Name: Modelo Murino de Cicatrização (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 39 s
Description: Aprenda a criar um modelo murino de cicatrização com tala de silicone que previne contração e promove epitelização, proliferação e angiogênese em camundongos. Este método permite testes reprodutíveis de agentes terapêuticos.

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Os autores gostariam de agradecer o apoio financeiro do Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica (NHMRC) da Austrália (Project Grant ID: 632512). Louise Dunn foi apoiada por um NHMRC início de carreira Fellowship e Christina Bursill por um Heart Foundation Career Development Fellowship Nacional.

1. Preparação de talas e curativos oclusivos <ol><li> Esboço 10 círculos mm em 0,5 milímetros de espessura folhas de silicone e usar uma tesoura ou um soco biópsia para criar discos de silicone. </li><li> Centro de uma biópsia de punção 5 mm no centro do círculo de 10 mm e pressiona firmemente para criar um orifício para formar um &quot;doughnut&quot; semelhante a disco que irá ser utilizada como uma tala. </li><li> Esboço 10 círculos milímetros em um curativo oclusivo transparente como Opsite e usar a tesoura para criar curativos circulares. </li></ol> 2. Animais Experimentais <ol><li> Obter a aprovação do Comitê de Ética Animal para todos os experimentos que serão realizados. </li><li> Use 8 semanas de idade (22-26 gramas) camundongos C57BL/6J machos de um criador comercial (por exemplo, os laboratórios Jackson). </li><li> Manter ratinhos em condições-padrão de 21 ° C e uma hora ciclo claro-escuro de 12, com livre acesso a comida e água. </li><li> (Opcional): A diabetes pode ser induzida em 6 a 7 semanas de idade por um bolus intraperitoneal injecção de 165 mg / kg de estreptozotocina (em tampão citrato, pH 4,5), com hiperglicemia confirmada pelo monitoramento de glicose no sangue regular (accuchek glicosímetro). Camundongos diabéticos podem ter poliúria e por isso a sua cama pode necessitar ser alterado com mais freqüência para eliminar a umidade e seus pesos devem ser cuidadosamente monitorizados. </li></ol> 3. Anestesia e Preparação operativo <ol><li> Induzir a anestesia geral, utilizando 5% de isoflurano em 100% de oxigénio (caudal de 1 L / min) e manter a anestesia utilizando 1-3% de isoflurano. </li><li> Garantir os reflexos profundos pedal do mouse são suprimidas e coloque o mouse na posição prona. </li><li> Preparar a região operativa através da remoção da pele com cortadores a partir da base do pescoço, a 3 cm na parte inferior da volta e entre as duas omoplatas. </li><li> A aplicação de luz de creme depilatório pode ser aplicado durante o período de 2 min. Compressas de gaze molhada pode ser utilizado para garantir que todo o creme e pele remanescente é removido. </li><li> Limpe a pele com umalgodão embebido em álcool e duas aplicações de 10% iodopovidona (Betadine) e armar o mouse. </li></ol> 4. Excisão e Splinting de Wound <ol><li> Representação esquemática do modelo de cicatrização de murino é apresentada na Figura 1. </li><li> Usar uma solução estéril 4 milímetros biópsia de apresentar dois padrões circulares para a ferida em ambos os lados da linha média do rato ao nível dos ombros (ver as figuras 2a-2b). </li><li> Utilização fórceps serrilhados para levantar a pele, no meio do contorno da íris e tesouras para criar uma ferida de espessura total, que se prolonga através do tecido subcutâneo (Figuras 2c-2d), incluindo o panículo carnoso (figura 2e) e, em especial sobre o consumo da parte circular de tecido. </li><li> Repita o processo para a ferida do outro lado da linha média (Figura 2f). </li><li> Remover o revestimento protector plástico de cada lado da tala de silicone. </li><li> Aplicar cyanoacrylate adesiva (por exemplo, Super Cola ou Krazy Glue) para um lado de uma tala de silicone. </li><li> Centre a tala sobre a ferida (Figura 2g) e ancorar o splint com interrompidos 6-0 nylon para garantir o posicionamento (Figura 2h). </li><li> Repetir o processo de imobilização sobre a outra ferida. </li><li> Se necessário, neste ponto do tempo, aplicar o composto terapêutico a ser testado (até 100 ul) para uma ferida (Figura 2i), e o controlo do veículo para o outro. </li><li> Cobrir a ferida com uma compressa oclusiva transparente (por exemplo, Opsite) (Figura 2j-2k). </li><li> Uma régua é colocada abaixo das talas e uma fotomicrografia tomada (Figura 2d). </li></ol> 6. Gestão de pós-operatório <ol><li> Carprofeno (5 mg / kg) é administrado uma vez por dia por meio de injecção sub-cutânea para o alívio da dor pós-operatória. </li><li> Após a cirurgia, os animais são colocados em gaiolas individuais e mantidos sob calor mats até que esteja totalmente recuperado. </li><li> Monitorar os animais duas vezes por dia para as manifestações de dor e perda de peso. Não observamos aspectos comportamentais graves de dor ou perda de peso. </li></ol> 7. Medição e Tratamento de Feridas <ol><li> A ferida pode ser medido diariamente. </li><li> Induzir