Name: Uma análise comparativa de Expressão de proteínas recombinantes em Diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e Sistemas de Plantas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Explore a expressão de proteínas recombinantes humanas em plataformas de bactérias, células de insetos e sistemas de plantas. Este estudo compara rendimento, qualidade e limitações de cada biofábrica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi apoiado pela ação COST 'Molecular pharming: Plants as a production platform for high-value proteins' FA0804. Os autores agradecem ao Dr. Anatoli Giritch e ao Prof. Yuri Gleba por fornecerem os vetores MagnICON para fins de pesquisa.

<ol><li>Hampe, C. S., Hammerle, L. P., Falorni, A., Robertson, J., Lernmark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-directed+mutagenesis+of+K396R+of+the+65+kDa+glutamic+acid+decarboxylase+active+site+obliterates+enzyme+activity+but+not+antibody+binding%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Site-directed mutagenesis of K396R of the 65 kDa glutamic acid decarboxylase active site obliterates enzyme activity but not antibody binding.</a> FEBS Lett. 488 (3), 185-189 (2001).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+GAD65+accumulates+to+high+levels+in+transgenic+tobacco+plants+when+expressed+as+an+enzymatically+inactive+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Recombinant human GAD65 accumulates to high levels in transgenic tobacco plants when expressed as an enzymatically inactive mutant.</a> Plant Biotechnol. J. 9 (8), 862-872 (2010).</li>
<li>Sambrook, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+laboratory+manual.+Second+Edition%22">Molecular Cloning: A laboratory manual. Second Edition</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1989).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+biofactories+for+the+production+of+a+major+diabetes+autoantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different biofactories for the production of a major diabetes autoantigen.</a> Transgenic Res. 23, 281-291 (2014).</li>
<li>Marillonnet, S., Giritch, A., Gils, M., Kandzia, R., Klimyuk, V., Gleba, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+planta+engineering+of+viral+RNA+replicons%3A+efficient+assembly+by+recombination+of+DNA+modules+delivered+by+Agrobacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+%28USA%29%22%5BJournal%5D)">In planta engineering of viral RNA replicons: efficient assembly by recombination of DNA modules delivered by Agrobacterium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 101 (18), 6852-6857 (2004).</li>
<li>Gleba, Y., Klimyuk, V., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+the+expression+of+proteins+in+plants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for the expression of proteins in plants).</a> Curr. Opin. Biotechnol. 18, 134-141 (2007).</li>
<li>Engler, C., Kandzia, R., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one+pot%2C+one+step%2C+precision+cloning+method+with+high+throughput+capability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability.</a> PLoS One. 3 (11), (2008).</li>
<li>Xu, R., Li, Q. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol%3A+streamline+cloning+of+genes+into+binary+vectors+in+Agrobacterium+via+the+Gateway+TOPO+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Protocol: streamline cloning of genes into binary vectors in Agrobacterium via the Gateway TOPO vector system.</a> Plant Methods. 4 (4), 1-7 (2008).</li>
<li>Fairbanks, G., Steck, T. L., Wallach, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+analysis+of+the+major+polypeptides+of+the+human+erythrocyte+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane.</a> Biochemistry. 10 (13), 2606-2617 (1971).</li>
<li>Falorni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioimmunoassay+detects+the+frequent+occurrence+of+autoantibodies+to+the+Mr+65%2C000+isoform+of+glutamic+acid+decarboxylase+in+Japanese+insulin-dependent+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Radioimmunoassay detects the frequent occurrence of autoantibodies to the Mr 65,000 isoform of glutamic acid decarboxylase in Japanese insulin-dependent diabetes.</a> Autoimmunity. 19, 113-125 (1994).</li>
<li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+gene+to+protein%3A+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr.+Purif%22%5BJournal%5D)">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expr. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li>
<li>Arzola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+co-expression+of+post-transcriptional+silencing+suppressor+for+increased+in+planta+expression+of+a+recombinant+anthrax+receptor+fusion+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Transient co-expression of post-transcriptional silencing suppressor for increased in planta expression of a recombinant anthrax receptor fusion protein.</a> Int. J. Mol. Sci. 12 (8), 4975-4990 (2011).</li>
<li>Merlin, M., Gecchele, E., Capaldi, S., Pezzotti, M., Avesani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+recombinant+protein+production+in+different+biofactories%3A+the+green+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of recombinant protein production in different biofactories: the green perspective.</a> Biomed. Res. Int. 2014, 136419(2014).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+planta+expression+of+the+human+islet+autoantigen+glutamic+acid+decarboxylase+%28GAD65%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Improved in planta expression of the human islet autoantigen glutamic acid decarboxylase (GAD65).</a> Transgenic Res. 12 (2), 203-212 (2003).</li>
<li>Leuzinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+agroinfiltration+of+Plants+for+high-level+transient+expression+of+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient agroinfiltration of Plants for high-level transient expression of recombinant proteins.</a> J Vis Exp. (77), (2013).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflito de interesses em relação à publicação deste artigo.

