Name: Um modelo de camundongo ortotópico de Carcinoma anaplásico da tiróide (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Aprenda a criar um modelo ortotópico de carcinoma anaplásico da tiróide em camundongos, injetando células humanas na glândula tireoide. Este método replica a progressão da doença humana para estudos oncológicos.

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Os autores gostariam de agradecer as Dras. Wenjun Li e Daniel Kreisel (Washington University School of Medicine, em St. Louis) por sua assistência na formação de cirurgia. RYL é apoiado pelo National Institutes of Health Grant R01 DK068057 e Fundo de Investigação do Presidente da Saint Louis University.

1. Preparação celular Notas: 1) Formulação completo RPMI 1640 com base meios de cultura (500 ml), compreende 435 ml de RPMI 1640, 50 ml de FBS inactivado pelo calor, 5 ml de aminoácidos não essenciais, 5 mL de piruvato de sódio, 5 ml de antibiótico-antimicótico, 2) lugar matrigel a 4 ° C, um dia antes da colheita de células. <ol><li> Human linha celular ATC THJ-11T 8 são cultivadas em placas de cultura de 6 poços e colhido uma vez 80-90% confluentes. </li><li> Células por centrifugação a 200 xg durante 4 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Aspirar o meio e ressuspender as células em meio RPMI 1640 [2 ml / placa de 6 poços]. </li><li> Tomar um pequeno volume da suspensão de células, adiciona-la a um volume de 0,4% de corante azul de tripano e determinar a densidade das células usando TC10 contador de células automatizado. </li><li> Calcular o volume de suspensão de células necessário para obter 5 x 10 5 células / mouse vezes os ratos número injetáveis. </li></ol> Nota: Para garantir anúncio<html> equiparar suspensão de células para injeção, preparar as células como se você está injetando o dobro do número de ratos (por exemplo, se injetando 5 ratos, em seguida, preparar suspensão celular como se estivesse injetando 10 ratos). <ol start="6"><li> Transferir necessário volume de suspensão de células para um tubo cónico de 15 ml. </li><li> Células por centrifugação a 200 xg durante 4 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Aspirar mídia e Ressuspender as células em RPMI completo 1640. </li><li> Transferência de células para um tubo de 1,6 ml, adicionar um volume de matrigel e misture delicadamente por pipetagem lentamente dentro e para fora. </li></ol> Nota: Cada ratinho recebe 10 uL da suspensão / matrigel cocktail célula. Desde 5 x 10 5 células em suspensão em um volume de 10 ul injectável ter sido usado com sucesso em estudos anteriores ATC ortotópicos 9-10, foram utilizados os parâmetros neste relatório. <ol start="10"><li> Coloque suspensão de células em gelo até que esteja pronto para uso. </li></ol>_title &quot;&gt; 2. Preparação Rato <ol><li> Limpar a zona cirúrgica, que inclui o âmbito de dissecação e área circundante, limpando as superfícies com etanol a 70%. </li><li> Ligar lâmpadas de aquecimento / almofadas onde os animais serão recuperando de uma cirurgia. </li><li> Administrar 0,1 ml de cetamina / xilazina (coquetel de drogas consistindo em cetamina 9 mg / ml de xilazina e 1mg/ml) por 10 g de peso corporal por via intraperitoneal usando um 1 ml, 27G ½ &quot;seringa de tuberculina. </li><li> Prep rato para a cirurgia: 1) barbear pescoço de rato (de linha da mandíbula ao topo do esterno e para os braços), 2) esfregar área cirúrgica três vezes com chorhexadine quadrados gaze embebida, 3) esfoliação último feito com betadine gaze embebida, 4 ) aplicar suavemente pomada para evitar que os olhos sequem. </li><li> Verifique pedal reflexo para garantir rato está adequadamente sedado. </li><li> Coloque o animal em decúbito dorsal sobre uma barreira de campo estéril descartável no âmbito de dissecação e garantir o animal no lugar com fita de tecido. </li><li> Esfrega as mãos e os fingernails em seguida, colocar luvas cirúrgicas estéreis. </li><li> De uma forma estéril, a cirurgia aberta embalar e organizar instrumentos. </li><li> Coloque cortina estéril sobre animal, deixando apenas sítio cirúrgico exposto. </li></ol> 3. O acesso cirúrgico à tireóide e injeção de células <ol><li> Usando um estéril, bisturi descartável, fazer uma incisão longitudinal de 1 a 1,5 centímetros ao longo da linha média do pescoço. </li></ol> Nota: Desvio da linha média complica mais profundo corte de acesso à traquéia. Bastante incisão precisa mediana permite brincar e cortar o tecido membranoso segurando glândulas salivares esquerdo e direito juntos e reduz a