Name: Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) BSL-4 laboratoriais: 1. Nível de Biossegurança 4 Suit Laboratório Suíte entrada e saída Procedimentos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 54 s
Description: Aprenda os procedimentos de entrada e saída em laboratório BSL-4, incluindo o uso correto de trajes de pressão positiva e protocolos de descontaminação para garantir a segurança do pessoal em pesquisa de alta contenção.

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O conteúdo desta publicação não reflete necessariamente as opiniões ou políticas do Departamento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA ou das instituições e empresas afiliadas aos autores. KJ, MRH e LB realizaram esse trabalho como funcionários da Battelle Government Services, Inc.; JHK como funcionário da Tunnell Government Services, Inc.; e MGL como funcionário do Lovelace Respiratory Research Institute, Inc. Tunnell Government Services e Lovelace Respiratory Research Institute são subcontratados do Battelle Memorial Institute sob seu contrato principal com o NIAID, sob o Contrato nº. HHSN272200700016I.

1. Diário Checklist externo <ol><li> Verifique sistemas de segurança. Verifique respirando sistemas de ar, faça backup dos sistemas de ar quebrando, sistemas de sistema de descontaminação de efluentes (EDS), sistema de chuveiro química, fluxo de ar direcional e funcionalidade autoclave (Figura 1). </li></ol> 2. Procedimentos de Laboratório de entrada <ol><li> Tampão corredor de entrada Procedimentos por pessoal de laboratório <ol><li> Inserir o nome do pessoal da pessoa, o tempo de entrada, localização laboratório e patógenos em estudo no pessoal Entrada / Saída diário de bordo. Indicar a localização do laboratório em uma placa magnética. </li><li> Para garantir o naipe BSL-4 sistemas dos laboratórios estão funcionando corretamente, verificar se os sistemas externos foram verificados e os laboratórios foram apuradas para a entrada no Diário sistemas externos Checklist de Segurança (Figura 1). </li><li> Para garantir que a pressão sala de laboratório está dentro de pontos de ajuste da pressão negativa que mantém proper fluxo de ar direcional, verifique o sistema de automação predial (BAS) monitor fora da entrada da sala de mudança exterior. Se a pressão do quarto não está na faixa normal, notificar biossegurança ou instalações de pessoal e atrasar a entrada laboratório até essa pressão retorna ao normal. </li><li> Assegurar a disponibilidade de uma autoclave para esterilização de resíduos e / ou lavandaria biológica seguinte trabalho experimental. </li><li> Obter esfrega, meias e toalhas de quarto de armazenamento contendo suprimentos da instalação localizada perto do pessoal Entrada / Saída diário de bordo. </li></ol></li><li> Outer Mudança sala de entrada Procedimentos por pessoal de laboratório: <ol><li> requisitos de segurança completas que regulam e acesso de documentos para o laboratório de isolamento biológico. Entre na sala mudança exterior. </li><li> Tirar toda a roupa rua, roupas, jóias e relógios, don scrubs, e prossiga para a sala de terno. </li></ol></li><li> Inspeção Roupa Protectora de pressão positiva e Teste de integridade por LaStaff labora- no quarto Suit: <ol><li> Após a obtenção de um fato de protecção de pressão positiva de um tamanho adequado, realizar uma inspeção visual do terno que olha para todos os furos, rasgos, pontos de punção, rasgos de costura, ou pontos fracos. Inspecione as luvas terno exterior completamente, uma vez que as luvas são o lugar mais provável de ser danificado. </li><li> Mudar de luvas, pelo menos, a cada 7 dias ou se danos nas luvas é identificado. <ol><li> Para substituir as luvas terno exteriores, retire a fita adesiva da luva terno existente, role o O-ring na manga, e remover a luva terno velho. </li><li> Colocar uma nova luva sobre o punho do terno e garantir que a luva cobre todo o balonete e o polegar se encontra na posição correcta. Coloque o anel de vedação sobre a luva, assentar o O-ring na ranhura no punho, e usar uma fita adesiva para prender a luva terno exterior. </li><li> Dobre o punho luva sobre a fita adesiva e O-ring, selar a luva com uma peça final de fita adesiva, e re-inspecionar o recém-attaluva Ched. </li></ol></li><li> Aplicar uma camada fina de zíper lubrificante ao fecho de correr, pelo menos, uma vez por semana. </li><li> Cubra cada uma das válvulas de escape, localizado dentro do terno atrás da tampa da cabeça e no lado esquerdo das costas ou com fita adesiva ou uma tampa de teste de pressão de alumínio, e zip o naipe fechado. </li><li> Ligue a desconexão rápida / conectar anexo no final de cada linha de respiração para a conexão da mangueira no terno. Inflar o terno até que os braços e as pernas são firmes e colocar o terno para uma posição vertical. Desligue o suprimento de ar. </li><li> O processo não deve ser sobre-pressurizado a pressão excessiva pode causar sérios danos ao terno. inspeccionar minuciosamente o terno para qualquer indicação de um vazamento de ar por aproximadamente 5 minutos e inspecione visualmente o terno para sinais de deflação. Certifique-se de que o processo não é sobre-pressurizado como excesso de pressão pode causar sérios danos ao terno. </li><li> Se o terno perde a firmeza, verifique o terno para vazamentos por re-inflating a ação. Ouvir e sentir se há vazamentos no terno. Se necessário, pulverizar todas as superfícies da roupa de proteção com uma solução de sabão. Algumas áreas comuns de vazamentos são as costuras do terno, a área de zíper, e a junção do material viseira com o material da roupa. Monitor para a formação de bolhas que indicam um vazamento, com especial atenção para as costuras e viseira. Verificar para assegurar que as válvulas de escape estão totalmente selada. </li><li> Reparar pequenas fugas de tecido temporariamente com fita adesiva. reparos permanentes completos utilizando material a partir de um kit de reparação de terno. Se o processo não pode ser reparado facilmente, descontaminar o terno com um desinfetante à base de álcool e retire do quarto suit-o. Se o terno é além do reparo, se aposentar terno do uso e incinerar. </li><li> Uma vez que o teste de integridade for concluída, descompacte o terno e remover as tampas das válvulas de escape. Se não remover as tampas de escape vai entupir filtração e danificar gravemente o processo. Digite testes e reparos naTerno de pressão positiva Integrity Test Log. </li></ol></li><li> Vestindo terno com pressão positiva no quarto terno e Entrando em BSL-4 Laboratories Fato: <ol><li> Fita meias para os pés de scrubs. Don luvas de borracha nitrílica interna e fita adesiva-los para as algemas dos scrubs. D. um segundo par de luvas de borracha nitrílica (não gravado) sobre as luvas internas. Se necessário, limpe o escudo face interna com limpador de vidro para uma maior visibilidade. </li><li> Don