Neste estudo três plataformas diferentes foram comparadas para a expressão de uma proteína humana recombinante: células bacterianas, células de baculovírus / insecto e plantas. A plataforma baseada em plantas foi mais explorado através da exploração de três tecnologias de expressão amplamente utilizados (isto é, transitória - MagnICON e pK7WG2 base - e estáveis). A proteína alvo escolhido para este experimento, hGAD65mut, foi previamente expressos em diferentes sistemas de 13, e sua produção e funcio...

As proteínas recombinantes são produzidas comercialmente em massa em sistemas de expressão heterólogos com o auxílio de ferramentas emergentes de biotecnologia. Os principais fatores que devem ser considerados ao escolher o sistema de expressão heteróloga incluem: qualidade da proteína, funcionalidade, velocidade do processo, rendimento e custo.
No campo das proteínas recombinantes, o mercado de produtos farmacêuticos está se expandindo rapidamente e, consequentemente, a maioria dos biofármacos produzidos hoje são recombinantes. As proteínas podem ser expressas em culturas de células de bactérias, leveduras, bolores, mamíferos, plantas e insetos, bem como em sistemas vegetais (por meio de transformação estável ou transitória) e animais transgênicos; Cada sistema de expressão tem suas vantagens e limitações inerentes e, para cada proteína recombinante alvo, o sistema de produção ideal deve ser cuidadosamente avaliado.
As plataformas à base de plantas estão surgindo como uma alternativa importante aos sistemas tradicionais baseados em fermentadores para a produção segura e econômica de proteínas recombinantes. Embora os custos de processamento a jusante sejam comparáveis aos das células microbianas e de mamíferos, o menor investimento inicial necessário para a produção comercial em plantas e a potencial economia de escala, proporcionada pelo cultivo em grandes áreas, são vantagens importantes.
Avaliamos plantas como biorreatores para a expressão da isoforma de 65 kDa da descarboxilase do ácido glutâmico humano (hGAD65), um dos principais autoantígenos do diabetes autoimune tipo 1 (DM1). O hGAD65 é amplamente adotado como marcador, tanto para classificar quanto para monitorar a progressão da doença e seu papel na prevenção do DM1 está atualmente sob investigação em ensaios clínicos. Se esses testes forem bem-sucedidos, a demanda global por hGAD65 recombinante aumentará drasticamente.
Aqui, nos concentramos na expressão da contraparte enzimaticamente inativa de hGAD65, hGAD65mut, um mutante gerado pela substituição do resíduo de lisina que se liga ao cofator PLP (piridoxal-5'-fosfato) por um resíduo de arginina (K396R)1. 
hGAD65mut retém sua imunogenicidade e, em células de plantas e insetos, acumula até dez vezes mais do que hGAD65, sua contraparte do tipo selvagem. Foi levantada a hipótese de que a atividade enzimática do hGAD65 interfere no metabolismo das células vegetais a tal ponto que suprime sua própria síntese, enquanto o hGAD65mut, a forma enzimaticamente inativa, pode ser acumulada nas células vegetais em níveis mais altos.
Para a expressão de hGAD65mut, o uso de diferentes tecnologias, amplamente utilizadas em biotecnologia vegetal, foi explorado aqui e comparado a plataformas de expressão tradicionais (Escherichia coli e Baculovirus/inseto
Neste trabalho, as plataformas recombinantes desenvolvidas para a expressão de hGAD65mut compreendendo sistemas tradicionais e baseados em plantas foram revisadas e comparadas com base na velocidade e rendimento do processo, e na qualidade e funcionalidade do produto final.

