Name: Vascular transferência de genes de Metallic Stent superfícies usando Adenoviral Vetores Tethered através hidrolisável reticulantes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 30 s
Description: Aprenda a implantar stents de eluição gênica na artéria carótida comum de ratos para avaliar a expressão de transgenes ao longo do tempo. Este método utiliza vetores adenovirais e imagem de bioluminescência.

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Os autores não têm interesses financeiros concorrentes a divulgar.

<ol><li>Boeckle, S., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+targeted+gene+delivery%3A+chemical+modification+of+viral+vectors+and+synthesis+of+artificial+virus+vector+systems%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+J%22%5BJournal%5D)">Optimizing targeted gene delivery: chemical modification of viral vectors and synthesis of artificial virus vector systems.</a> AAPS J. 8, E731-E742 (2006).</li>
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<li>Bangari, D. S., Mittal, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+strategies+and+future+directions+for+eluding+adenoviral+vector+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Current strategies and future directions for eluding adenoviral vector immunity.</a> Curr Gene Ther. 6, 215-226 (2006).</li>
<li>Barry, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+delivery+of+therapeutic+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Systemic delivery of therapeutic viruses.</a> Curr Opin Mol Ther. 11, 411-420 (2009).</li>
<li>De Laporte, L., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrices+and+scaffolds+for+DNA+delivery+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Matrices and scaffolds for DNA delivery in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 59, 292-307 (2007).</li>
<li>Gustafson, J. A., Price, R. A., Greish, K., Cappello, J., Ghandehari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silk-elastin-like+hydrogel+improves+the+safety+of+adenovirus-mediated+gene-directed+enzyme-prodrug+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Silk-elastin-like hydrogel improves the safety of adenovirus-mediated gene-directed enzyme-prodrug therapy.</a> Mol Pharm. 7, 1050-1056 (2010).</li>
<li>Kidd, M. E., Shin, S., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrin+hydrogels+for+lentiviral+gene+delivery+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Fibrin hydrogels for lentiviral gene delivery in vitro and in vivo.</a> J Control Release. 157, 80-85 (2012).</li>
<li>Lei, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+active+DNA%2Fcationic+polymer+polyplexes+into+hydrogel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Incorporation of active DNA/cationic polymer polyplexes into hydrogel scaffolds.</a> Biomaterials. 31, 9106-9116 (2010).</li>
<li>Lei, Y., Rahim, M., Ng, Q., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid+and+fibrin+hydrogels+with+concentrated+DNA%2FPEI+polyplexes+for+local+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid and fibrin hydrogels with concentrated DNA/PEI polyplexes for local gene delivery.</a> J Control Release. 153, 255-261 (2011).</li>
<li>Jang, J. H., Schaffer, D. V., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+biomaterial+systems+to+enhance+viral+vector+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Engineering biomaterial systems to enhance viral vector gene delivery.</a> Mol Ther. 19, 1407-1415 (2011).</li>
<li>Salvay, D. M., Zelivyanskaya, M., Shea, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+delivery+by+surface+immobilization+of+plasmid+to+tissue-engineering+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene delivery by surface immobilization of plasmid to tissue-engineering scaffolds.</a> Gene Ther. 17, 1134-1141 (2010).</li>
<li>Moss, A. J., Hamburger, S., Moore, R. M., Jeng, L. L., Vol Howie, L. J. Advance Data. 191, National Center for Health Statistics Vital and Health Statistics. (1991).</li>
<li>Gristina, A. G., Naylor, P., Myrvik, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infections+from+biomaterials+and+implants%3A+a+race+for+the+surface%29%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Prog+Technol%22%5BJournal%5D)">Infections from biomaterials and implants: a race for the surface).</a> Med Prog Technol. 14, 205-224 (1988).</li>
