Uso de Chironomidae (Diptera) Pupal Exuviae como um Bioavaliação Protocolo Rápido para massas de água de superfície flutuante

O objetivo geral deste procedimento é descrever as técnicas de coleta e processamento de amostras de pupila flutuante de superfície para avaliação da qualidade da água. Isso é feito coletando primeiro amostras de campo de Chiron pupil ex de ambientes aquáticos. Na segunda etapa, uma subamostra de 300 espécimes é escolhida de cada amostra de campo, e as amostras são separadas em grupos morfológicos distintos.

Na etapa final, vários representantes de cada grupo são montados em lâminas de microscópio de vidro. Em última análise, os espécimes são identificados por gênero ou espécie para avaliar as condições de qualidade da água. A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como a amostragem tradicional de macroinvertebrados bentônicos, é que a coleta e o processamento das amostras são eficientes, econômicos e aplicáveis em quase todos os ambientes aquáticos.

O uso dessa técnica produz informações valiosas para estudos de monitoramento biológico e pode fornecer informações sobre como os locais mudam ao longo do tempo devido a distúrbios, eventos de poluição ou mudanças climáticas. Embora estejamos nos concentrando em como essa técnica pode ser usada em um habitat de riacho, ela pode ser facilmente aplicada a outros sistemas aquáticos, como rios, lagos, lagoas, es, júris ou piscinas rochosas antes de ir para o campo. Coloque uma etiqueta de data e localidade dentro e uma etiqueta na parte externa de um frasco de amostra para cada amostra a ser coletada.

Em seguida, para cada amostra, com uma bandeja larval em uma mão e uma peneira na outra, mergulhe a bandeja larval na água onde o exsudato da pupila se acumula quando o exus da pupila de água e os detritos entram na bandeja larval ou na amostra através da peneira. Após 10 minutos de coleta, use uma garrafa cheia de água coletada do sample alcance para concentrar quaisquer detritos em uma área da peneira. Em seguida, usando uma pinça e um jato de etanol, transfira cuidadosamente o exus da pupila para o frasco de amostra pré-rotulado apropriado e encha o frasco com etanol.

Para iniciar a colheita da amostra, coloque a etiqueta apropriada da data e da localidade em um frasco Dr. para cada amostra de exsudato da pupila e encha o frasco até três quartos com etanol. Em seguida, remova a tampa do frasco de amostra correspondente e verifique se há algum ex de pupila preso na tampa. Usando uma garrafa de esguicho de etanol, enxágue suavemente o conteúdo da tampa em uma placa de Petri.

Em seguida, remova o rótulo de dentro do frasco de amostra. Enxágue suavemente o conteúdo do rótulo na placa de Petri também e coloque o rótulo de lado. Em seguida, transfira o conteúdo do frasco de amostra para uma bandeja de larvas brancas e lave o frasco com etanol para garantir que nenhum exsudato da pupila permaneça no frasco.

Transferir um eloquente do resíduo de exsudado pupilar e etanol da bandeja larval para a placa de Petri. Certifique-se de que a amostra esteja coberta com etanol. Em seguida, coloque a placa de Petri sob um microscópio estéreo e escaneie sistematicamente a placa em busca de organismos.

Em seguida, use uma pinça para transferir o exsudato da pupila do prato para o frasco correspondente apropriado. Tente evitar pegar o exsudato da pupila que está quebrado ou seco para evitar problemas de identificação posteriores. Quando todo o exsudato visível da pupila tiver sido transferido, gire e escaneie o prato mais três vezes em busca de amostras adicionais, incluindo qualquer uma que possa estar presa nas laterais do prato.

Quando 300 exe de pupila tiverem sido selecionados, retorne o resíduo da placa de Petri para a bandeja larval e lave a placa de Petri com etanol. Em seguida, transfira o resíduo da bandeja larval para o frasco de amostra vazio. Adicione o rótulo da data e da localidade ao frasco e coloque a tampa em cima do frasco para classificar as amostras.

