedimento de janela craniana é realizado para quantificar as alterações no diâmetro dos vasos que ocorrem após a injeção de ET-1 no parênquima cerebral adjacente à artéria cerebral média proximal ou MCA.Utilizamos especificamente uma técnica para criar uma janela craniana através do osso temporal na face lateral do crânio do rato. As artérias cerebrais podem então ser visualizadas com a dura-máter intacta ou com a dura-máter incisada e retratada. Na maioria das vezes, mantemos a dura-máter intacta durante a visualização.Como o MCAO induzido por ET-1 envolve a administração de um peptídeo vasoconstritor na substância parenquimatosa do cérebro, esse método dispensa a necessidade de incisão diretamente na dura-máter sobre os vasos visualizados para a entrega do fármaco. Neste vídeo, mostraremos como criar uma janela craniana para visualizar as artérias cerebrais de maneira sequencial, bem como como evitar muitas das armadilhas potenciais comuns relacionadas a este método. Após a colocação da cânula-guia, conforme referenciado, pode-se criar uma janela craniana para visualizar diretamente os segmentos proximais da artéria cerebral média durante um procedimento de acidente vascular cerebral; primeiramente, faça uma incisão no couro cabeludo conforme mostrado, utilizando tesoura, e retrai a pele para expor o músculo temporal.Divida o músculo temporal usando eletrocoagulação e, em seguida, retrai-lo para visualizar a porção escamosa do osso temporal. Obter uma exposição adequada do osso temporal é crucial para este procedimento. Tenha cuidado para evitar a órbita durante a coagulação.Para melhorar a visualização, utilize sutura para retrair o músculo Temporal dividido ao meio. Desenhe um quadrado de três a quatro milímetros na porção escamosa do osso temporal próximo à órbita e acima da base do processo zigomático, conforme este se afasta do osso temporal. Utilize uma broca para remover esta porção do osso.Tenha cuidado para evitar aplicar muita pressão, pois é possível perfurar o cérebro. Certifique-se de realizar enxágues frequentes com solução salina estéril para melhorar a visualização do campo cirúrgico e prevenir o superaquecimento do crânio. Começando em um canto solto, remova cuidadosamente o fragmento de osso temporal usando pinça fina de dentes de rato, certificando-se de não romper os vasos associados à dura-máter.Aqui você pode visualizar um ramo da artéria cerebral média na linha de base, antes da injeção de Endothelial.One. Minutos após a injeção de Endothelial.One, a artéria cerebral média começará a se contrair. Eventualmente, os ramos tornam-se difíceis de visualizar e o tecido cerebral ficará pálido.Após cerca de 20 minutos, os efeitos da endotelina um diminuirão e os vasos começarão a se dilatar gradualmente. Retornando ao diâmetro basal após cerca de 45 minutos. Para medir o diâmetro dos vasos em diferentes momentos antes e após a injeção de endotelina um, quadros congelados do vídeo são capturados em intervalos de um minuto. Utilizando o VLC Media Player, vá até ferramentas, preferências e, em seguida, altere a configuração para todas em mostrar configurações.Expanda o menu de vídeo na barra lateral esquerda e expanda os módulos de saída. Selecione o tipo de cena do filtro de cena como prefixo do nome do arquivo. Em seguida, adicione um caminho de diretório.Em seguida, configure a taxa de gravação para a captura de quadros fixos com base na taxa de quadros do seu vídeo, conforme explicado no protocolo escrito. Por fim, clique em salvar aberto. O vídeo desejado e o VLC Player salvarão automaticamente quadros fixos a cada um minuto para medir o diâmetro do vaso.Usando essas imagens primeiro, abra o software Image J, depois abra os quadros fixos que você irá medir. Vá até analisar, definir medições e desmarque todas as caixas. Selecione a ferramenta de linha reta, aumente o zoom conforme necessário.Traceje uma linha perpendicular ao trajeto do vaso para medir o diâmetro do vaso. Vá até analisar, depois clique em medir para obter o diâmetro do vaso. Repita este procedimento para todas as imagens desejadas.O diâmetro do vaso em cada ponto temporal deve ser normalizado em relação ao diâmetro basal do vaso, de modo que comparações possam ser feitas utilizando múltiplas ratas. Para isso, utilize a fórmula mostrada aqui. Em resumo, esta técnica de preparação de janela craniana é muito versátil, pois pode ser alterada para atender às necessidades de muitos experimentos com modificações mínimas.Por exemplo, monitoramos com sucesso o fluxo sanguíneo cerebral em ramos específicos da artéria cerebral média utilizando imagem de fluxo a laser para focar diretamente em uma artéria cerebral visualizada através de uma janela craniana. Além disso, uma preparação semelhante com a dura-máter exposta pode ser utilizada com a administração tópica de compostos vasoativos para criar um banho de reatividade vascular in vivo. Vários fatores devem ser considerados ao preparar uma janela craniana, a fim de reduzir a taxa de falha dessa técnica.Muitos desses fatores estão relacionados à obtenção de uma boa visualização das artérias cerebrais. Por exemplo, deve-se ter cuidado ao criar a craniectomia em C para que a dura-máter ou os vasos sanguíneos que a recobrem não sejam danificados com a broca. Isso é melhor conseguido com lavagens frequentes com soro fisiológico estéril para remover detritos e resfriar o crânio.Esperamos que este vídeo o ajude a planejar experimentos que utilizem uma janela craniana e o auxilie a evitar as armadilhas comuns que podem ocorrer durante este procedimento.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Indução cirúrgica de uma lesão cerebral isquêmico no rato é um modelo amplamente utilizado para a pesquisa acidente vascular cerebral. Aqui nós demonstram a indução de isquemia cerebral focal por oclusão da artéria cerebral média. Visualização do infarto resultantes de coloração histológica e ressonância magnética também é mostrada.