chance de entalhar ou cortar grandes artérias. <ol start="2"><li> Faça uma segunda incisão nos músculos da cinta ao redor da traquéia, em seguida, puxe o lado direito do músculo incisão para o lado para expor a glândula tireóide direita. </li><li> Hemostats podem ser usadas neste ponto para segurar a camada de músculo umparte de fácil acesso para a glândula tireóide (Figura 1). </li></ol> Nota: Como alternativa, se o procedimento realizado por duas equipes cirúrgicas, a camada muscular pode simplesmente ser detido com uma pinça, enquanto uma seringa injetável pronto é entregue ao cirurgião pela equipe auxiliar. <ol start="4"><li> Lentamente, injetar 10 ml de suspensão de células na glândula tireóide direita usando um 31G 5/16 &quot;seringa de insulina, em seguida, retire cuidadosamente a agulha. </li></ol> 4. Fechamento da ferida cirúrgica e recuperação Rato <ol><li> Camada muscular da sutura com material de sutura 6.0 usando um modelo de sutura contínua ou interrompida. </li><li> Costure a pele da mesma forma. </li><li> Aplique uma camada de pomada antibiótica tripla directamente sobre o local da incisão. </li><li> Permitir animal a se recuperar em decúbito dorsal sobre almofada de aquecimento quente. Uma vez que animal pode atingir decúbito esternal sem ajuda, ele pode ser colocado de volta com outros ratos. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Acompanhamento pós-operatório e coleta de tecido <ol><li> Verifique o local da incisão e de saúde geral do animal diariamente durante uma semana após a cirurgia, em seguida, verifique uma vez por semana. Se as suturas são ainda intactas após 14 dias, elas são removidas. </li></ol> Nota: Os animais que apresentem sinais de declínio da saúde (por exemplo, perda de peso substancial, cabelo desalinhado, dificuldade para respirar) devem ser sacrificados e os tecidos coletados. <ol start="2"><li> Uma vez que os ratos chegaram a um pós-operatório ponto de tempo pré-determinado, administrar cetamina / xilazina como descrito acima para sedar. </li><li> Perfundir animais intracardially e colheita da tireóide / traquéia e outros tecidos de interesse (não descrito em detalhes aqui). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Em nosso modelo, os animais demonstraram a metástase do tumor da tireóide e doenças relacionadas angústia e caquexia respiratória por quatro semanas após a injecção. Tal como acontece com a maioria dos outros modelos ortotópico utilizando entrega injetável de uma suspensão de células, a injeção dentro dos tecidos circundantes e vazamentos pós-injeção que se espalha além da meta é possível. Com isso dito, um desconhecido potencial reconhecível produzido por este processo é o efeito da exposição fora do alvo de metástases não relacionados com a doença ou complicações. Esta é uma preocupação geral, com a maioria dos transplantes xenographic, independentemente da doença a ser investigada. No entanto, as consequências não intencionais de metástase pode ser significativamente minimizado garantindo todo o bisel da ponta da agulha penetrou a membrana que cobre confortavelmente a glândula da tiróide e expulsando-se lentamente a suspensão celular. Se forem observadas fugas durante ou após a injecção, os animais podem ser omitidas a partir do estudo. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; É essencial que os animais são perfundidos, antes da colheita da tiróide / traqueia e outros tecidos. As vantagens são duplas, 1) as células vermelhas do sangue são eliminadas e não atravancar espécimes histológicos e 2) a morfologia do tecido e integridade são preservados. Além disso, ressecado tireóide / traqueia, que têm uma massa tumoral anexado ou estão sepultadas dentro dela devem ser cortados de uma forma que marcos anatômicos podem ser identificados antes de serem incorporados para a preparação histológica. Isto irá reduzir drasticamente o tempo de preparação de amostras. Neste relatório nós descrevemos o crescimento local e invasão de tumor de tireóide avançado após a injeção ortotópico de células ATC. ATC metástase pode ser investigada por análise de preparações histológicas de outros tecidos, usando manchas histológicas convencionais, tais como hematoxilina e eosina, ou por imuno-histoquímica de células ou utilizando marcadores relevantes patologia. Este sistema pode ser desenvolvido por genetically modificar células de cancro da tiróide com os repórteres de fluorescência de modo a que imagens ao vivo pode ser usado para monitorar a metástase e a eficácia dos tratamentos terapêuticos.