<li>Santerre, J. P., Woodhouse, K., Laroche, G., Labow, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+biodegradation+of+polyurethanes%3A+from+classical+implants+to+tissue+engineering+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Understanding the biodegradation of polyurethanes: from classical implants to tissue engineering materials.</a> Biomaterials. 26, 7457-7470 (2005).</li>
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<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphosphonate-mediated+gene+vector+delivery+from+the+metal+surfaces+of+stents%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Bisphosphonate-mediated gene vector delivery from the metal surfaces of stents.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 159-164 (2006).</li>
<li>Levy, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+adenovirus+gene+delivery+using+antiviral+IgG+complexation%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Localized adenovirus gene delivery using antiviral IgG complexation.</a> Gene Ther. 8, 659-667 (2001).</li>
<li>Ma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anchoring+of+self-assembled+plasmid+DNA%2Fanti-DNA+antibody%2Fcationic+lipid+micelles+on+bisphosphonate-modified+stent+for+cardiovascular+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Anchoring of self-assembled plasmid DNA/anti-DNA antibody/cationic lipid micelles on bisphosphonate-modified stent for cardiovascular gene delivery.</a> Int J Nanomedicine. 8, 1029-1035 (2013).</li>
<li>Hu, W. W., Lang, M. W., Krebsbach, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+adenovirus+immobilization+strategies+for+in+situ+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gene+Med%22%5BJournal%5D)">Development of adenovirus immobilization strategies for in situ gene therapy.</a> J Gene Med. 10, 1102-1112 (2008).</li>
<li>Jang, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface+immobilization+of+hexa-histidine-tagged+adeno-associated+viral+vectors+for+localized+gene+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Surface immobilization of hexa-histidine-tagged adeno-associated viral vectors for localized gene delivery.</a> Gene Ther. 17, 1384-1389 (2010).</li>
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<li>Holmes, C. A., Tabrizian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+gene+delivery+from+glycol-chitosan%2Fhyaluronic+acid+polyelectrolyte+multilayer+films%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated gene delivery from glycol-chitosan/hyaluronic acid polyelectrolyte multilayer films.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 5, 524-531 (2013).</li>
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<li>Wang, C. H., Pun, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substrate-mediated+nucleic+acid+delivery+from+self-assembled+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Substrate-mediated nucleic acid delivery from self-assembled monolayers.</a> Trends Biotechnol. 29, 119-126 (2011).</li>
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<li>Fishbein, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenoviral+vector+tethering+to+metal+surfaces+via+hydrolyzable+cross-linkers+for+the+modulation+of+vector+release+and+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Adenoviral vector tethering to metal surfaces via hydrolyzable cross-linkers for the modulation of vector release and transduction.</a> Biomaterials. 34, 6938-6948 (2013).</li>
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<li>Niinomi, M., Nakai, M., Hieda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+new+metallic+alloys+for+biomedical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">Development of new metallic alloys for biomedical applications.</a> Acta Biomater. 8, 3888-3903 (2012).</li>
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<li>Egashira, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+delivery+of+anti-monocyte+chemoattractant+protein-1+by+gene-eluting+stents+attenuates+in-stent+stenosis+in+rabbits+and+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Local delivery of anti-monocyte chemoattractant protein-1 by gene-eluting stents attenuates in-stent stenosis in rabbits and monkeys.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27, 2563-2568 (2007).</li>
<li>Ohtani, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stent-based+local+delivery+of+nuclear+factor-kappaB+decoy+attenuates+in-stent+restenosis+in+hypercholesterolemic+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Stent-based local delivery of nuclear factor-kappaB decoy attenuates in-stent restenosis in hypercholesterolemic rabbits.</a> Circulation. 114, 2773-2779 (2006).</li>
</ol>