Despeje o exus da pupila do frasco rotulado em uma placa de Petri cheia de etanol suficiente para cobrir apenas as amostras. Em seguida, sob um microscópio estereoscópico, use as características morfológicas externas do Chiron Pub ex para separar os espécimes em morph axa e transfira os diferentes morph Axa para frascos rotulados separadamente. Os três quartos cheios com etanol ou exemplo ao classificar pelo Celi thax usam diferenças na presença, tamanho, forma e coloração do corno torácico para distinguir espécimes.

Se classificar pelo abdômen, use os espinhos, cabelos e esporões dos segmentos abdominais e do lobo anal para a separação da morfis. Após a classificação, encha um poço de uma placa de poços múltiplos para cada axônio morfo com etanol a 95% e coloque várias representações de cada táxon morfo em poços individuais da placa por pelo menos 10 minutos para permitir dessecação suficiente. Em seguida, enquanto as amostras estão secando, rotule os slides com o conjunto de sites apropriado e as informações de identificação para montar as pessoas exus.

Cole um modelo da lâmina no estágio de um microscópio e coloque uma lâmina em cima desse modelo. Em seguida, espalhe uma gota de URL na lâmina para que ela se aproxime do tamanho de uma lamínula e use uma pinça para bater suavemente um representante do primeiro axônio morfo em um lenço de laboratório para remover qualquer excesso de etanol. Agora incorpore a amostra no URL e use uma pinça com ponta de coluna e uma sonda de dissecção para separar o sepha thax do abdômen.

O aspecto mais difícil deste procedimento é desenvolver a destreza manual necessária para dissecar o cefalograma do abdômen durante a montagem da lâmina. Para garantir o sucesso da dissecção, use pinças de ponta fina ou sondas de dissecção para separar o exe entre o táx cefálico e o primeiro segmento abdominal. Conforme demonstrado, divida o táx cefálico ao longo da sutura esal.

Em seguida, abra o táx cefálico de modo que as bordas da sutura fiquem em lados opostos e oriente-o de forma que o lado ventral fique espaçado. Posicione o lado dorsal do abdômen para cima e coloque-o imediatamente abaixo do sepha thax. Em seguida, segurando uma lamínula em um ângulo com uma polegada tocando o slide lentamente, abaixe e solte a tampa para reduzir a formação de bolhas de ar.

Finalmente, pressione levemente a lamínula para achatar a amostra e use um microscópio composto para determinar o gênero da amostra montada em lâmina Nestes gráficos, são mostradas curvas de acumulação taxonômica para amostras de pupila ex coletadas de 16 lagos urbanos em Minnesota para determinar o número de espécies em geral dentro de cada lago. Cada linha de dados representa um dos lagos, e cada ponto de dados representa uma amostra mensal coletada de abril a outubro de 2005, demonstrando que a aquisição de quatro amostras por lago recuperou a maior parte da comunidade de Quíron e detectou quaisquer variações sazonais importantes dentro dos lagos. Estudos de monitoramento de longo prazo de quírons podem ser usados para avaliar as mudanças climáticas em lagos em Minnesota, pois as mudanças nas variáveis ambientais, como profundidade do lago e concentração de fósforo, podem afetar as espécies cumulativas detectadas em um gradiente de químicas do lago.

De fato, como este gráfico ilustra, o número cumulativo de espécies encontradas aumenta à medida que aumenta a proporção entre a concentração média de fósforo e a profundidade média. A etapa mais crítica para a coleta bem-sucedida de exsudato pupilar é localizar áreas de alto acúmulo de exsudato dentro da área de estudo. Ao iniciar as amostras no laboratório, é importante escanear o conteúdo da placa de Petri lentamente, pois algumas amostras podem ser levemente pigmentadas e aderir ao tamanho da placa.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como coletar e processar amostras ex de pupila flutuante de superfície para projetos destinados a monitorar e avaliar a qualidade da água.