<table><tbody><tr><td>Meios de cultura celular RPMI 1640</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>Os meios e aditivos utilizados dependem da linha celular</td></tr><tr><td>TC10 Contador Celular Automatizado</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps, Serrilhado; Ligeira curva, 4"</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi descartável, No. 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas Olsen Hegar - 4 &frac12; " delicado serrilhado</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 nylon preto monofilamento sutura</td> Almofada de Aquecimento <td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>, reutilizável, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fita de pano, 1" X 10 jardas</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>Para conter rato anestesiado</td></tr><tr><td>Cortador de Amendoim/Aparador</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>Para remover pêlos do local cirúrgico</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td><td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>Pomada oftálmica Petrolatum</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 gaze, 12-ply</td><td>Butler Animal Health Supply</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>Campo Estéril, Barreira, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Drapes (CSR Wrap)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12; " agulha</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16" agulha</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td> Solução <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td>de<td>cetamina (9 mg/ml) / xilazina (1 mg/ml)</td></tr><tr><td>Pomada</td><td></td><td></td><td></td> antibiótica tripla</tr></tbody></table>

um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma anaplásico da tiróide

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Vários tipos de modelos animais de carcinomas humanos terem sido estabelecidas, incluindo xenoenxerto subcutâneo e implante ortotópico de células de cancro em ratinhos imunodeficientes. Modelos subcutâneos xenoenxerto ter sido valioso para a seleção e avaliação de novos tratamentos terapêuticos pré-clínica. Há um número de vantagens de se utilizar um modelo subcutâneo: 1) rápida, 2) reproduzível e 3) estabelecimento do tumor, o crescimento, e resposta a agentes terapêuticos podem ser monitorizados por meio de inspecção visual. No entanto, evidências substanciais lançou luz sobre as insuficiências da subcutâneos modelos de xenoenxerto 1-3. Por exemplo, tratamentos medicinais que demonstram propriedades curativas em modelos subcutâneos xenoenxerto muitas vezes não têm impacto notável sobre a doença humana. O microambiente do site do transplante xenographic ou injeção está no cerne desta divergência. Modelos de xenoenxerto tumor ortotópico prestar um serviço mais biolomacologicamente contexto relevante para estudar a doença. As vantagens da implantação de células ou tecidos doentes, em sua origem equivalente anatómicos dentro de um animal hospedeiro inclui um local adequado para as interacções do tumor-hospedeiro, o desenvolvimento de metástases e doenças relacionadas com a capacidade de analisar a influência específica do local sobre as soluções terapêuticas experimentais. Portanto, os modelos de xenoenxerto ortotópico abrigar muito mais valor clínico, porque intimamente reproduzir doenças humanas. Por estas razões, um certo número de grupos têm aproveitado num modelo ortotópico de cancro da tiróide como uma ferramenta de investigação 4-7. Aqui, descrevemos uma abordagem que estabelece um modelo ortotópico para o estudo de carcinoma anaplásico (CTA), que é altamente invasivo, resiste ao tratamento, e é praticamente fatal em todos os pacientes diagnosticados. ATC células cultivadas são preparados como uma suspensão celular dissociada numa solução que contém uma matriz de membrana basal. Um volume pequeno é lentamente injected na glândula tireóide direita. Aparência geral de saúde e os ratinhos são monitorizados para assegurar complicações pós-operatórias e mínimo para avaliar penetrância patológica de cancro. Ratos são sacrificados em 4 semanas, eo tecido é coletada para análise histológica. Os animais podem ser tomadas em pontos temporais mais tarde para examinar mais de progressão avanço da doença. A produção deste modelo ortotópico rato estabelece uma plataforma que realiza dois objetivos: 1) a nossa compreensão da ATC patologia, e 2) tela agentes terapêuticos atuais e futuros para a eficácia no combate à ATC.