o traje de pressão positiva, certificando-se o processo é fechado completamente fechada, e ligar o terno a uma linha de respirar ar. Entrar nos laboratórios BSL-4 terno quando os monitores BAS são livres de alarmes. </li><li> Para inserir os laboratórios BSL-4 terno, se desconectar da linha de ar para respirar na sala de terno e empurrar a solicitação para acessar o botão para o quarto de banho químico. </li><li> Uma vez que a resistente à pressão de ar (APR) porta é ativado, o selo em torno da porta esvazia eo ímã porta desengata. As portas APR dentro do chuveiro químico roOM são interligadas, o que significa uma porta de abril deve ser fechada quando a outra é aberta para manter a contenção em todos os momentos. Para passar por casa de banho química, feche a porta abril para a sala de terno, aguarde a bexiga para re-inflacionar e totalmente selar a moldura da porta, e ativar a segunda porta abril levando para o laboratório. </li><li> Após a entrada aos laboratórios BSL-4 terno, conecte o terno a uma linha de ar respirável disponível. </li><li> Antes de prosseguir, feche a porta abril levando para o laboratório e garantir que chuveiro químico é activado automaticamente para desinfectar a área do chuveiro química e terno. Uma vez desinfectados, a porta abril na casa de banho química pode ser aberto novamente a partir da sala de terno. Se um ciclo de não começar, pessoal de gestão de instalações de contacto. </li><li> Se a ação não tem botas integrais, vestir um par de galochas que estão localizados nas prateleiras adjacentes para sair da porta, o chuveiro químico porta abril Para evitar risco / perigos adicionais, verifique se o overshoes são a forma adequada e confortável. </li></ol></li></ol> 3. A circulação dentro dos BSL-4 Laboratories Suit <ol><li> Mover-se livremente ao redor dos laboratórios desconectando e reconectando a linhas de ar em toda a laboratórios. Mantenha-se ligado a uma linha de ar para manter a pressão positiva ao tentar curvar-se ou recuperar itens próximo do chão. NOTA: Esses movimentos enquanto estiver desconectado da linha de ar vai esgotar o ar respirável dentro do terno e criar uma pressão negativa que pode permitir que o ar do laboratório de introduzir quaisquer violações no processo. </li><li> Observe os monitores ao longo dos laboratórios para vários alarmes e status conjunto atual. </li></ol> 4. Procedimentos de Laboratório saída da Laboratories BSL-4 Suit <ol><li> Descontaminar as mãos enluvadas em detergente desinfetante em dunk tanques de plástico ao lado da pia ou em corredores interiores. Se nenhum tanque d&#39;água está presente, spray mãos enluvadas cuidadosamente com desinfectante. &lt;/ Li&gt; <li> Inspecionar o fundo de galochas ou botas para o material visível. Se galochas são limpos, remova galochas e colocá-los nas prateleiras ao lado do chuveiro químico porta abril Feche todas as portas interiores do laboratório, se desconectar da linha de ar para respirar, e prossiga para o chuveiro químico. </li><li> Se as galochas estão sujos, lave-as na pia com limpador detergente desinfetante. </li></ol> 5. BSL-4 Procedimentos Duche químicos <ol><li> Digite o chuveiro químico empurrando a solicitação para acessar o botão para abrir a porta APR, e feche a porta. Reconectar terno a uma linha de ar respirável dentro do chuveiro. </li><li> Assim que a porta está fechada abril, o ciclo de banho químico vai ativar automaticamente para liberar uma mistura adequada de produto de limpeza detergente desinfetante para desinfetar adequadamente o terno e o chuveiro área química. Se o ciclo não começar automaticamente, puxe a alça dilúvio. Esfregue o terno para cerca de 1 min, empurre odilúvio lidar com volta no lugar para evitar a drenagem dos tanques de desinfetantes químicos totalmente. Um ciclo de chuveiro manual não está disponível. </li><li> Verificar a existência de luvas e pé vazamentos, colocando as mãos e os pés com luvas na banheira de plástico contendo solução de limpeza detergente desinfetante mantido dentro do chuveiro químico. Procure líquido ou umidade embaixo da luva externa e verificar se há lágrimas, rasgos ou partes fracas na luva externa. Se for constatado um vazamento em uma das luvas exteriores, espere até que o ciclo de chuveiro é concluída, remova a luva terno exterior e a luva interna mais externa, e deixar a luva externa na banheira de plástico. </li><li> Esfregue as botas terno e terno integrada com uma escova de cabo longo ou mãos para distribuir o desinfetante químico para todas as superfícies do terno. Enxaguar terno de produto de limpeza detergente desinfectante durante o ciclo da água do chuveiro. </li><li> Desconecte a linha de ar para respirar, previamente expostas ao ar do laboratório, tanto durante o ciclo da água a d química eisinfect a conexão no terno. Lavar a conexão da linha de ar de qualquer produto de limpeza detergente desinfetante. Sem desconexão, o aspirador de detergente desinfetante não possa limpar a conexão da linha de ar. </li><li> Abra a porta que dava para a sala de terno e fechá-lo depois de sair. </li><li> Em caso de emergência, tal como um corte não-vida-ameaçadora ou incêndio, siga o mesmo procedimento descrito no ponto 5.2. </li></ol> 6. Procedimentos Suit quarto depois de sair do chuveiro Chemical <ol><li> Secar o exterior do terno com uma grande toalha. Descompacte o terno de pressão positiva, remova um lado da luva de terno exterior, e examinar o exterior da luva de borracha nitrílica exterior cuidadosamente para a umidade. </li><li> Se a umidade vazou através da luva de terno exterior, remova a luva terno exterior e luva de borracha nitrílica exterior e descarte em lixo resíduos de risco biológico. Remover o outro lado e repetir o teste. </li><li> Remover terno e continuar a secar exterior do terno para impedir seco rot dAmage. Pulverizar o interior do escudo rosto com limpador de vidro e seque. Pendurar a roupa para secar. Retire a fita adesiva e luvas de borracha nitrílica internas de esfrega e descartar esses itens em risco biológico designado lata de lixo de resíduos. </li><li> Documentar quaisquer vazamentos ou reparos no terno no registo de terno e comunicá-las à gestão de instalações. </li><li> Avance para o vestiário interno, remova esfrega sujos e meias, e colocá-los no cesto de roupa designado. Prossiga e entrar no chuveiro pessoal. </li></ol> 7. Duche Pessoal e Outer mudança de quarto saída Procedimentos <ol><li> Activa chuveiro e totalmente lavar o cabelo e do corpo durante um mínimo de 3 min, com sabão e água. Saia do chuveiro pessoal e proceder à mudança de quarto exterior. </li><li> Secar e roupas don rua, sair do quarto alteração Outer, coloque toalhas usadas no cesto de roupa designado, e siga para o Corredor de buffer. </li><li> Indique momento da saída do pessoal Entrada / Saída diário de bordo e indicar laboratório ex-lo na placa de localizador. </li></ol>