a anestesia geral, utilizando 5% de gás isoflurano (caudal de 1 L / min), e depois assegurar os reflexos profundos sensoriais do rato são suprimidas utilizando 1-3% de isoflurano. </li><li> Delicadamente descascar o curativo oclusivo com uma pinça. </li><li> Use pinças cirúrgicas para medir o diâmetro da ferida. Tomamos a média de três medições ao longo de X, Y e Z (Figuras 2m-2o), bem como uma fotomicrografia para futura referência (Figura 2p). </li><li> Opcional: Neste momento o animal pode ser avaliada para a perfusão de sangue através de um gerador de imagens Doppler a laser (figura 2q). </li><li> Re-aplicação do composto terapêutico e do controlo do veículo pode ser desemmed neste momento. </li><li> Um curativo oclusivo transparente limpo é então re-aplicado e os animais mantidos aquecidos até que esteja totalmente recuperado. </li><li> Nota: se talas não são protegidos adequadamente a ferida será prontamente contratar (Figura 2R). </li></ol> 8. Análise Histológica <ol><li> Eutanásia dos ratos após 10 dias, com uma overdose de anestesia. </li><li> Utilizando uma pinça e uma lâmina de bisturi remover as suturas e cuidadosamente descascar a tala. </li><li> Use uma tesoura íris para criar uma largura, a excisão completa em torno e sob a área da ferida e incubar o tecido em 4% de paraformaldeído em tampão fosfato salino (PBS) a 4 ° C durante a noite. </li><li> Transferência de tecido para 17% de sacarose na solução de PBS durante mais 24 horas a 4 ° C, em seguida, remover o excesso de solução, esfregando cuidadosamente sobre o tecido e em lugar outubro composto e congelar a -80 ° C. </li><li> Hematoxilina-eosina pode ser utilizado para visualizar a estrutura da ferida e gap epitelial. Neovascularisation pode ser avaliada por análises de imuno-histoquímica para determinar o número de capilares (utilizando o factor de von Willebrand). </li></ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+essentials%3A+let+there+be+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regen%22%5BJournal%5D)">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).</li>
<li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
<li>Grose, R., Werner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound-healing+studies+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Wound-healing studies in transgenic and knockout mice.</a> Mol. Biotechnol. 28, 147-166 (2004).</li>
<li>Reid, R. R., Said, H. K., Mogford, J. E., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+wound+healing%3A+pursuing+surgical+models+in+transgenic+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Surg%22%5BJournal%5D)">The future of wound healing: pursuing surgical models in transgenic and knockout mice.</a> J. Am. Coll. Surg. 199, 578-585 (2004).</li>
<li>Fang, R. C., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+wound+healing%3A+utility+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Animal models of wound healing: utility in transgenic mice.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 989-1005 (2008).</li>
<li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 969618(2011).</li>
<li>Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair. 12, 485-492 (2004).</li>
<li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li>
<li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 13505-13510 (2009).</li>
<li>Raza, A., Bayles, C., Biebel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+Bacterial+Growth+and+Moisture+Handling+Properties+of+Transparent+Dressings%3A+3M+Tegaderm+Transparent+Dressing%2C+3M+Tegaderm+HP+Transparent+Dressing%2C+and+Opsite+IV3000+Transparent+Dressing%5BTitle%5D)+AND+%22Smith+and+Nephew+Report%22%5BJournal%5D)">Investigation of Bacterial Growth and Moisture Handling Properties of Transparent Dressings: 3M Tegaderm Transparent Dressing, 3M Tegaderm HP Transparent Dressing, and Opsite IV3000 Transparent Dressing.</a> Smith and Nephew Report. , (1998).</li>
<li>Chung, T. Y., Peplow, P. V., Baxter, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Testing+photobiomodulatory+effects+of+laser+irradiation+on+wound+healing%3A+development+of+an+improved+model+for+dressing+wounds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Photomed.+Laser+Surg%22%5BJournal%5D)">Testing photobiomodulatory effects of laser irradiation on wound healing: development of an improved model for dressing wounds in mice.</a> Photomed. Laser Surg. 28, 589-596 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este é um modelo experimental murino de cicatrização de feridas cutâneas. Uma característica importante deste modelo é o uso de tampões de silicone para evitar a contracção da ferida de modo que pode ocorrer a re-epitelização e formação de tecido de novo, tornando-se o processo semelhante ao que ocorre em seres humanos. Este modelo é versátil e pode ser utilizado para avaliar a cicatrização de feridas em ambientes fisiológicos e patológicos (por exemplo, diabetes mellitus). O modelo pode também ser utilizado pa...