<table><tbody><tr><td>Extrato de levedura</td><td>Sigma</td><td>Y1333</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Formedium</td><td>TRP03</td><td></td></tr><tr><td>Agar Bacteriological Grade</td><td>Applichem</td><td>A0949</td><td></td></tr><tr><td>Sf-900 II SFM meio</td><td>Gibco</td><td>10902-088</td><td></td></tr><tr><td>Grace' s Insect Medium, não suplementado</td><td>Gibco</td><td>11595-030</td><td></td></tr><tr><td>Cellfectin II Reagent</td><td>Invitrogen</td><td>10362-100</td><td></td></tr><tr><td>MS meio incluindo vitaminas</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M0222</td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Ágar vegetal</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>P1001</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina sódica</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>A0104</td><td>Sulfato</td></tr> de <tr><td>Gentamicina</td> Tóxico <td>Duchefa Biochemie</td><td>G0124</td><td></td></tr><tr><td>Ganciclovir</td> Tóxico <td>Invitrogen</td><td>I2562-023</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicilina dissódica</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C0109</td><td>Sulfato de</td></tr><tr><td>Canamicina</td> Tóxico <td>Sigma</td><td>K4000</td><td></td></tr><tr><td>Rifampicina</td> Tóxica <td>Duchefa Biochemie</td><td>R0146</td><td>Tóxico & ndash; 25 mg/ml de estoque em</td></tr><tr><td>sulfato de estreptomicina</td> DMSO <td>Duchefa Biochemie</td><td>S0148</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de espectinomicina</td> tóxica <td>Duchefa Biochemie</td><td>S0188</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropil-&beta;-D-1-tiogalattopiranosídeo)</td><td>Sigma</td><td>I5502</td><td>Hidrato MES tóxico</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Bioquímico</td><td>436994U</td><td></td></tr><tr><td>Acetosiringona</td><td>Sigma</td><td>D134406</td><td>Tóxico - 0,1 M estoque em</td></tr><tr><td>seringa DMSO (1 ml)</td> <td>Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fluka</td><td>63136</td><td></td></tr><tr><td>BAP (6-benzilaminopurina)</td> <td>Sigma</td><td>B3408</td><td>Tóxico</td></tr><tr><td>NAA (ácido naftaleno acético)</td> <td>Duchefa Biochemie</td><td>N0903</td><td></td></tr><tr><td>Cefotaxima irritante</td><td>Mylan Generics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td>Ajuste o pH com 1 N HCl para fazer o tampão Tris-HCl</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td>NaCl corrosivo</td></tr><tr><td></td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>1 M estoque</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>PMSF (fluoreto de fenilmetanossulfonilfluoreto)</td><td>Sigma</td><td>P7626</td><td>Corrosivo, tóxico</td></tr><tr><td>Uréia</td><td>Sigma</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td>Tóxico</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P5927</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>DTT (Ditiotreitol)</td><td>Sigma</td><td>D0632</td><td>Tóxico &ndash; 1 M de estoque, armazene a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C1374</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel de inibidores de protease de plantas</td> tóxicas <td>Sigma</td><td>P9599</td><td>Não congele/descongele muitas vezes</td></tr><tr><td>SDS (Dodecil sulfato de sódio)</td><td>Sigma</td><td>L3771</td><td>Inflamável, tóxico, corrosivo - 10% de estoque</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Azul Brilhante R-250</td><td>Sigma</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma</td><td>24137</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético</td> inflamável <td>Sigma</td><td>27221</td><td>Ácido</td></tr><tr><td>anti-glutâmico corrosivo descarboxilase 65/67</td><td>Sigma</td><td>G5163</td><td>Não congele/descongele muitas vezes</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-coelho conjugado com peroxidase de rábano (HRP)</td><td>Sigma</td><td>A6154</td><td>Não congele/descongele muitas vezes</td></tr><tr><td>Células Sf9 Vida</td><td> Technologies</td><td>11496</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Competente E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C2530H</td><td></td></tr><tr><td>Proteína A Sepharose</td><td>Sigma</td><td>P2545</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de células</td><td>Sigma</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>Radio Immuno Assay kit</td><td>Techno Genetics</td><td>12650805</td><td>Material radioativo</td></tr></tbody></table>

uma análise comparativa de expressão de proteínas recombinantes em diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e sistemas de plantas