<ol><li>of Allergy and Infectious Diseases. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22NIAID+Category+A%2C+B%2C+and+C+Priority+Pathogens.+National+Institute+of+Allergy+and+Infectious+Diseases%22">NIAID Category A, B, and C Priority Pathogens. National Institute of Allergy and Infectious Diseases</a>. , National Institute. Bethesda, MD, . 
 <a target="_blank" href="http://www.niaid.nih.gov/topics/biodefenserelated/biodefense/pages/cata.aspx">http://www.niaid.nih.gov/topics/biodefenserelated/biodefense/pages/cata.aspx</a> (2013).</li>
<li>Chosewood, L. C., Wilson, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChosewood%2C+LC+%22Biosafety+in+Microbiological+and+Biomedical+Laboratories%22">Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories</a>. , 5th, U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service, Centers for Disease Control and Prevention, National Institutes of Health. Washington, D.C. 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5</a> (2009).</li>
<li>Shurtleff, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+regulations%2C+safety+considerations+and+physical+limitations+on+research+progress+at+maximum+biocontainment%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">The impact of regulations, safety considerations and physical limitations on research progress at maximum biocontainment.</a> Viruses. 4, 3932-3951 (2012).</li>
<li>Walker, J., Stern, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWalker%2C+J+%22A+Guide+to+the+Biosolids+Risk+Assessments+for+the+EPA+Part+503+rule%22">A Guide to the Biosolids Risk Assessments for the EPA Part 503 rule</a>. , US Environmental Protection Agency, Office of Wastewater Management. Washington D.C. 
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<li>Salkin, I. F., Krisiunas, E., Turnberg, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medical+and+infectious+waste+management%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Biosaf%22%5BJournal%5D)">Medical and infectious waste management.</a> Appl. Biosaf. 5 (2), 54-69 (2000).</li>
<li>de Kok-Mercado, F., Kutlak, F., Jahrling, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+NIAID+integrated+research+facility+at+Fort+Detrick%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Biosaf%22%5BJournal%5D)">The NIAID integrated research facility at Fort Detrick.</a> Appl. Biosaf. 16 (2), 58-66 (2011).</li>
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<li>Skvorc, C., Wilson, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+a+behavioral+health+screening+program+for+BSL-4+laboratory+workers+at+the+National+Institutes+of+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Biosecur.+Bioterror%22%5BJournal%5D)">Developing a behavioral health screening program for BSL-4 laboratory workers at the National Institutes of Health.</a> Biosecur. Bioterror. 9, 23-29 (2011).</li>
<li>Le Duc, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Framework+for+leadership+and+training+of+Biosafety+Level+4+laboratory+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Framework for leadership and training of Biosafety Level 4 laboratory workers.</a> Emerg. Infect. Dis. 14 (11), 1685-1688 (2008).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Nós delineado a entrada e saída procedimentos BSL-4 usado na unidade de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick para trabalhar com altamente perigosos (Grupo de Risco 4) patógenos. Uma finalidade de visualizar os procedimentos de entrada e saída BSL-4 é enfatizar a importância da segurança do pessoal de laboratório durante o trabalho com esses agentes patogénicos para evitar infecções adquiridas em laboratório. Por pressão negativa, BSL-4 laboratórios manter um fluxo de ar para dentro direccional para assegurar que os agentes patogênicos irá ser contido dentro do laboratório. ternos de pressão positiva com sistemas de ar de respiração dedicado usados ​​por pessoal de laboratório contato mitigar de organismos patogênicos com o pessoal de laboratório. Após o pessoal de laboratório sair do laboratório BSL-4, um chuveiro químico desinfecta a superfície do terno potencialmente contaminados e, portanto, impede a contaminação potencial do resto do edifício e da pessoa que muda fora do terno. À medida que a integridade da posititerno pressão ve é uma das várias barreiras primárias importantes para evitar a exposição potencial patógeno, a equipe é necessário para verificar se há vazamentos terno antes de entrada e depois de sair da BSL-4 laboratórios. Se ocorrer um vazamento, a equipe identifica a localização do vazamento e alertas de gestão de instalações. Estas práticas asseguram uma resposta rápida a qualquer exposição a patógenos de alta importância. Embora todo esforço é levado para eliminar o risco para o pessoal do laboratório, violações do terno pode ocorrer através da utilização de objectos de vidro, farelos, agressão animal, ou uso contínuo. Embora os procedimentos aqui apresentados geralmente seguem as especificações descritas BMBL pelo CDC 2, estes procedimentos são específicos para o IRF-Frederick. Cada instalação BSL-4 tem diferentes especificações de projeto de construção que impactam os métodos exatos de operação de laboratório. procedimentos alternativos para entrar e sair laboratórios BSL-4 dependerá em parte da sua concepção e funcionamento destes Laboratories. Além disso, os regulamentos governamentais em diferentes países também podem ter um efeito sobre BSL-4 procedimentos laboratoriais em cada país. No entanto, uma compreensão geral de BSL-4 procedimentos e a construção de sistemas que suportam a segurança do pessoal de laboratório ajudará os administradores de saúde que estão contemplando a concepção de edifícios semelhantes e colaboradores externos envolvidos nos estudos de patógenos de alto risco de monitoramento. Produtividade vai aumentar à medida que mais pessoal de laboratório é treinado em BSL-4 entrada de laboratório e procedimentos de saída e na condução de experimentos sob BSL-4 condições. No entanto, ao projetar protocolos com colaboradores externos, tempo suficiente deve ser alocado para executar até mesmo as operações básicas de laboratório, e as expectativas de prazos para a entrega de resultados tem que ser ajustado ao aceitar as dificuldades inerentes ao trabalho em BSL-4 laboratórios. Uma suposição generalizada é que qualquer experimento realizado em um NB-2 (por exemplo, 2 horas)exigirá duas vezes a quantidade de tempo para executar em BSL-4 (por exemplo, 4 horas).