Cicatrização de feridas prejudicada é responsável pela morbidade e mortalidade em todo o mundo significativo, isto é particularmente verdadeiro para pessoas que sofrem de diabetes mellitus 1,2. Nos seres humanos, a cicatrização de feridas é um processo contínuo de processos, em que há sobreposição significativa 3. Imediatamente seguintes processos ferindo, inflamatórias são iniciadas. As células inflamatórias liberam fatores que incentivam os processos de proliferação celular, migração e angiogênese. Depois de re-epitelização e formação de tecido novo, há uma fase de remodelação, que implica tanto a apoptose ea re-organização das proteínas da matriz, como o colágeno. A complexidade da cicatrização da ferida não pode actualmente ser replicado in vitro, e isto requer o uso de modelos animais. Até à data, os estudos de cicatrização de feridas têm-se limitado a modelos grandes animais, tais como porcos, para assegurar que os processos de cura são equivalentes e comparáveis ​​aos seres humanos. No entanto, usando o grande animals de tais estudos pode ser difícil para a casa e nem sempre são 4 prático. O rato de laboratório representa um modelo animal económico que pode ser facilmente manipulado geneticamente para investigação mecanicista 5-7. No entanto, as feridas cicatrizar murino diferente ao ser humano, principalmente devido ao processo de contracção 8. Isto é, em parte, devido a uma grande camada de músculo estriado subcutânea chamado o panículo carnoso que é praticamente ausente em humanos. Em ratinhos, esta camada muscular permite que a pele se mover independentemente dos músculos profundos e é responsável pela rápida contracção da pele a seguir ferimento. Para superar esta limitação, a cicatrização de feridas de murino pode ser adaptado para replicar a cicatrização de feridas humana por utilização de uma tala (Figura 1) 8,9. Neste vídeo demonstramos o modelo murino ferida splinted que elimina a contração da ferida e mais se aproxima dos processos humanos de re-epithelialização e formação de tecido novo. Neste modelo, duas excisões de espessura total, que incluem o panículo carnoso são criadas no dorso, uma em cada lado da linha média do rato. A tala de silicone é colocado em torno da ferida, com o auxílio de adesivo e, em seguida, a tala protegido com suturas interrompidas. Cada rato actua como o seu próprio controlo, com uma ferida a receber tratamento e do outro veículo de controlo, reduzindo assim o número de animais. Após aplicações tópicas, um curativo oclusivo transparente é aplicada. O penso pode ser removido quando necessário para outras aplicações tópicas e / ou para a medição da área da ferida 10,11. Após a conclusão de experiências, o fechamento da ferida, a arquitectura morfológica e grau da neovascularização pode ser avaliada por imuno-histoquímica. Este económico e fácil de realizar modelo também pode ser utilizado para avaliar a cicatrização de feridas, no contexto da diabetes mellitus ou outros pathophysiologies.