Detectamos 19 tumores da tiróide invasivas de um total de 20 ratinhos injectados com células ATC após 4 semanas. No exemplo mostrado na Figura 2A, os ratinhos receberam uma injecção ortotópico de 5X10 5 ATC células cultivadas sob condições anexas, apresentam infiltração significativa de células cancerosas para a tiróide às 4 semanas após a injecção. A natureza das células ATC invasores com uma característica de células fusiformes e células-gigante e médio porte, com citoplasma eosinofílico e núcleos grandes foi verificada por hematoxilina e eosina (H &amp; E) coloração. Para fins de comparação, da tiróide e da traqueia a partir de um animal de controlo não injectada é mostrado na Figura 2B. Folículos do animal uninjected exibir fim, ainda solto, de associação e têm essencialmente uma morfologia round. Devido ao pequeno tamanho da tiróide e utilização do fornecimento de injectável, podem surgir resultados não intencionais. Figura 3A ilustra omais frequentemente observados, o que é o desenvolvimento de uma massa tumoral de fora, mas não abrangendo a tiróide. Isso é mais do que provável que, devido à penetração da agulha através e além da tireóide quando as células são expulsos. Ocasionalmente, os ratinhos que apresentavam nenhum crescimento do tumor, tanto grosseiramente e histologicamente, são detectadas como mostrado na Figura 3B. Ausência de desenvolvimento de tumor detectável pode ser causada por expulsão da suspensão de células a partir do local de injecção e de difusão para os tecidos vizinhos e cavidades. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. Expor a tireóide. Etiquetas indicam as glândulas da tireóide direita e esquerda, ladeando a traquéia. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. O exame histológico do crescimento do tumor e, emvasion após a injeção de tireóide bem sucedida. amostras de tecidos foram seccionados ao longo do plano coronal. A) Imagem tomada em 200X de rato apresentando crescimento substancial tumor com células fusiformes característicos e células-gigante e médio porte, com citoplasma eosinofílico e núcleos grandes em HE ( H &amp; E) mancha Tu indica a lesão primária a partir da qual as células do tumor invadir a tireóide B) traquéia e tireóide de animais controle (imagem tirada em 100X) Tu, tumores;... S, músculo liso; Tr, traquéia; Thy, glândula tireóide. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Resultados não intencionais de injeção ortotópico. Amostras de tecidos foram seccionados ao longo do plano coronal. A) o crescimento do tumor periférico sem crescimento evidente na thyroi(seta preta, imagem tomada no 100X). B) exame d Falta de detecção do tumor em bruto (não mostrado) ou histológico (imagem tirada em 50X). Thy, glândula tireóide.

Geração de um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma anaplásico de tireóide é descrito aqui. Essa técnica emprega colocação cirúrgica de células de câncer de tireóide anaplásico humanos na tireóide de ratos imunodeficientes, criando assim um ambiente mais clinicamente relevante para estudar a progressão da doença, bem como tela de intervenções terapêuticas inovadoras.