O interesse científico em exóticos, patógenos de alta-consequência tem aumentado constantemente nos últimos anos. De particular interesse são patógenos considerados emergentes ou agentes de re-emergentes que são potenciais armas biológicas. Em termos de prioridade de investigação e risco, estes patógenos são classificadas pelos Centers for Disease Control and Prevention (CDC) como Bioterrorism Categoria AC agentes 1. Além disso, patógenos de alta-consequência são classificados como agentes selecionados [e] Toxinas no que diz respeito aos regulamentos de importação, de exportação e de acesso. Em os EUA, as regras e procedimentos de biossegurança que devem ser seguidas para o trabalho com patógenos especiais que exigem BSL-2, BSL-3, ou BSL-4 contenção estão descritos no Biossegurança na microbiológica e Biomedical Laboratories (BMBL) 2. Patógenos que são percebidos para apresentar o risco de saúde mais significativo para os seres humanos e / ou animais são considerados BSL-4 patógenos. Consequentemente, a pesquisa BSL-4 requer um cuidado especial, highlformação especializada y, e uma infra-estrutura de 3 instalação robusta e redundante. Para melhorar a consciência geral dos desafios associados com BSL-4 a pesquisa, a compreensão dos requisitos para as operações de construção de alta contenção, gerenciamento de sistemas e testes de validação de rotina de controles de engenharia é necessário. Temos como objectivo fazer avançar esse entendimento, apresentando visualmente o aumento dos padrões de operação e biossegurança, eo resultante aumento da dificuldade de hands-on pesquisa em BSL-4 contenção. Instalações de alojamento laboratórios BSL-4 terno deve atender a requisitos rigorosos, incluindo, mas não limitados a, sistemas de ventilação nonrecirculating dedicado, rigoroso sistema de tratamento de resíduos e processa 4,5, e sistemas de automação predial (BAS) 2,6,7. ar de alimentação de laboratório é filtrada uma vez e ar de exaustão é double-filtrada através de filtros de ar (HEPA) de partículas de alta eficiência, que são recertificadas anualmente. Além disso, oBMBL impõe requisitos rigorosos para a descontaminação de resíduos sólidos e coleta e descontaminação de todos os materiais de efluentes antes do lançamento no sistema de resíduos em geral. Redundâncias múltiplas são incorporadas ao sistema para impedir a libertação de qualquer tipo de BSL-4 patógeno. As operações de instalação do monitor BAS remotamente e pode identificar a área do problema. sistemas de apoio à instalação são verificados diariamente pelo pessoal para o funcionamento ideal e notificação de problemas em tempo real. Todos os sistemas são testados em uma base recorrente para cumprir com CDC / Divisão de selecionar agentes e toxinas requisitos para a operação de instalação. Além desses padrões para a instalação física, o pessoal do laboratório que trabalha com agentes selecionados e toxinas deve submeter-se a uma Avaliação de Risco de Segurança (SRA) pelo Departamento de Justiça antes de trabalhar com ou em torno selecionar agentes. Além disso, o pessoal que trabalha com o Tier 1 selecionar agentes (por exemplo, o vírus Ebola, Bacillus anthracis) deve ser inscritoem um Programa de Confiabilidade de pessoal (PRP), que avalia continuamente a saúde física e mental dos pesquisadores individuais 8. Os exames de saúde avaliar se os indivíduos são fisicamente capaz de realizar o trabalho em BSL-4 contenção de uma maneira segura. rastreios de saúde mental avaliar bem-estar geral, bem-estar psicológico e resiliência e sensibilização para a segurança do pessoal. No NIAID, os cientistas que trabalham com agentes selecionados passam por exame complementar em que cada indivíduo completa uma verificação e Consultas (ANACI) verificação de antecedentes Agência Nacional de Acesso, que examina as credenciais educacionais e profissionais, história criminal, história financeira e risco de influência estrangeira. Comparado a entrada laboratório BSL-2, a entrada máxima contenção exige uma consideravelmente maior investimento de recursos, tempo e treinamento. Após a aprovação SRA e registro junto à Divisão de selecionar agentes e toxinas, o pessoal deve ser submetido a hands-on rigorosas treming antes que o acesso aos laboratórios BSL-4 terno. Pessoal de laboratório recebe treinamento sobre o funcionamento da instalação, incluindo verificações diárias de funções críticas e procedimentos de entrada / saída 9. A equipe também é treinado em bio-segurança laboratorial e cuidado e uso de ternos de pressão positiva. ternos brancos feitos de tecido de poliéster com revestimento de cloreto de polivinilo são usados ​​na instalação NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick. Instalações que usam outros tipos / marcas comerciais de ternos de pressão positiva pode requerer procedimentos operacionais diferentes para entrar e sair do laboratório BSL-4 do que as descritas aqui. Pesquisadores em instalações que utilizam este artigo deve levar em conta essas diferenças antes do treino. terno treinamento no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick inclui procedimentos adequados para vestir o terno, garantindo o processo está funcionando corretamente, reparação e manutenção de ternos (dentro e fora do laboratório), e movendo-se dentro do laboratório. Emce esta formação é completa, o membro do pessoal de laboratório pode começar a trabalhar dentro dos laboratórios BSL-4 terno. Inicialmente, mais experientes mentores membro da equipe one-on-one o membro do pessoal recém-formados durante os primeiros cinco visitas aos laboratórios BSL-4 terno. Para trabalhar de forma independente no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick, o membro do pessoal recém-formados completa um mínimo de 40 visitas supervisionadas em BSL-4 laboratórios terno com pelo menos 100 horas de tempo de trabalho prático dentro dos laboratórios.