O desenvolvimento do protocolo e os estudos apresentados neste artigo foram apoiados em parte pelas bolsas de Desenvolvimento de Cientistas da American Heart Association (I.F. 0735110N e M.C. 10SDG4020003), pela concessão HL 72108 (R.J.L.) do Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue dos EUA T32 007915 (S.P.F.). Os cateteres de angioplastia foram gentilmente doados pela NuMED (Hopkinton, NY). Os autores desejam agradecer a assistência de secretariado da Sra. Susan Kerns.

<html> O protocolo apresentado descreve um método operacional para a entrega de genes mediada substrato conseguida através de fixação reversível de vectores adenovirais sem casaco para as superfícies de aço inoxidável. Embora desenvolvido para a finalidade específica de terapia genética baseada em stent de reestenose vascular, esta técnica tem aplicações muito mais amplas nas áreas de biomateriais, implantes biomédicos e terapia gênica. Embora os estudos apresentados têm apenas utilizado aço ...

A eficácia da terapia do gene como uma modalidade terapêutica é dificultada pela capacidade de direccionamento pobre de vectores de terapia génica 1,2. A falta de segmentação resultados adequados nos níveis sub-terapêuticos de expressão do transgene no local de destino e leva a uma ampla disseminação de vetores de órgãos não-alvo 3, incluindo os responsáveis ​​pela montagem respostas imunes contra tanto o vetor e codificado produto terapêutico 4, 5. Um potencial significa para compensar a promiscuidade de transdução e promover a segmentação é introduzir vetores de genes no local desejado de uma forma que impede a sua disseminação através do sangue e da linfa. Tipicamente, esses esforços contar com um sistema de entrega localmente injectáveis ​​compreendendo quer de vectores virais ou não virais misturados com fibrina, colagénio ou matrizes de hidrogel de ácido hialurónico 6-10, que são capazes de sustentar transitoriamente vectores de genes no local de injecção por aprisionamento físico thin em uma rede polimérica. Outro paradigma geralmente aceite para terapia génica localizada utiliza imobilização de vectores de genes para a superfície de próteses implantadas 11,12. Implantes médicos permanentes (endovasculares, brônquios, os stents urológicas e gastrointestinais, pacemakers, juntas artificiais, malhas cirúrgicas e ginecológicas, etc.) São utilizados anualmente em dezenas de milhões de pacientes 13. Embora geralmente eficaz, estes dispositivos são propensas a complicações que são inadequadamente controlados pelo práticas médicas atuais 14-17. Próteses implantáveis ​​apresentam uma oportunidade única para servir de plataforma de proxy para tratamento de terapia genética localizada. Do ponto de vista farmacocinético, derivatização da superfície dos implantes médicos com doses relativamente baixas de entrada dos vectores de genes resulta na obtenção de ambas as concentrações locais elevadas de vectores de genes para a interface do implante / tecido e reduzindo a cinética de their eliminação desta localidade. Como conseqüência de residência prolongada e aumento da captação pela população de células alvo, vetor imobilização minimiza propagação do vetor gene. Assim, a inoculação acidental de tecidos não-alvo é reduzida. Superfície tethering de vetores de genes em biomateriais implantáveis ​​(também denominado como a entrega do gene mediada por substrato ou entrega gene fase sólida) foi implementado em cultura de células animais e experimentos utilizando ambos específica (antígeno-anticorpo 18-20, avidina-biotina 21,22) e não-específico (23-26 carga, van der Waals) interações. A ligação covalente de vectores para a superfície do dispositivo implantado tem sido anteriormente considerado como não funcional uma vez que demasiado fortes ligações com a superfície exclui vector internalização pelas células alvo. Recentemente foi demonstrado que esta limitação pode ser superada através da utilização de espontaneamente hidrolisável reticulante utilizado como o tetdela entre a superfície metálica modificada das proteínas da cápside de stent e o vector adenoviral de 27,28. Além disso, a taxa de libertação do vetor e naturalmente o tempo de expressão do transgene in vitro e in vivo, pode ser modulada, com o uso de agentes de ligação cruzada hidrolizáveis ​​que exibem diferentes cinéticas de hidrólise 28. O presente documento fornece um protocolo detalhado para a ligação covalente reversível de vectores adenovirais para a superfície do metal activado e apresenta uma configuração experimental útil para estudar os eventos subsequentes de transdução in vitro de músculo liso e células endoteliais em cultura e in vivo no modelo da carótida de rato de angioplastia de stent .