Um modelo de camundongo ortotópico de Carcinoma anaplásico da tiróide

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a colocação cirúrgica de células anaplásicas humanas, carcinoma de tireoide ou TC na tireoide, a fim de estabelecer um modelo ortotópico de camundongo xenoenxerto. Isso é feito primeiro cultivando e colhendo células TC. Depois de preparar o camundongo para a cirurgia, exponha a tireoide por duas incisões longitudinais sucessivas no pescoço e injete as células A TC lentamente na glândula tireoide direita.O passo final é fechar as incisões com suturas e permitir que o camundongo se recupere. Em última análise, o exame histológico de amostras de tecidos ressecados é usado para mostrar o crescimento e a invasão do tumor sob uma variedade de condições. A principal vantagem desta técnica sobre os métodos existentes, como o transplante subcutâneo de xenoenxerto, é que o transplante ortotópico coloca as células TC em seu nicho biológico e replica de perto a progressão da doença e a patologia como ocorre em humanos.Este método pode ajudar a responder a questões-chave, como determinar os mecanismos biológicos da agressividade do câncer de tireoide. Comece este procedimento cultivando a linha celular humana A TC TJ 11 T em seis placas de cultura de poço usando meio suplementado RPMI 1640 completo um dia antes da colheita da célula, quando as células estiverem 70 a 80% de descongelamento confluente, 0,01 mililitros de gel principal a quatro graus Celsius. Colha as células usando tripsina assim que se tornarem 80 a 90% confluentes depois que as células forem peletizadas, aspire o meio e ressuspenda as células em dois mililitros de meio RPMI 1640 suplementado para cada placa de seis poços colhida.Em seguida, determine a densidade celular misturando a suspensão celular um a um com 0,4% de corante azul Triam para determinar a densidade celular usando um contador de células automatizado TC 10. Calcule o volume da suspensão celular necessário para injetar 500.000 células por camundongo. Certifique-se de que as células adequadas estejam disponíveis para a implantação, calculando o dobro do número de implantes planejados.Transferir o volume necessário de suspensão celular para um tubo cónico de 15 mililitros. Em seguida, centrifugar a 200 Gs durante quatro minutos à temperatura ambiente. Em seguida, aspire o meio e ressuspenda as células a 100 milhões de células por mililitro em meio completo suplementado com RPMI 1640.Em seguida, transfira as células para um tubo de 1,6 mililitro. Adicione um volume de gel matri e misture delicadamente, pipetando lentamente para dentro e para fora. Coloque a suspensão da célula no gelo até que seja necessário.Primeiro, esterilize a zona cirúrgica, que inclui o escopo de dissecação e a área circundante, limpando todas as superfícies com etanol a 70%. Em seguida, prepare a área de recuperação ligando as lâmpadas de aquecimento e colocando absorventes estéreis. Anestesie o camundongo e prepare-o para a cirurgia, raspando primeiro a região do pescoço do camundongo da mandíbula ao topo do esterno e para cada braço.Em seguida, estrague a área cirúrgica três vezes, alternando quadrados de gau embebidos em clorexidina e etanol. Em seguida, uma última vez com gaze embebida em Betadine. Aplique também suavemente pomada para os olhos para evitar que os olhos sequem.Neste ponto, verifique o reflexo do pedal para garantir que o mouse esteja adequadamente sedado. Em seguida, coloque o reclinamento dorsal do camundongo em uma barreira de campo estéril descartável. Sob o escopo de dissecação, prenda o mouse no lugar com fita adesiva.Em seguida, esfregue bem as mãos e as unhas e coloque luvas cirúrgicas estéreis de forma estéril, abra o pacote cirúrgico e arrume os instrumentos. Por fim, coloque uma cortina estéril sobre o mouse, deixando apenas o local da cirurgia exposto. Comece fazendo uma incisão longitudinal de um a 1,5 centímetro ao longo da linha média da garganta usando um bisturi descartável estéril.Não se desvie da linha média, pois isso aumentaria a chance de cortar ou cortar grandes artérias. Faça uma segunda incisão nos músculos da cinta ao redor da traqueia. Em seguida, puxe o lado direito do músculo inciso para o lado, expondo a glândula tireoide direita.Peça a um assistente que entregue a seringa. Injete-o lentamente na glândula tireoide direita usando uma seringa de insulina de calibre 31. Em seguida, remova suavemente a sutura da agulha junto com a camada muscular com seis materiais de sutura de monofilamento de náilon usando um estilo de sutura interrompido.Finalmente, costure a pele da mesma maneira no pós-operatório. Aplique uma camada de pomada antibiótica tripla diretamente sobre o local da incisão. Permita que o rato recupere o dorsal reclinado sob uma lâmpada.Uma vez que o camundongo pode atingir o decúbito esternal sem ajuda, ele pode ser colocado de volta com outros camundongos em sua gaiola. Verifique o local da incisão e a saúde geral do camundongo diariamente por uma semana após a cirurgia. Em seguida, verifique-o uma vez por semana.Se a qualquer momento o camundongo apresentar sinais de declínio da saúde, ele deve ser sacrificado e seus tecidos coletados. Uma vez que os camundongos tenham atingido um ponto de tempo pós-operatório predeterminado, anestesiar com cetamina e xilazina e perfundir o animal tardiamente com tampão, seguido de fixador, depois colher os tecidos e processá-los para histologia. A tireoide e a traqueia de um animal controle não injetado são mostradas aqui com folículos de coloração de hematina e eosina, exibem uma associação próxima, mas frouxa, e têm morfologia essencialmente redonda.Em contraste, os camundongos que receberam uma injeção ortotópica de 500.000 células A TC exibem infiltração significativa de células cancerígenas na tireoide quatro semanas após a injeção. A natureza das células invasoras mostra células fusiformes características e células de tamanho médio a gigante com citoplasma eosinofílico e núcleos grandes. Devido ao pequeno tamanho da tireoide e ao uso de administração injetável, podem surgir resultados não intencionais, como o desenvolvimento de uma massa tumoral fora, mas não abrangendo a tireoide.Isso se deve à penetração da agulha através da tireoide quando as células são expelidas Ocasionalmente, camundongos que não apresentam crescimento tumoral, tanto macroscópico quanto histologicamente, são detectados como mostrado aqui. A ausência de desenvolvimento de tumor detectável é causada pela expulsão da suspensão celular do local da injeção para os tecidos e cavidades vizinhos Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em 20 minutos. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como gerar seu próprio modelo ortotópico para carcinoma anaplásico de tireoide.Acessando cirurgicamente a glândula tireoide e injetando células C cultivadas.