<table><tbody><tr><td>Micro-Chem Plus</td><td>National Chemical Laboratories</td><td>255</td><td></td></tr><tr><td>Windex</td><td>Grainger</td><td>3U560</td><td></td></tr><tr><td>Tampa de teste de pressão de alumínio Sperian</td><td>Honeywell Sperian</td><td>CC0199649</td><td></td></tr><tr><td>Kit de reparo de traje Sperian</td><td>Honeywell Sperian</td><td>CC0199621</td><td></td></tr><tr><td>Sperian Protection Suit Integrity Test Log</td><td>NA</td><td></td><td>NA Criado por Macacão de laboratório individual</td></tr><tr><td>Sperian traje de pressão positiva</td><td>Honeywell Safety Products</td><td>BSL 4-2</td><td></td></tr><tr><td>Água com sabão</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Criado por laboratório individual</td></tr><tr><td>Luvas de terno externo (enlatadores)</td><td>Fisher</td><td>19-019-601</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de terno externo (MAPA)</td><td>Fisher</td><td>2MYU1</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de terno de nitrilo interno</td><td>Fisher</td><td>19-050-592</td><td></td></tr><tr><td>Zip Lube</td><td>Amazon</td><td>B000GKBEJA</td><td></td></tr><tr><td>Scrubs</td><td>Cintas</td><td>60975/60976</td><td></td></tr><tr><td>Meias Cintas</td><td></td><td>944</td><td></td></tr><tr><td>Fita Adesiva</td><td>Pack-N-Tape</td><td></td> 51131069695 <td></td></tr><tr><td>Toalhas Cintas</td><td></td><td>2720</td><td></td></tr><tr><td>O-rings</td><td>O-ring armazém</td><td>AS568-343</td><td></td></tr><tr><td>Galochas</td><td>Amazon</td><td></td><td></td>B0034KZE22</tr><tr><td>Tanques de imersão de plástico</td><td>Fisher</td><td>14-831-113</td><td></td></tr><tr><td>Diário de entrada e saída</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Criado por laboratório individual</td></tr><tr><td>Pó de bebê</td><td>Amazon</td><td>44230</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Fisher</td><td>BP2818500</td><td></td></tr></tbody></table>

precauções de segurança e procedimentos operacionais em um (a) bsl-4 laboratoriais: 1. nível de biossegurança 4 suit laboratório suíte entrada e saída procedimentos

Safety Precautions and Operating Procedures in an (A)BSL-4 Laboratory: 1. Biosafety Level 4 Suit Laboratory Suite Entry and Exit Procedures