<table><tbody><tr><td>316 discos de malha de aço inoxidável</td><td>Electon Microscopy Sciences</td><td>E200-SS</td><td></td></tr><tr><td>Stents genéricos de aço inoxidável de grau 304</td><td>Pedido</td><td></td><td></td>personalizado</tr><tr><td>de Laserage AdeGFP</td><td>University of Pennsylvania Vector Core</td><td>AD-5-PV0504</td><td></td></tr><tr><td>AdLuc</td><td>University of Pennsylvania Vector Core</td><td>AD-5-PV1028</td><td></td></tr><tr><td>AdEMPTY</td><td>Universidade da Pensilvânia Vector Core</td><td>A858</td><td></td></tr><tr><td>Cy3(NHS)2</td><td>GE Healthcare</td><td>PA23000</td><td></td></tr><tr><td>Sepharose 6B</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>6B100-500ML</td><td></td></tr><tr><td>UV placas de 96 poços</td><td>Costar</td><td>3635</td><td></td></tr><tr><td>Fluorometria placas de 96 poços</td><td>Costar</td><td>3915</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura celular de 96 poços</td><td>Falcon</td><td>353072</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de Tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20490</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol (DTT)</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>20290</td><td></td></tr><tr><td>sulfo-LC-SPDP</td><td>Pierce Thermo Scientific</td><td>21650</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro</td><td>Molecular Devices&nbsp;</td><td>SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>Spectrofluorômetro</td><td>Molecular Devices</td><td>Incubadora Orbital SpectraMax Gemini EM</td><td></td></tr><tr><td>VWR</td><td></td><td>1575R</td><td></td></tr><tr><td>Forno de fluxo de ar horizontal</td><td>Shel Lab</td><td>1350 FM</td><td></td></tr><tr><td>Centra-CL2 centrífuga&nbsp;</td><td>International Equipment Company</td><td>426</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de vórtice digital</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência Eclipse TE300</td><td>Nikon&nbsp;</td>Câmera CCD <td>TE300</td><td></td></tr><tr><td>DC 500</td><td>Leica</td><td>DC-500</td><td></td></tr><tr><td>7500 Sistema de PCR em tempo real</td><td>Applied Biosystems</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Estação de bioluminescência IVIS Spectrum</td><td>Perkins-Elmer</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Sal dipotássico EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ED2P</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino albumina fração V (BSA)</td><td>Fisher Thermo Scientific</td><td>BP1600-100</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>Dumont fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>A10 linha celular&nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1476</td><td></td></tr><tr><td>Células endoteliais aórticas bovinas</td><td>Lonza</td><td>BW-6002</td><td></td></tr><tr><td>Luciferina, sal de potássio</td><td>Gold Biotechnology</td><td>LUCK-1Ge</td><td></td></tr><tr><td>Pluronic F-127</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2443-250G</td><td></td></tr><tr><td>PBS sem cálcio e magnésio</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Gemini Bio-Products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>Solução de penicilina/estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>11540-122</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, alta glicose</td><td>Corning cellgro</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>0,25% Tripsina/EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>QIAamp DNA micro kit</td><td>Qiagen</td><td>56304</td><td></td></tr><tr><td>Power Sybr Green PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4367659</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Reação Óptica MicroAmp de 96 poços</td><td>Applied Biosystems</td><td>N8010560</td><td></td></tr><tr><td>Filme Adesivo Óptico MicroAmp</td><td>Applied Biosystems</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>Cephazolin&nbsp;</td><td>Apotex</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Loxicom (Meloxicam)</td> <td>Norbrook</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Heparina sódica</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Ketavet (Cetamina)</td> <td>VEDCO</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Anased (Xylazine)&nbsp;</td><td>Lloid</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Forano (Isoflurano)&nbsp;</td><td>Baxter</td><td>não disponível</td><td></td></tr><tr><td>Pinça curva de íris Moria</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11370-31</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Graefe extrafina curva</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont # 5</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de mola Vannas</td><td>Ferramentas de ciências finas</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura fina - ToughCut</td><td>Tesoura cirúrgica Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Fine</td><td>Science Tools</td><td>14101-14</td><td></td></tr><tr><td>Sutura Vicryl (5-0)</td><td>Ethicon</td><td>J385</td><td></td></tr><tr><td>Sutura (4/0 seda)&nbsp;</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-40</td><td></td></tr><tr><td>Michel clipes de sutura</td><td>Fine Science Tools</td><td>12040-02</td><td></td></tr><tr><td>Dilatador de feridas (espéculos oculares de Lancaster)</td> <td>KLS Martin</td><td>34-149-07</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de esferas quentes</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de clipe de sutura Michel</td><td>Fine Science Tools</td><td>112028-12</td><td></td></tr><tr><td>Insyte Autoguard 24 G IV cateter</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>2F Fogarty cateter</td><td>Edwards Lifesciences</td><td>120602F</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de teflon</td><td>Vention</td><td>041100BST</td><td></td></tr><tr><td>PTA cateter</td><td>NuMed</td><td>encomenda</td><td></td>personalizada</tr><tr><td>Compressas de gaze</td><td>Kendall Healthcare</td><td>9024</td><td></td></tr><tr><td>Aplicadores de algodão</td><td>Solon Manufacturing</td><td>WOD1003</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Saline</td><td>Baxter</td><td>281321</td><td></td></tr><tr><td>10 ml (Luer-Lok)</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>seringa de 1 ml (Luer-Lok)</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>Clippers com lâmina #40</td><td>Oster&nbsp;</td><td>78005-314</td><td></td></tr><tr><td>Transpore fita cirúrgica</td><td>3M</td><td>MM 15271</td><td></td></tr><tr><td>Puralube vet pomada</td><td>Pharmaderm</td><td>não disponível</td><td></td></tr></tbody></table>

vascular transferência de genes de metallic stent superfícies usando adenoviral vetores tethered através hidrolisável reticulantes

