21 de março de 2013
Este artigo descreve um método striaghforward e eficiente de entubar ratos para medições de função pulmonar ou instilação pulmonar, que permite que os ratos a se recuperar e ser estudado em momentos posteriores. O procedimento envolve uma fonte de luz de fibra óptica de baixo custo que ilumina diretamente a traquéia.
O objetivo geral deste procedimento é intubar um mouse para permitir a ventilação mecânica ou a instalação de líquidos. Isso é feito montando primeiro a cânula e a fonte de luz. O segundo passo é pendurar o mouse verticalmente pelos incisivos superiores.
Depois de manipular a cabeça e o corpo para permitir um caminho reto para a intubação, insira o introdutor de fibra óptica e a cânula através das cordas vocais. Por fim, a fibra óptica é removida e o mouse com a cânula no lugar é colocado em decúbito dorsal para ventilação ou instalação. Ok, hoje vamos demonstrar um procedimento simples para intubar um pulmão de camundongo.
A visualização é importante porque muitas vezes o posicionamento do mouse é uma etapa crítica em termos de inserção da cânula e, portanto, com um pouco de prática, é preciso um pouco de prática. Deve ser possível para qualquer pessoa fazer isso repetidamente em um tempo relativamente curto, demonstrando o procedimento hoje é o Dr. Sandy Doss, que é um membro júnior do corpo docente da divisão de Medicina Pulmonar e da escola de medicina. O primeiro passo é se preparar.
Prepare a cânula para camundongos adultos, um cateter IV de calibre 20 de uma a 1,5 polegada de comprimento é usado. Em seguida, prepare o cabo de fibra óptica cortando um comprimento de cabo óptico de 0,5 milímetros para suavizar a borda. Após o corte, segure a fibra na ponta e faça pequenos círculos para que as pontas toquem um pedaço de lixa grão 1000.
A outra extremidade é inserida em uma rolha de borracha de silicone dimensionada para caber na abertura da fonte de luz. Primeiro, passe por uma agulha de calibre 18. Em seguida, insira a fibra óptica através do orifício da agulha e retire a agulha.
A rolha de borracha é então conectada a uma fonte de luz halógena de 150 watts. Em seguida, insira o cabo de fibra óptica através de um pequeno pedaço de tubo de borracha de silicone. Prenda o tubo no lugar enquanto ainda permite que o cabo de fibra óptica seja ajustado.
Uma vez no lugar, insira o tubo de silicone confortavelmente na extremidade da isca da cânula. Ajuste a posição do cabo de fibra óptica para que ele se estenda através da cânula e cerca de quatro milímetros na frente da ponta. Depois que tudo estiver preparado, coloque um camundongo anestesiado em um suporte vertical, suspendendo cuidadosamente o animal pelos incisivos superiores.
Uma vez presa, muito suavemente, puxe a língua para fora e segure-a com o polegar e o indicador. Coloque o dedo médio entre o pescoço e a tração do suporte de plástico na língua com o indicador. O dedo e o polegar são usados para abrir a boca e endireitar o caminho da intubação.
O ângulo da cabeça é ajustado com o dedo médio atrás do pescoço, conforme mostrado aqui. Em seguida, visualize as cordas vocais. Se os cordões não estiverem visíveis, puxe suavemente a língua com mais força usando o dedo médio como apoio.
Uma vez visualizado, use o cabo de fibra óptica como fonte de luz e introdutor e empurre-o pelas cordas vocais. Uma indicação de que a cânula está na traqueia é que o camundongo pode ofegar quando a cânula é inserida pela primeira vez. Uma vez inserido, avance a cânula cerca de cinco milímetros Além disso, tomando cuidado para não mover a cânula, retire o cabo de fibra óptica, deite o mouse e prenda a cânula com um pedaço de fita adesiva e apoie o cubo da cânula em um pedaço de massa de modelar.
Um pequeno espelho dental mantido no freezer pode ser usado para confirmar que a cânula está na traqueia e não no esôfago. Coloque o espelho na frente do cubo de isca do cateter. Se o cateter estiver na posição correta, a respiração exalada formará condensação no espelho.
Se o procedimento de intubação estiver sendo feito apenas para instalação de agentes em aerossol no pulmão, isso pode ser feito enquanto o camundongo estiver deitado em decúbito dorsal. Nesta posição, no entanto, as instalações líquidas são feitas de forma mais eficiente enquanto o camundongo ainda está suspenso na posição vertical, seguidas pela remoção imediata da cânula para medição da função pulmonar. O camundongo anestesiado intubado é então conectado a um ventilador mecânico, conforme mostrado aqui.
As configurações do ventilador devem ser feitas antes de iniciar a intubação, para que não haja atraso na ventilação. Um registro da pressão e do volume de ventilação é mostrado para este camundongo intubado. Avaliamos a capacidade do método de obter medidas reprodutíveis de resistência das vias aéreas durante um período de cinco semanas.
Os dados neste gráfico mostram que não há efeito de fazer medições repetidas, uma vez que a resistência basal permanece relativamente constante. Em cada um dos quatro camundongos estudados em intervalos semanais, avaliamos o aperto do selo entre a traqueia e a cânula de intubação injetando bolus de ar nos pulmões após o sacrifício do camundongo. Embora possa haver um vazamento muito lento após o estresse, recuperação de relaxamento, os vazamentos de pressão parecem ser mínimos.
Ao tentar este procedimento, é muito importante ter cuidado ao remover o mouse do suporte de apoio, pois é muito fácil retirar a cânula acidentalmente.
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Este artigo descreve um método simples e eficiente para entubar camundongos com finalidades de medições da função pulmonar ou instilação pulmonar. O procedimento permite que os camundongos se recuperem e sejam estudados em momentos posteriores, utilizando uma fonte de luz fibroóptica de baixo custo que ilumina diretamente a traqueia.
A intubação pulmonar em camundongos permite estudos pulmonares longitudinais com redução no número de animais e aumento do poder estatístico, utilizando cada animal como seu próprio controle. Este método apoia a validação de alvos e a redução de riscos mecanicistas em modelos de doenças respiratórias, permitindo avaliações funcionais repetidas ao longo do tempo. A técnica assistida por fibra óptica reduz as barreiras técnicas, tornando os delineamentos longitudinais acessíveis a mais laboratórios.
O método se insere no continuum de descoberta, desde a validação inicial do alvo até os testes pré-clínicos de eficácia, especialmente para indicações respiratórias nas quais a função pulmonar longitudinal é um biomarcador fundamental.