Os laboratórios de traje de nível de biossegurança 4 (BSL-4) são projetados especificamente para estudar patógenos de alta consequência para os quais não existem profilaxias de infecção nem opções de tratamento. As características desses laboratórios são: portas herméticas projetadas sob medida, sistemas dedicados de suprimento e fluxo de ar de exaustão, um ambiente de pressão negativa e uso obrigatório de roupas de pressão positiva ("espaço"). O risco para especialistas de laboratório que trabalham com agentes altamente patogênicos é minimizado por meio de treinamento rigoroso e adesão a protocolos de segurança rigorosos e procedimentos operacionais padrão. Os pesquisadores realizam a maior parte de seu trabalho em laboratórios BSL-2 e mudam para laboratórios de trajes BSL-4 quando é necessário trabalhar com um patógeno de alta consequência. Colaboradores e cientistas que consideram os projetos BSL-4 devem estar cientes dos desafios associados à pesquisa BSL-4, tanto em termos de limitações técnicas experimentais no espaço laboratorial BSL-4 quanto no aumento da duração de tais experimentos. Tarefas como entrar e sair dos laboratórios de trajes BSL-4 são consideravelmente mais complexas e demoradas em comparação com os laboratórios BSL-2 e BSL-3. O foco deste artigo em particular é abordar questões básicas de biossegurança e descrever os procedimentos de entrada e saída para o laboratório BSL-4 no Centro de Pesquisa Integrada NIH / NIAID em Fort Detrick. Tais procedimentos incluem a verificação de sistemas externos que suportam o laboratório BSL-4 e a inspeção e colocação de trajes de pressão positiva, entrada no laboratório, movimentação por portas resistentes à pressão de ar e conexão a mangueiras de suprimento de ar. Também discutiremos a mudança para dentro e para fora dos laboratórios de trajes BSL-4, incluindo o uso do chuveiro químico e a remoção e armazenamento de trajes de pressão positiva.

Equipe foi cuidadosamente e cuidadosamente treinados nessas técnicas para garantir práticas seguras e consistentes dentro de uma instalação BSL-4. Ao verificar se a unidade está a funcionar correctamente, como indicado na lista de verificação diária (Figura 1), somos capazes de garantir que todos os controlos administrativos e de engenharia necessários estão no lugar e funcionando para manter um ambiente seguro e em bom funcionamento. O processo de pressão positiva fornece uma camada adicional de proteção para o membro do pessoal. manutenção e uso adequado desses processos é essencial para a proteção pessoal para o membro do pessoal. Através da adesão estrita a esses procedimentos, não há infecções adquiridas em laboratório foram registrados no Centro de NIH / NIAID Integrated Research em Fort Detrick. <img alt="figura 1" src="/files/ftp_upload/52317/52317fig1.jpg" /> Figura 1: Lista de verificação visual diáriopara os sistemas de apoio e de backup para o BSL-4. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52317/52317fig1large.jpg" target="_blank">Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Embora os pesquisadores geralmente tenham conhecimento sobre os procedimentos e precauções de segurança necessários para experimentos de nível de biossegurança 1 ou 2 (BSL-1/2), eles podem não estar familiarizados com os procedimentos experimentais em laboratórios de trajes BSL-4. Este artigo fornece uma demonstração visual detalhada da verificação dos sistemas de laboratório de ternos BSL-4, procedimentos de entrada, movimento e saída do laboratório.

Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) BSL-4 laboratoriais: 1. Nível de Biossegurança 4 Suit Laboratório Suíte entrada e saída Procedimentos