Vascular Gene Transfer from Metallic Stent Surfaces Using Adenoviral Vectors Tethered through Hydrolysable Cross-linkers

Reestenose intra-stent apresenta uma das principais complicações de procedimentos de revascularização à base de stents utilizados para restabelecer o fluxo de sangue através de segmentos criticamente estreitados de artérias coronárias e periféricas. Stents endovasculares capazes de liberação ajustável de genes com atividade anti-reestenose pode apresentar uma estratégia alternativa para actualmente utilizado stents farmacológicos. A fim de atingir tradução clínico que os stents de genes deve apresentar uma cinética previsível de libertação do gene vector imobilizada-stent e transdução específica do local da vasculatura, evitando ao mesmo tempo uma resposta inflamatória excessiva normalmente associado com os revestimentos de polímero utilizados para a retenção física do vector. Este artigo descreve uma metodologia detalhada para tethering sem casaco de vetores de genes de adenovírus para stents com base em uma ligação reversível das partículas de adenovírus para polialilamina bifosfonato (PABT) -Modified superfície de aço inoxidável via reticulantes hidrolisáveis ​​(HC). Uma família debifuncional HC (aminas e tiol-reactivo) com uma média de t 1/2 de hidrólise do éster em cadeia que varia entre 5 e 50 dias foram utilizados para ligar o vector com o stent. O procedimento de imobilização vector é tipicamente levada a cabo a cerca de 9 horas e consiste em várias etapas: 1) a incubação das amostras de metal numa solução aquosa de PABT (4 horas); 2) desprotecção de grupos tiol instalados em PABT com tris (2-carboxietil) fosfina (20 min); 3) aumento da capacidade de tiol reactivo da superfície do metal por reacção das amostras com polietilenoimina derivatizados com grupos piridilditio) (PDT (2 h); 4) a conversão dos grupos tióis a PDT com ditiotreitol (10 min); 5) alteração de adenovírus com HC (1 hora); 6) purificação de partículas de adenovírus modificados por meio de cromatografia de exclusão de tamanho da coluna (15 min) e 7) a imobilização de partículas adenovirais tiol-reactivo na superfície de aço tiolada (1 hr). Esta técnica tem uma ampla aplicabilidade potencial além stentsfacilitando a engenharia de superfícies de dispositivos bioprostéticas para melhorar sua biocompatibilidade com a entrega de genes mediada por substrato para as células de interface do material estranho implantado.

Experimentos Vector lançamento Ancoragem de vectores adenovirais para a superfície dos implantes, incluindo dispositivos de intervenção, tais como stents, aproxima-se o vector para o local da doença, evitando parcialmente a falta de orientação física dos vectores. No entanto, para ser capaz de atingir os efeitos terapêuticos através da transdução de tecido alvo, o vector tem de ser libertado a partir da superfície (Figura 2). A utilização de agentes de ligaç...

Esses estudos relatam a ligação reversível de vetores genéticos adenovirais a superfícies metálicas sem revestimento de stents e discos de malha modelo. A liberação sustentada de partículas virais competentes para transdução contingentes à hidrólise de reticuladores usados para imobilização vetorial resulta em uma expressão transgênica durável e específica do local em células vasculares e em artérias com stent.

Vascular transferência de genes de Metallic Stent superfícies usando Adenoviral Vetores Tethered através hidrolisável reticulantes

In-stent restenosis presents a major complication of stent-based revascularization procedures widely used to re-establish blood flow through critically ...

O objetivo geral deste procedimento é implantar um stent com liberação gênica na artéria carótida comum de uma rata de laboratório e determinar a extensão e localização da expressão do transgene ao longo do tempo. Para isso, realiza-se uma arterotomia no ramo da carótida externa para obter acesso vascular à artéria carótida comum. Um cateter Fogarty de dois French inflado é introduzido através da artéria carótida comum para desepitelizar o endotélio e lesar a camada média.Um stent liberador de gene é então montado em um cateter de angioplastia inserido no segmento médio da artéria carótida comum lesionada por balão e implantado finalmente para determinar a expressão arterial de luciferase. A luciferase formulada em conjunto com gel onic é aplicada na região perivascular e é realizada a imagem de bioluminescência. Em última análise, podem ser obtidos resultados que permitem a comparação de diferentes formulações de stents liberadores de gene quanto à extensão e duração da transdução do tecido vascular.A vantagem de prevenir a restenose imediata e a trombose de stent usando terapia gênica é que essa é a maneira mais direta de monitorar a expressão gênica exógena a partir de vetores v

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Um método de transferência de genes para o tratamento da insuficiência cardíaca isquêmica é descrito usando um modelo de suínos de infarto do miocárdio. Nosso método simples e reprodutível nos permite facilmente avaliar a eficácia da transferência de genes diferentes com uma maneira muito simples e reprodutível.