<table><tbody><tr><td>Folha de silicone press-to-seal 0,5 mm de espessura</td><td>Invitrogen</td><td>P18178</td><td>Corte em "rosquinhas" com diâmetro externo de 1cm externo, 0,5 cm de diâmetro interno</td></tr><tr><td>Punção de biópsia 5 mm</td><td>Steifel</td><td>BC-B1-0500</td><td>Para delinear a área da ferida a ser excisada</td></tr><tr><td>Tesoura Vannas 8,5 cm curvada</td><td>World Precision Instruments </td><td>501232</td><td>Para incisão e excisão de feridas</td></tr><tr><td>Dumonte #7b fórceps, 11 cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>501302</td><td>Para agarrar a pele ao criar incisão e excisão de pele </td></tr><tr><td>Pinça Graefe, serrilhada 10cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>14142</td><td>Para ajudar a fixar a tala de silicone à pele</td></tr><tr><td>Porta-agulhas, mandíbulas lisas, curvas, 12,5 cm</td><td>World Precision Instruments</td><td>14132</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Malis, lisa, reta, 12 cm</td><td>Codman e Shurtleff, Inc (J& AMP; J)</td><td>80-1500</td><td>Para suturar os anéis de silicone na pele</td></tr><tr><td>Régua, 0,5 mm de gradação</td><td>n/a</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinças 0,25 mm de gradação</td><td>Duckworth e Kent</td><td>9-653</td><td>Para medir a área da ferida</td></tr><tr><td>Opsite Película adesiva transparente FlexiFix. 10 cm x 1 m</td><td>Smith & Sobrinho</td><td>66030570</td><td></td></tr><tr><td>Rimadyl (Carprofeno)</td><td>Pfizer</td><td>462986</td><td></td></tr></tbody></table>

modelo murino de cicatrização

Murine Model of Wound Healing

A cicatrização de feridas e reparação são os processos biológicos mais complexas que ocorrem na vida humana. Após lesão, múltiplos caminhos biológicos se tornam ativadas. Cicatrização de feridas prejudicada, o que ocorre em pacientes diabéticos, por exemplo, pode levar a resultados desfavoráveis ​​graves, como amputação. Existe, portanto, um impulso crescente de desenvolver novos agentes que promovem a cicatrização de feridas. O teste destes foi limitado a grandes modelos animais, tais como porcos, os quais são muitas vezes impraticável. Ratos representam o modelo pré-clínico ideal, uma vez que são económicos e passíveis de manipulação genética, a qual permite uma investigação mecanicista. No entanto, a cicatrização de feridas num ratinho é fundamentalmente diferente da dos seres humanos, uma vez que ocorre primeiramente através de contração. O nosso modelo murino supera esta incorporando uma tala em torno da ferida. Por imobilização da ferida, o processo de reparação é, então, dependentes de epitelização, proliferação celular e angiogênese, que de perto espelhar aprocessos biológicos de cicatrização de feridas humanas. Embora requerendo consistência e cuidado, este modelo murino não envolvem técnicas cirúrgicas complicadas e permite o teste de agentes promissores robusta que pode, por exemplo, promover a angiogénese ou inibir a inflamação. Além disso, cada rato actua como o seu próprio controlo de duas feridas são preparados, possibilitando a aplicação de tanto o composto de teste e o veículo de controlo no mesmo animal. Em conclusão, foi demonstrado um modelo prático, fácil de aprender e robusta de cicatrização da ferida, o que é comparável com a dos seres humanos.

Uma curva de encerramento da ferida é determinada através do cálculo da média do diâmetro da ferida e expressando os resultados como uma percentagem, ou seja, 100 - (Dia 0 diâmetro / diâmetro Dia X). Nesta experiência, um composto terapêutico (ou de controlo do veículo) foi aplicada diariamente à ferida. O composto terapêutico fechamento da ferida grandemente acelerada (Figura 3). É importante notar que as talas devem ser mantidos durante o período de ensaio, como a remoção de tampões conduzirá...

Um modelo murino de cicatrização de feridas cutâneas que podem ser utilizados para avaliar compostos terapêuticos em contextos fisiológicos e patológicos.