Biosafety level 4 (BSL-4) suit laboratories are specifically designed to study high-consequence pathogens for which neither infection prophylaxes nor ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar como vestir e remover corretamente um traje de pressão positiva e como ingressar e sair de um nível de biossegurança para laboratório com traje tipo 4. Para o pessoal novo em pesquisas de alta contenção, este procedimento descreve as etapas envolvidas na colocação de um traje de pressão positiva e na entrada em um laboratório BSL-4 com traje. Por meio desta técnica, a segurança do pessoal na Instalação Integrada de Pesquisa do NIH em Fort Detrick é promovida mediante a inspeção dos equipamentos de proteção individual e a descontaminação adequada do traje.Quem demonstrará o procedimento será Ricky Adams, um técnico da Instalação Integrada de Pesquisa da NIH em Fort Detrick. Registre o nome da pessoa, o horário de entrada, a localização do laboratório e os patógenos em estudo no livro de registro de entrada e saída de pessoal. Indique a localização do laboratório e verifique se a entrada nos laboratórios foi autorizada.Para garantir que a pressão do laboratório esteja dentro dos pontos de ajuste de pressão negativa que mantêm o fluxo direcional adequado do ar, consulte a lista de verificação do sistema concluída. Obtenha roupas cirúrgicas, meias e toalhas no depósito que contém os suprimentos da instalação, localizado próximo ao livro de registro de entrada/saída do pessoal. Após passar pelos pontos de controle de acesso de segurança até o vestiário externo, remova as roupas de rua, roupas íntimas, joias e relógios.Coloque o jaleco e siga até a sala de trajes. Escolha um traje de proteção com pressão positiva e inspecione visualmente o traje em busca de furos, rasgos, perfurações, rompimentos nas costuras ou pontos fracos. Inspeccione cuidadosamente as luvas externas do traje, pois as luvas são o item mais propenso a sofrer danos.Troque as luvas pelo menos a cada sete dias do calendário, ou se for identificado algum dano nas luvas. Para substituir as luvas externas do traje neste modelo, remova a fita crepe da luva existente, encaixe o anel de vedação na manga e remova a luva antiga. Coloque uma nova luva sobre a extremidade da manga do traje e certifique-se de que a luva cubra completamente toda a extremidade e de que o polegar esteja na posição correta.Coloque a junta de borracha sobre a luva, encaixe-a no sulco do punho e use fita adesiva para fixar a luva externa do traje. Dobre o punho da luva sobre a fita adesiva e a junta de borracha, feche a luva com um último pedaço de fita adesiva e reinspecione a luva recém-instalada. Aplique uma camada fina de lubrificante para zíper na fivela pelo menos uma vez por semana.Em seguida, cubra cada uma das válvulas de escape no interior do traje com fita adesiva ou com uma tampa de teste de pressão de alumínio e feche o zíper do traje. Conecte o acoplamento de desconexão/conexão rápida na extremidade de cada mangueira respiratória à conexão da mangueira no traje. Inflar o traje até que os braços e as pernas estejam rígidos e posicione o traje em posição vertical.Desconecte o suprimento de ar. Não sobrepressurize a roupa, pois pressão excessiva pode causar danos graves à roupa. Inspecione cuidadosamente a roupa em busca de qualquer indicação de vazamento de ar por aproximadamente cinco minutos e verifique a roupa quanto a sinais de desinflação.Se o traje perder firmeza, verifique se há vazamentos no traje reinflando-o. Escute e sinta a presença de vazamentos no traje, que podem ocorrer nas costuras, no zíper e na junção da viseira com o traje. Se necessário, pulverize o traje com uma solução de sabão para ajudar a visualizar a localização do vazamento.Observe a formação de bolhas que indiquem vazamento, prestando especial atenção às costuras na viseira. Verifique se as válvulas de exaustão estão completamente seladas. Abra o zíper do traje e remova as coberturas das válvulas de exaustão.A falha ao remover as coberturas de exaustão impedirá a saída do ar e danificará gravemente o traje. Insira as informações de teste e reparo no registro de verificação de integridade do traje de pressão positiva. Em seguida, fixe com fita as meias nas pernas do jaleco cirúrgico.Use luvas de nitrila internas e prenda-as com fita adesiva às mangas do jaleco. Coloque um segundo par de luvas de nitrila sobre as luvas internas. Se necessário, limpe a parte interna do protetor facial com limpador de vidros para melhorar a visibilidade.Vista o traje de pressão positiva, feche completamente o zíper do traje e conecte a mangueira de ar respirável. Antes de entrar no laboratório BSL-4, certifique-se de que o sistema de automação do edifício indique pressão normal na zona. Para entrar nos laboratórios com traje BSL-4, desconecte-se da mangueira de ar respirável na sala de trajes e pressione o botão de solicitação de acesso para a câmara de duche químico.Para passar pela sala de ducha química, feche a porta resistente à pressão de ar, ou porta APR, para a sala de trajes e aguarde até que o balão vedante sela completamente o batente da porta. Ative a segunda porta APR, que conduz ao laboratório. Prossiga para o laboratório BSL-4 e conecte o traje a uma linha de ar respirável.Feche a porta do RPA que dá para o laboratório. Certifique-se de que o chuveiro químico seja ativado automaticamente. Após a conclusão do ciclo do chuveiro, a porta do RPA pode ser aberta novamente a partir da sala das roupas. Desloque-se livremente pelo laboratório alterando as conexões com as tubulações de ar comprimido. Mantenha-se conectado a uma tubulação de ar o máximo possível, mesmo ao se curvar. Observe os diversos alarmes dos monitores e o status atual da suíte.Para sair do laboratório da sala BSL-4, desinfete as mãos com luvas e os punhos no limpador desinfetante detergente em tanques plásticos de descarga. Se não houver tanque de descarga, pulverize completamente as mãos com luvas com desinfetante. Desconecte-se da linha de ar respirável e dirija-se ao chuveiro químico.Entre no chuveiro químico pressionando o botão de solicitação de acesso para abrir a porta APR a partir do laboratório e feche a porta. Reconecte o traje a uma linha de ar respirável no interior do chuveiro. Uma vez que a porta APR esteja fechada, o ciclo do chuveiro químico deve iniciar automaticamente.Verifique vazamentos nas luvas e nos pés colocando as mãos e os pés com luvas dentro do recipiente plástico contendo a solução desinfetante detergente mantida dentro do chuveiro químico. Verifique rasgos, furos ou partes enfraquecidas na luva externa e observe a presença de líquido aprisionado sob a luva externa. Caso seja encontrado um vazamento, aguarde a conclusão do ciclo do chuveiro, remova a luva externa do traje e deixe-a no recipiente plástico.Esfregue o traje e as botas integradas ao traje com uma escova de cabo longo ou com as mãos para distribuir o desinfetante químico sobre o traje. Enxágue completamente o traje do detergente desinfetante durante o ciclo de água do chuveiro. Desconecte a mangueira de ar respirável, desinfete e enxágue a conexão no traje durante os ciclos químico e de água do chuveiro.Após a conclusão, abra a porta do APR que dá acesso à sala das roupas e feche-a após sair. Seque o exterior da roupa com uma toalha grande. Desfaça o zíper da roupa de pressão positiva.Retire uma das mãos da luva externa do traje e examine cuidadosamente o lado externo da luva de Nitrila externa em busca de umidade. Retire a outra mão e repita a verificação. Remova o traje, pendure-o e continue secando a parte externa do traje para prevenir danos por ressecamento.Pulverize o interior do protetor facial com limpador de vidros e seque com um pano. Após pendurar o macacão para secar, remova a fita crepe e as luvas internas de nitrila do jaleco e descarte esses itens no lixo de resíduos biológicos. Prossiga para o vestiário, remova o jaleco e as meias e entre no chuveiro pessoal.Após o banho individual, registre a hora de saída no livro de registro de entrada do pessoal e indique a saída do laboratório no quadro de localização. A equipe foi treinada cuidadosa e minuciosamente nessas técnicas para garantir práticas seguras e consistentes dentro de uma instalação de nível de biossegurança quatro. Verificando que a instalação está funcionando corretamente, conforme indicado na lista de verificação diária, todos os controles administrativos e de engenharia necessários estão em vigor para manter um ambiente seguro.O traje de pressão positiva fornece uma camada adicional de proteção para o funcionário. A manutenção e o uso adequados desses trajes são essenciais para essa proteção. O rigoroso cumprimento desses procedimentos e práticas, bem como o uso correto de controles de engenharia, ajudam a prevenir infecções adquiridas em laboratório e garantem o confinamento de materiais infecciosos.A Instalação de Pesquisa Integrada do NIH NIAID em Fort Detrick não documentou até o momento nenhuma infecção laboratorial adquirida. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como vestir e remover um traje de pressão positiva e como ingressar e sair de um laboratório de nível de biossegurança quatro com traje. Esses procedimentos ilustram as práticas geralmente adotadas no IRF e podem não ser representativos dos procedimentos em outros laboratórios BSL-4.Ao trabalhar em outros laboratórios de biossegurança nível quatro, siga o protocolo específico daquele laboratório.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