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

Sistemas baseados em plantas são consideradas uma plataforma valiosa para a produção de proteínas recombinantes, como resultado do seu potencial bem documentado para a produção flexível, de baixo custo de elevada qualidade, produtos bioactivos. Neste estudo, comparou-se a expressão de uma proteína recombinante humana alvo em culturas tradicionais baseados em fermentador de células bacterianas (e de insectos) com os sistemas de expressão à base de plantas, tanto transitórios e estáveis. Para cada plataforma, foi descrita a configuração, o comprimento e optimização do processo de produção, a qualidade do produto final e os rendimentos e avaliou-se os custos de produção provisórias, específicos para a proteína recombinante alvo seleccionado. Em geral, os nossos resultados indicam que as bactérias são inadequadas para a produção da proteína alvo, devido à sua acumulação no interior de corpos de inclusão insolúveis. Por outro lado, os sistemas à base de plantas são versáteis t plataformaschapéu permitir a produção da proteína seleccionada a custos mais baixos do que Baculovirus sistema de célula de insecto /. Em particular, linhas transgénicas estáveis ​​demonstraram o mais alto rendimento, do produto final e transientes plantas que expressam o processo mais rápido de desenvolvimento. No entanto, nem todas as proteínas recombinantes podem beneficiar de sistemas à base de plantas, mas a melhor plataforma de produção deve ser determinada empiricamente com uma abordagem caso a caso, conforme descrito aqui.

Um desenho experimental para a expressão heteróloga de uma proteína alvo recombinante em diferentes sistemas de produção está descrito aqui. O primeiro foco foi a configuração das diferentes plataformas, estabelecendo as condições óptimas para a expressão da proteína alvo em cada sistema. A expressão da proteína alvo, hGAD65mut, foi induzida em triplicado E. culturas de E. coli. Após 3 h de expressão a 37 ° C, as células bacterianas foram recolhidas por centrifugação e lisa...

Neste estudo, a expressão de uma proteína recombinante humana alvo em diferentes plataformas de produção foi comparada. Focamos em culturas tradicionais baseadas em fermentadores e em plantas, descrevendo a configuração de cada sistema e destacando, com base nos resultados relatados, os limites e vantagens inerentes a cada plataforma.

Uma análise comparativa de Expressão de proteínas recombinantes em Diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e Sistemas de Plantas

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

a-comparative-analysis-recombinant-protein-expression-different

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Na era pós-genômica humana, a disponibilidade de proteínas recombinantes em conformações nativas é crucial para a investigação estrutural, funcional e terapêutico e desenvolvimento. Aqui, nós descrevemos um-teste e em grande escala sistema de expressão de proteínas em células humanas embrionárias de rim 293T que podem ser utilizados para produzir uma variedade de proteínas recombinantes.

A Plataforma de expressão adequada e geral para a produção de proteínas secretadas a partir de células humanas

Plantas oferecer um novo sistema para a produção de proteínas farmacêuticas, em escala comercial, que é mais escalável e de custo eficaz e segura que paradigmas expressão corrente. Neste estudo, apresentamos uma abordagem simples e conveniente, mas escalável para introduzir genes alvo...

Agroinfiltration eficiente de plantas para alto nível de expressão transiente de proteínas recombinantes

Desenvolvimento de proteínas de fusão biotinylatable tem muitas aplicações potenciais em diversas áreas de pesquisa. Engenharia de proteínas recombinantes é um procedimento para a frente que é eficaz em termos de custos, rendimentos elevados de proteínas personalizados.