Modelo Murino de Cicatrização

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

O objetivo geral deste procedimento é criar uma ferida, que é imobilizada com tala, para impedir a contração e promover a proliferação epitelial e a angiogênese. Isso é realizado primeiramente preparando o dorso e criando duas feridas excisionais de espessura total em ambos os lados da linha média. Em seguida, uma tala é colocada sobre a ferida e fixada com pontos de sutura.Em seguida, a ferida é medida e os tratamentos são aplicados. Por fim, um curativo oclusivo é colocado sobre a ferida e o camundongo é deixado em recuperação. Em última análise, o modelo de cicatrização de ferida excisional cutânea é utilizado para avaliar a ferida, a epitelialização e os processos associados, incluindo proliferação e angiogênese.A principal vantagem desta técnica em relação a outros métodos é que a contração da ferida é prevenida. Isso estimula a proliferação da epitelização e a angiogênese, processos que se assemelham mais ao processo natural de cicatrização da ferida. Em humanos, este método é particularmente útil para avaliar a eficácia de compostos terapêuticos, e como cada camundongo serve como seu próprio controle, reduz-se o número de animais necessários para um estudo.Primeiro, prepare as tiritas e curativos oclusivos para fazer uma tira. Desenhe inicialmente um círculo de 10 milímetros em uma folha de silicone e, em seguida, use uma tesoura ou um furador de biópsia para criar discos de silicone. Em seguida, posicione um furador de biópsia de cinco milímetros no centro do disco de 10 milímetros e pressione firmemente para criar um anel semelhante a uma rosquinha que será usado como tira.Crie curativos circulares do mesmo tamanho usando um curativo oclusivo transparente, como o Opsite. Para começar, confirme a profundidade adequada da anestesia em um camundongo anestesiado. Após remover todos os pelos da área cirúrgica, limpe a pele com aplicações repetidas de Betadine e álcool.Quando estiver pronto, utilize um punch de biópsia estéril de quatro milímetros para fazer o contorno de dois círculos em ambos os lados da linha média do camundongo, na altura dos ombros. Em seguida, use pinças serrilhadas para levantar a pele no centro do contorno e tesoura de íris para criar a ferida. Certifique-se de cortar o tecido subcutâneo, incluindo a panus osis.Resseque o tecido de ambos os lados. Para expor duas feridas circulares. Remova o revestimento plástico protetor de cada lado da tira de silicone e aplique adesivo de cianoacrilato em um dos lados.Centralize a tala sobre a ferida e fixe-a com pontos separados de náilon 6-0. Repita o processo de imobilização na outra ferida. Neste momento, um composto terapêutico pode ser aplicado em uma ferida enquanto a outra é utilizada como controle.Como controle do veículo, coloque uma régua abaixo das tala e tire uma microlfotografia. Cubra a ferida com um dos pedaços circulares de curativo preparados anteriormente. Após administrar um analgésico, permita que o animal se recupere em uma gaiola aquecida.Os animais são monitorados duas vezes ao dia quanto a manifestações de dor e perda de peso. Para medir a ferida, anestesie o animal conforme mostrado anteriormente e remova cuidadosamente o curativo oclusivo com pinça. Utilize um paquímetro cirúrgico para medir o diâmetro da ferida em diversos pontos, obtendo uma média, e tire uma fotomicrografia para referência futura.Neste momento, o animal pode ser avaliado quanto à perfusão sanguínea. Utilizando um imagiador de Doppler a laser, aplique um curativo oclusivo transparente e limpo sobre a ferida e mantenha o animal aquecido até sua completa recuperação. É importante observar que, se as talas não forem fixadas corretamente, a ferida contrair-se-á prontamente após a eutanásia por sobredosagem de anestésico; nesse caso, utilize pinça e lâmina de bisturi para remover os pontos e retire cuidadosamente a tala das feridas.Com tesoura de íris, realize uma excisão ampla e completa ao redor e sob a área da ferida. Após a remoção, fixe o tecido seguindo procedimentos padrão. A coloração com hematoxilina e eosina pode ser utilizada para visualizar a estrutura da ferida e a lacuna epitelial.Além disso, a neovascularização pode ser avaliada por meio de análises imunohistoquímicas para determinar o número de capilares. Uma curva de fechamento da ferida é determinada calculando-se o diâmetro médio da ferida e expressando os resultados como uma porcentagem. Neste exemplo, o composto terapêutico acelerou significativamente o fechamento da ferida em comparação com os controles.Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em 30 minutos se executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante fixar a tala com segurança usando pontos colocados de forma equidistante para manter a consistência entre os experimentos.

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Neste vídeo, descrevemos um procedimento para isolar o leito da ferida induzida por colonoscopia em um momento apropriado para análise molecular detalhada. Essa análise ajuda a entender o processo de cicatrização de feridas em condições inflamatórias do trato gastrointestinal.

Modelo de ferida murina guiada por colonoscopia: um método para isolar o leito da ferida induzida por biópsia do cólon para entender o processo de cicatrização

Descrevemos um não-invasivo na vivo de imagem protocolo que é simplificada e custo-benefício, utilizando o L-012, um analógico-luminol quimioluminescente, para visualizar e quantificar as espécies reativas de oxigênio (ROS) geradas em um modelo do rato excisional ferido.