Transferência de genes para insuficiência cardíaca isquêmica em um modelo pré-clínica

Descreve-se o método de células-tronco de programação para superexpressão fatores terapêuticos para angiogênese utilizando nanopartículas poliméricas biodegradáveis. Processos descritos incluem a síntese do polímero, a transfecção de células estaminais derivadas de tecido adiposo, in vitro, e para validar a eficácia das células estaminais programadas para promover a angiogénese num modelo de isquemia dos membros posteriores de murino.

Células-tronco de programação para Therapeutic angiogênese Usando nanopartículas poliméricas biodegradáveis

Um exemplo de terapia genética adenoviral nas córneas cultivadas de órgãos diabéticos humanos é apresentado para a normalização da cicatrização tardia de feridas e expressão de marcadores de células-tronco epiteliais marcadamente reduzida nessas córneas. Também descreve a otimização desse processo em culturas epiteliais límbicas enriquecidas com células-tronco.

Adenoviral terapia genética para Diabetic Ceratopatia: Efeitos sobre a cicatrização de feridas e Stem Cell marcador expressão em humanos Corneas Organ-cultivadas e células epiteliais Limbal

Este método é introduzir um transgene no endotélio de artérias carótidas de coelho. Introdução do transgene permite a avaliação da função biológica do produto do transgene em artérias normais ou modelos de doença. O método também é útil para medir a atividade de sequências reguladoras de DNA.

Na Vivo Transferência de genes para o endotélio da artéria carótida comum de coelho

Este método descreve a colocação de enxertos de veia interposição em coelhos, a transdução de enxertos e a realização da expressão do transgene durável. Isso permite que a investigação de papéis fisiológicos e patológicos de transgenes e seus produtos de proteína nas veias transplantadas e teste de terapias do gene para a doença do enxerto de veia.

Um modelo de coelho da expressão do Transgene durável na veia Jugular para enxertos de interposição da artéria carótida comum

Este protocolo destina-se a descrever o hepatócito porcina isolamento e ex vivo gene entrega para curar modelos de doenças metabólicas através do transplante de células autólogas. Embora este modelo em particular beneficia de vantagens únicas que favorecem a terapia bem sucedida, o aplicativo é uma Fundação relevante para tratar doenças adicionais e indicações.

Particulas de Lentivirus terapia gênica mediada por vetor de hepatócitos Ex Vivo para transplante autólogo em suínos

O protocolo descrito aqui permite que pesquisadores especificamente modificar capsids adenovírus em locais seleccionados pela química simples. Adenovírus blindado vectores partículas e vetores de transferência do gene redirecionada podem ser gerados, e interações do anfitrião de vetor podem ser estudadas.

Combinação de modificações genéticas e químicas de capsídeos em vetores de transferência gênica baseados em adenovírus para blindagem e direcionamento

São descritos métodos para a geração de grandes quantidades de adenovírus recombinantes, que podem então ser usados para transduzir o urotélio nativo de roedores, permitindo a expressão de transgenes ou downregulation de produtos gênicos endógenos.

Expressão de Transgenes no Urotélio da Bexiga Nativa utilizando Transdução Mediada por Adenovírus

Este protocolo descreve como a injeção intraesplênica de RNA em grampo de cabelo pequeno entregue por AAV8 atinge a mesma eficiência de knockdown de genes no fígado que a injeção na veia porta, representando um procedimento mais simples com mortalidade e complicações perioperatórias e pós-operatórias muito menores.

Nocaute Eficiente de Genes no Fígado por Injeção Intraesplênica de RNA Pequeno em Grampo de Cabelo Entregue pelo Vírus Adeno-Associado Sorótipo 8 (AAV8)

Aqui, é apresentado um protocolo para o implante de um enxerto vascular de engenharia tecidual na artéria carótida de camundongo usando a técnica do manguito, fornecendo um modelo animal adequado para investigar os mecanismos de regeneração do tecido vascular.

Implante de enxerto vascular de engenharia de tecidos na artéria carótida de camundongo via técnica de manguito

Aprenda a implantar stents de eluição gênica na artéria carótida comum de ratos para avaliar a expressão de transgenes ao longo do tempo. Este método utiliza vetores adenovirais e imagem de bioluminescência.

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