Expressão, isolamento e purificação do solúveis e insolúveis biotinilados Proteínas de Tecido Nervoso Regeneração

A expressão de proteínas recombinantes por sistemas de mamíferos está se tornando um método atraente para a produção de complexos proteicos para biologia estrutural. Aqui apresentamos um sistema de expressão simples, mas altamente eficiente, usando células de mamíferos cultivadas em suspensão para purificar complexos de proteínas para estudos estruturais.

Expressão de proteínas recombinantes de Biologia Estrutural em HEK 293F Suspensão Cells: Uma abordagem inovadora e acessível

A co-expressão de proteínas é uma alternativa poderosa para a reconstituição in vitro de complexos proteicos e auxilia na realização de testes bioquímicos e genéticos in vivo. Aqui relatamos o uso da co-expressão de proteínas em Escherichia coli para obter complexos proteicos e ajustar a frequência de mutação das células.

As multifacetadas benefícios da proteína Co-expressão em<em&gt; Escherichia coli</em

A produção em escala laboratorial de proteínas eucarióticas com modificação pós-traducional apropriada representa uma barreira significativa. Aqui está um protocolo robusto com rápido estabelecimento e retorno para expressão de proteínas usando um sistema de expressão de mamíferos. Este sistema suporta aminoácidos seletivos, marcação seletiva de proteínas e moduladores de moléculas pequenas da composição de glicanos.

High Yield Expressão de proteínas recombinantes humanas com o Transient transfecção de células HEK293 em suspensão

sistemas de expressão em células de insecto Nonlytic são pouco utilizados para a produção, o tráfico celular / localização, e a análise funcional da proteína recombinante. Aqui, nós descrevemos métodos para gerar vectores de express e subsequente expressão da proteína transiente em linhas de células de lepidópteros disponíveis comercialmente. A co-localizao de aquaporinas de Bemisia tabaci com proteínas marcadoras fluorescentes subcelulares também é apresentada.

Expressão transitória e Celular Localização de proteínas recombinantes em células de cultura de insectos

Este manuscrito descreve uma abordagem genérica de design à medida dos meios de cultivo microbiano. Isso é ativado por um fluxo de trabalho iterativo combinando Kriging experimental design e microbioreactor tecnologia para throughput de cultivo suficientes, que é apoiado pela robótica de laboratório para aumentar a confiabilidade e a velocidade em mídia de manuseio de líquidos preparação.

Protocolo genérico para otimização da produção de proteína heteróloga usando tecnologia automatizada de Microbioreactor

Este protocolo descreve um calor induzida por choque proteína expressão (sistema pDHsp/V5-His/sf9 célula), que pode ser usado para expressar proteínas estranhas ou avaliando a atividade anti-apoptotic de potenciais proteínas estranhas e seus truncado amino ácidos em células de inseto.

Expressão transiente de estrangeiros Genes em células de inseto (sf9) para o ensaio funcional da proteína

Aqui, apresentamos os protocolos para utilizando o inseto sistema expressão da proteína celular e baculovirus para produzir grandes quantidades de proteínas vegetais secretada por cristalização de proteínas. Um vetor de expressão de baculovirus foi modificado com GP67 ou inseto hemolin peptídeo sinal planta secreção na expressão de proteínas nas células de inseto.

Modificar vetores de expressão de Baculovirus para produzir secretado proteínas vegetais em células de inseto

O sistema vetorial de expressão baculovírus (BEVS) é uma plataforma robusta para triagem de expressão e produção de metiltransferases de arginina proteica (PRMTs) a serem utilizadas para estudos bioquímicos, biofísicos e estruturais. Quantidades de miligrama de material podem ser produzidas para a maioria dos PRMTs e outras proteínas de interesse que requerem uma plataforma de expressão eucariótica.

Produção de Proteínas PRMT Recombinantes utilizando o Sistema Vetorial de Expressão baculovírus

Explore a expressão de proteínas recombinantes humanas em plataformas de bactérias, células de insetos e sistemas de plantas. Este estudo compara rendimento, qualidade e limitações de cada biofábrica.

Uma análise comparativa de Expressão de proteínas recombinantes em Diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e Sistemas de Plantas (Vídeo) | JoVE Journal

Uma análise comparativa de Expressão de proteínas recombinantes em Diferentes biofábricas: bactérias, células de insectos e Sistemas de Plantas

Explorar mais vídeos