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Duas técnicas podem ser usadas para estabelecer esse modelo: injeção de uma suspensão de células de câncer na parede cecal ou transplante de um pedaço de tumor subcutâneo para o ceco. Este modelo é útil para estudar a progressão natural do câncer colo-retal e testes de novos agentes terapêuticos contra o câncer colorretal.

Modelo rato ortotópico de câncer colorretal

Um modelo ortotópico de câncer de ovário seroso em camundongos imunocompetentes para In vivo Imaging Tumor e Monitoramento de Tumor respostas imunes

O vídeo demonstra a técnica de inoculação ortotópica do câncer de mama em um modelo de camundongo. Esta técnica produz uma alta taxa de tumorigênese com menos variabilidade no tamanho e forma do tumor em comparação com a injeção subcutânea ou não cirúrgica.

Injeção ortotópica: implante de células cancerígenas específicas do tecido em um camundongo adulto

Este vídeo descreve o procedimento de inoculação ortotópica de células de câncer de tireoide na glândula tireoide de modelos de camundongos, que pode servir como uma plataforma valiosa para avaliar a carcinogênese e descobrir possíveis estratégias de tratamento.

Inoculação ortotópica de células de câncer de tireoide em tireoide murina: um procedimento para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer de tireoide

Um modelo de tumor primário do cancro da mama ortotópico e remoção cirúrgica do tumor primário para prolongar a vida do rato para gerar metástase espontânea são descritos. O crescimento do tumor e progressão são monitorados e quantificado por imagens de fluorescência da luciferase.

Um modelo de camundongo ortotópico de câncer de mama espontânea metástase

O câncer de próstata é a segunda causa mais comum de mortes relacionadas ao câncer nos Estados Unidos. Um modelo de câncer ortotópico fornece uma abordagem útil para entender a biologia do câncer de próstata e avaliar a eficácia dos regimes terapêuticos. Este protocolo descreve as etapas detalhadas necessárias para estabelecer um modelo ortotópico de camundongo com câncer de próstata.

Pré-clínica Ortotópico Modelo murino de cancro da próstata humano

No contexto clínico, pacientes com câncer pancreático localizado serão submetidos à pancreatectomia seguida de tratamento adjuvante. Este protocolo aqui relatado visa estabelecer um método seguro e eficaz de modelagem deste cenário clínico em camundongos nus, através da implantação ortotópica de câncer pancreático seguido de pancreatectomia distal e esplenectomia.

Um modelo de rato resemcional ortotópico de câncer pancreático

Aqui, apresentamos um pipeline padrão para a obtenção de tumores ATC murinos por modelos espontâneos de camundongos geneticamente modificados. Além disso, apresentamos a dinâmica tumoral e informações patológicas sobre as lesões primárias e metastizadas. Esse modelo ajudará os pesquisadores a entender a tumorigênese e facilitará a descoberta de drogas.

Modelo Murino Espontâneo de Câncer Anaplásico de Tireoide

Vários tipos de modelos animais de tireoidite de Hashimoto foram estabelecidos, assim como a tireoidite autoimune espontânea no camundongo NOD. Camundongos H-2h4 são um modelo simples e confiável para indução de HT. Este artigo descreve essa abordagem e avalia o processo patológico para uma melhor compreensão do modelo murino de TAA.

Geração de um modelo de tireoidite autoimune espontânea em camundongos

O presente protocolo descreve a ultrassonografia de alta frequência para visualização de toda a glândula tireoide de camundongos e monitoramento do crescimento do carcinoma anaplásico de tireoide.

Ultrassonografia de Alta Resolução na Análise de Tumores Ortotópicos ATC em Modelo de Camundongo Geneticamente Modificado

O presente protocolo estabelece e caracteriza um modelo de xenoenxerto derivado do paciente (PDX) de carcinoma anaplásico de tireoide (ATC) e carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP), uma vez que os modelos PDX estão rapidamente se tornando o padrão no campo da oncologia translacional.

Estabelecimento e Caracterização de Modelos de Xenoenxerto Derivado de Pacientes de Carcinoma Anaplásico de Tireoide e Carcinoma Espinocelular de Cabeça e Pescoço

Aprenda a criar um modelo ortotópico de carcinoma anaplásico da tiróide em camundongos, injetando células humanas na glândula tireoide. Este método replica a progressão da doença humana para estudos oncológicos.

Um modelo de camundongo ortotópico de Carcinoma anaplásico da tiróide

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