Na Vivo Imagens de espécies reativas de oxigênio em um Murine ferida modelo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para um ensaio in vitro do risco usando fibroblastos preliminares e para um ensaio in vivo da cicatrização da ferida da pele nos ratos. Ambos os ensaios são métodos diretos para avaliar in vitro e in vivo a cicatrização de feridas.

Ensaio de migração de riscos e câmara de dobras cutâneas dorsal para análise in vitro e in vivo da cicatrização de feridas

Aqui, dois modelos de cicatrização de feridas murinasão são descritos, um projetado para avaliar as respostas de cicatrização celular e citocina e o outro para quantificar a taxa de fechamento da ferida. Esses métodos podem ser usados com modelos de doenças complexas, como o diabetes, para determinar mecanismos de vários aspectos da má cicatrização de feridas.

Avaliação da Cicatrização aguda de Feridas utilizando o Implante de Esponja de Álcool Subcutâneo Subcutâneo Dorsal e Modelos de Ferida de Cauda Excisional.

O objetivo deste estudo foi desenvolver um modelo murino de cicatrização de feridas queimadas. Uma queimadura térmica foi induzida na pele dorsal de camundongos usando um modelo de latão pré-aquecido. Tecido queimado foi desbridado e sobreposto com um enxerto de pele colhido da cauda de um rato doador geneticamente semelhante.

Um modelo murino de uma ferida de queimadura reconstruída com um enxerto de pele aogenética

Este protocolo descreve como gerar feridas excisionais bilaterais e de espessura total em camundongos e como monitorar, colher e preparar as feridas para análise morfométrica. Incluído é uma descrição aprofundada de como usar seções histológicas seriais para definir, quantificar e detectar defeitos morfométricos.

Modelo de cura da ferida excisional de Murine e Análise de Ferida Morfômica Histológica

Aqui demonstramos uma técnica otimizada para avaliar o reparo da ferida usando a pele humana ex vivo combinada com uma abordagem de coloração de montagem inteira. Essa metodologia fornece uma plataforma pré-clínica para avaliação de potenciais terapias de feridas.

Modelo de ferida ex vivo humana e abordagem de coloração de montagem inteira para avaliar com precisão o reparo da pele

Este estudo apresenta duas técnicas experimentais cruciais: a construção de um modelo de ferida murina para avaliar o fechamento da ferida e a preparação de suspensões unicelulares de pele murina para preservar a viabilidade celular.

Modelos de Ferida em Camundongos e Preparação de Suspensões de Células Únicas

Um protocolo simplificado é apresentado para estabelecer um modelo de cicatrização de queimaduras em camundongos usando um dispositivo de aquecimento digital. Os locais experimentais semelhantes a tabuleiros de xadrez criados na pele facilitam uma análise funcional adicional para o ensaio de cicatrização de feridas.

Modelo de cicatrização de feridas de queimadura semelhante a um tabuleiro de xadrez de camundongos baseado em dispositivo de aquecimento digital

As feridas representam um desafio de saúde global. Este estudo desenvolveu uma cabine fotográfica padronizada utilizando planimetria digital para minimizar a variabilidade da medição da ferida. O monitoramento de feridas em camundongos ao longo de 14 dias revelou um aumento inicial na área e no perímetro da ferida, seguido de fechamento gradual. Essa metodologia pode auxiliar na avaliação da cinética de fechamento de feridas em modelos pré-clínicos.

Planimetria digital para avaliar a cinética de fechamento de feridas em um modelo de camundongo

É descrito um modelo de ferida na pele de rato que permite a avaliação de vários agentes terapêuticos sob condições fisiológicas ou patológicas ao longo das distintas etapas do processo de cicatrização. Além disso, é detalhado um protocolo para realizar planimetria manual e monitorar a taxa de contração da ferida durante o reparo tecidual.

Um Modelo de Ferida Cirúrgica de Pele de Rato: Uma Abordagem para Estudos de Cicatrização de Feridas e Avaliação de Biomateriais

Aprenda a criar um modelo murino de cicatrização com tala de silicone que previne contração e promove epitelização, proliferação e angiogênese em camundongos. Este método permite testes reprodutíveis de agentes terapêuticos.

Modelo Murino de Cicatrização

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