A realização de ensaios virais em um laboratório BSL-4 é mais complicada em comparação com o trabalho em um laboratório BSL-2 devido às precauções de segurança adicionais necessárias. Aqui, apresentamos uma visão geral das práticas e procedimentos usados dentro de um laboratório BSL-4, ilustrando o uso adequado do gabinete de biossegurança Classe II, gerenciamento/descarte de resíduos e remoção de amostras.

Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) de laboratório BSL-4: 2. Práticas Gerais

Aqui, apresentamos uma visão geral dos procedimentos de preparação e manuseio de animais necessários para realizar com segurança imagens médicas em um laboratório de nível 4 de biossegurança animal. A tomografia computadorizada de uma cobaia simulada infectada ilustra esses procedimentos que podem ser usados para avaliar a doença causada por um patógeno de alta consequência.

Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) BSL-4 laboratoriais: 4. Procedimentos Médicos de Imagem

Como patógenos de alta consequência podem potencialmente infectar indivíduos por meio de partículas transportadas pelo ar, a aerobiologia tem sido cada vez mais aplicada na pesquisa de patogênese e no desenvolvimento de contramedidas médicas. Apresentamos uma demonstração visual detalhada dos procedimentos aerobiológicos durante um desafio de aerossol em primatas não humanos em um ambiente de contenção máxima de nível 4 de biossegurança animal.

Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) BSL-4 laboratoriais: 3. aerobiologia

Um laboratório rapidamente destacáveis, fora da rede foi projetado e construído para configurações globais remotas, com recursos limitados. São explorados as características e aspectos críticos dos módulos de laboratório avançado logisticamente, expansível, multifuncional. Uma lista de verificação para um fluxo de trabalho básico de laboratório e um protocolo para um teste de diagnóstico viral respiratório são desenvolvidos e apresentados.

Gerenciamento remoto do laboratório: Diagnósticos de vírus respiratório

O protocolo resume as melhores práticas para minimizar a carga biológica microbiana em um ambiente de sala limpa e inclui estratégias como monitoramento ambiental, monitoramento de processo e teste de esterilidade do produto. É relevante para instalações de fabricação e teste que são necessárias para atender aos padrões atuais de boas práticas de tecidos e aos padrões atuais de boas práticas de fabricação.

Estratégias de Controle e Monitoramento Microbiano para Ambientes de Salas Limpas e Terapias Celulares

Aqui, descrevemos a estrutura e os procedimentos operacionais, incluindo medidas de contenção microbiana de uma instalação para "camundongos selvagens" usando amostragem de sangue para imunofenotipagem como exemplo.

Procedimentos Operacionais e de Biocontenção de uma Instalação para Camundongos de Laboratório com Microbioma Natural: Procedimento de Imunofenotipagem

Terapia anti-retroviral para o tratamento de HIV / AIDS é monitorado na África do Sul em grande escala. Citometria de fluxo é combinado para hematologia (CD45), imunologia (CD4) e carga viral-CD38 ligado ensaio. Gravado no LNH-SA laboratórios, Johannesburg, estes métodos modernos são custo-eficiente com controle de qualidade elevada locais internos, servindo como modelos para recursos limitados de diagnósticos.

Monitoramento Laboratório abrangente e Custo Efetivo de HIV / AIDS: um Modelo de Papel Africano

Tropismo do HIV pode ser inferida a partir da região V3 do envelope viral. V3 é PCR amplificados em triplicata utilizando nested RT-PCR, sequenciado, e interpretados usando software de bioinformática. Amostras com a seqüência de um ou mais (s) com pontuações baixas são G2P classificados como não-R5 vírus.

Inferência genotípica do HIV-1 Tropismo Usando de base populacional de Seqüenciamento V3

Este artigo descreve vários procedimentos para ratos e camundongos de triagem para detectar endo-ou ectoparasitism. Vários ensaios de diagnóstico será demonstrado, tanto os adequados para uso de animais vivos e aqueles usados ​​após a eutanásia do animal. Fotografias para auxiliar na identificação de parasitas ratos e camundongos serão incluídos.

Diagnóstico de Ecto e Endoparasitas em ratos de laboratório e Ratos

Catadores têm potencial para translocam infecciosas transmissíveis prions encefalopatia espongiforme em suas fezes para áreas livres da doença. Nós métodos de detalhes usados ​​para determinar se prions de scrapie mouse adaptados permanecer infeccioso após a passagem que o trato digestivo dos corvos-americanos (Corvus brachyrhynchos), o consumidor comum de animais mortos.

Procedimentos para identificar Infecciosas príons após a passagem através do sistema digestivo de uma espécie de aves

Aprenda os procedimentos de entrada e saída em laboratório BSL-4, incluindo o uso correto de trajes de pressão positiva e protocolos de descontaminação para garantir a segurança do pessoal em pesquisa de alta contenção.

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Precauções de segurança e Procedimentos Operacionais em um (A) BSL-4 laboratoriais: 1. Nível de Biossegurança 4 Suit Laboratório Suíte entrada e saída Procedimentos

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