Modelo de isquemia focal cerebral por oclusão Suture Endovascular da artéria cerebral média no Rat

Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).

Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média

Este vídeo demonstra o procedimento de realização da oclusão permanente da artéria cerebral média distal, ou MCAO, com a artéria carótida comum, ou ligadura CCA, em ratos idosos para modelar o AVC isquêmico. Isso bloqueia o fluxo sanguíneo para o cérebro, levando à morte neuronal e gerando um modelo para estudar os mecanismos do AVC e possíveis tratamentos.

Induzindo isquemia via oclusão do cérebro médio e da artéria carótida comum em um modelo de rato

Vários modelos animais de isquemia cerebral foi desenvolvido para simular a condição humana de acidente vascular cerebral. Este protocolo descreve a endotelina-1 (ET-1) induzida por oclusão da artéria cerebral média do modelo (MCAO) para acidente vascular cerebral isquêmico em ratos. Além disso, considerações importantes, vantagens e inconvenientes deste modelo são discutidos.

Endotelina-1 Induzida Médio modelo de oclusão da artéria cerebral para AVC isquêmico com Laser Orientação Fluxometria Doppler em ratos

Monitorização da perfusão cerebral foi demonstrada para melhorar a precisão em modelos de isquemia AVC. Dificuldades técnicas, muitas vezes limitam o uso desta ferramenta essencial para a pesquisa vascular cerebral. Neste vídeo, um sistema optimizado é mostrado para obter um controlo único ou multi-local hemodinâmicas durante a oclusão da artéria cerebral média intraluminal em ratos.

Sistema otimizado para Monitorização de perfusão cerebral no modelo do rato do curso de oclusão da artéria cerebral média intraluminal

Nós descrevemos um método altamente reprodutível para a oclusão permanente de um roedor grande vaso sanguíneo cerebral. Esta técnica pode ser realizado com muito pouco dano periférica, a perda de sangue mínima, uma elevada taxa de sobrevivência a longo prazo, e o volume de enfarte consistente comensurável com a população de clínica humana.

Permanente oclusão vascular cerebral<em&gt; Via</em&gt; Dupla ligadura e transecção

A fim de compreender a patofisiologia de acidente vascular cerebral, é importante o uso de modelos fiáveis. Este documento descreve um dos modelos de AVC mais utilizados em camundongos, denominado o meio modelo de oclusão da artéria cerebral (MCAo) (também denominado o filamento intraluminal ou modelo de sutura) com a reperfusão.

Abordagem cirúrgica para oclusão da artéria cerebral média e reperfusão induzida por acidente vascular cerebral em ratos

oclusão cirúrgica de um ramo distal da artéria cerebral média (MCAo) é um modelo usado com freqüência em pesquisa acidente vascular cerebral experimental. Este manuscrito descreve a técnica básica de MCAo permanente, combinada com a inserção de uma janela craniana lateral, que oferece a oportunidade para microscopia intravital longitudinal em ratinhos.

Lateral Crônica Cranial Janela Preparação Ativa In Vivo Observação Após Distal Middle Cerebral Oclusão da Artéria em Ratos

Este protocolo demonstra um modelo único de acidente vascular cerebral em camundongo com um infarto de tamanho médio e uma excelente taxa de sobrevida. Esse modelo permite que os pesquisadores pré-clínicos do AVC estendam a duração da isquemia, usem camundongos envelhecidos e avaliem os resultados funcionais a longo prazo.

Modelo de Oclusão Transcraniana da Artéria Cerebral Média Modificada para Estudo de Resultados de Acidente Vascular Cerebral em Camundongos Idosos

Este protocolo descreve o modelo de isquemia cerebral focal transitória em camundongos através da oclusão intraluminal da artéria cerebral média. Além disso, exemplos de avaliação de resultados são mostrados usando ressonância magnética e testes comportamentais.

Modelo de Oclusão Transitória da Artéria Cerebral Média do Acidente Vascular Encefálico

O objetivo deste estudo foi estabelecer um método reprodutível para realizar uma craniectomia seguida de oclusão permanente e seletiva da artéria cerebral média em ratos, para aplicação em estudos experimentais de déficits de memória motora e espacial.

Oclusão Seletiva e Permanente da Artéria Cerebral Média em Ratos: Uma Abordagem Experimental para Estudar Déficits de Memória Motora e Espacial

Aprenda a técnica de janela craniana para visualização da artéria cerebral média em ratos durante oclusão induzida por endotelina-1. Este método permite quantificar alterações no diâmetro vascular em tempo real.

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média (Vídeo) | JoVE Journal

Utilizando uma janela craniana para Visualizar a artéria cerebral média Durante endotelina 1 Induzida por oclusão da artéria cerebral média

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