Name: Protocolo para aguda e crônica de ensaios toxicológicos do turquesa Killifish Nothobranchius furzeri (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-24T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Aprenda ensaios toxicológicos agudos e crônicos com Nothobranchius furzeri para ecotoxicologia. Este método avalia mortalidade, crescimento e fecundidade em peixes de ciclo rápido, permitindo estudos multigeracionais eficientes sobre impactos ambientais.

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Estamos gratos ao grupo esfera do UAntwerpen e o departamento de proteção de cultivos da UGT para análise de amostras de água. Suporte durante esse projeto foi fornecido pelo centro de excelência ' Eco e dinâmica sócio-evolutiva (PF/10/007) do fundo de investigação KU Leuven. AFG (11Q0516N) e ESJT (FWO-SB151323) foram financiados como doutorado e TP (12F0716N) como companheiro de pós-doutorado pela FWO Flandres (Fonds Wetenschappelijk Onderzoek).

Todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo Comitê de ética da Kortenberg.
1. incubação e manutenção geral de furzeri s.
<ol><li>Preparar peixe médio (pH 7), a uma temperatura de 14 ° C e adicionar água purificada do tipo II, com adicionado sais padronizadas, com uma condutividade de 600 µS/cm (24 ° C).</li>
	<li>Selecione a linha de laboratório GRZ (Gona-Rhe-Zhou) que foram armazenados sob condições padronizadas13ovos. Selecione os ovos na fase DIII (ou seja, prontos para eclodir), reconhecíveis pela presença de olhos de ouro9 e suavemente transferi-los com um macio par de pinças para um tanque de 2L de plástico (não mais do que aproximadamente 30 ovos por tanque). Nota: Para ter um número suficiente de organismos teste saudável, chocar ovos duas vezes tantas como o número de larvas de peixes necessários.</li>
	<li>Adicionar 1 cm do meio de peixe a 12 ° C e deixe a temperatura da água gradualmente convergem para a temperatura ambiente (24 ° C)9. Peixe eclodirão dentro as primeiras 12 horas.</li>
	<li>Após 24h, alimentar os filhotes uma dose concentrada de recém nascidos Artemianauplii (para mais detalhes sobre a frequência e a quantidade de comida, consulte protocolo de criação de Polačik et al . 20169) e aumentar a profundidade de água de 5 cm por adicionando o meio do peixe.</li>
	<li>Após 36 h, alimentar os filhotes mais uma dose concentrada de recém nascidos de náuplios de Artemia e adicionar meio peixe para aumentar a profundidade de água de 10 cm.</li>
	<li>Incubar os recipientes de peixes sob condições de temperatura constante (por exemplo, em uma incubadora, a sala de clima ou o banho de água aquecida) sob um 14 h:10 h regime de luz: escuro.</li>
	<li>Antes do início do experimento, recipientes de peixe complexo (sem peixes) com a exposição composto por preenchê-los com a maior concentração de meio de exposição e deixá-lo durante a noite a fim de limitar a transferência de substâncias tóxicas para o recipiente no real experimento.</li>
	<li>48 h após a eclosão, selecione larvas flutuantes saudáveis para começar o experimento exposição. Descartar a chamada barriga-controles deslizantes que não foram capazes de encher a sua bexiga natatória e, consequentemente, ter uma flutuabilidade prejudicada (continuamente afundar até o fundo).</li>
</ol>2. a curto prazo protocolo de exposição
Nota: Pesquisadores devem apontar para pelo menos 20 repetições (20 peixes em frascos separados) por tratamento. Além de um tratamento completo controle, um controle solvente deve ser incluído se a solução estoque do composto é preparada usando um solvente. O controle do solvente deve conter a quantidade de solvente, igualando a concentração de solvente na maior concentração de exposição.
<ol><li>Prepare os recipientes experimentais (frascos de vidro de 0,5 L) rotulá-los e preenchê-los com o meio de exposição adequado (diferentes concentrações tóxicas). Adicione o composto para obter a concentração correta.</li>
	<li>Transferi as larvas (para pós-incubação 48 h) individualmente para os recipientes (1 peixe por contêiner para monitorização individual). Nota: Peixes são expostos individualmente para minimizar potenciais efeitos de confundimento de interação social como a competição por comida e agressão. No entanto, peixes podem interagir visualmente de acordo com padrões éticos para o uso de animais de laboratório.</li>
	<li>Acompanhar esta exposição aguda para uma duração de até 2 semanas. Durante esse tempo, alimentar os peixes ad libitum com náuplios de Artemia , duas vezes por dia, 7 dias por semana.</li>
	<li>Atualize o meio todos os dias para manter a qualidade da água e para minimizar os efeitos potenciais de degradação de compostos. Monitorar as variáveis chave de água (níveis de oxigênio dissolvido devem exceder 80%, condutividade deve variar entre 600 e 700 µS/cm, pH entre 7,8 e 8,2 dureza (como CaCO3) entre 350 e 450 mg/L, que se encontra dentro do intervalo de condições ideais de criação para furzeri s. 9). Colher amostras de água antes e depois de atualizar o meio para determinar as concentrações de compostos reais.</li>
	<li>Pontos de extremidade<ol>
<li>Verifique o peixe para a mortalidade, stress (por exemplo, o comportamento aberrante: nadar de cabeça para baixo) ou doença diariamente (manhã, tarde). Consulte a publicação de Shedd et al (1999) 12 para obter detalhes sobre a observação da mortalidade, stress ou doença.</li>
		<li>Calcular LC50 valores baseados na mortalidade usando curvas dose-resposta (Ritz e Streibig, 2005) em pontos de tempo diferentes. Use a função de drm no pacote RDC em v3.2.3 R (R desenvolvimento Core Team, 2016) ou abordagens estatísticas semelhantes.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. protocolo de exposição crônica
Nota: Visam um mínimo de 25 peixes/condição no início do experimento, para minimizar as chances de uma sexo-relação enviesada e para acomodar a mortalidade de fundo potencial devido a causas naturais (i. e. mortalidade relacionada à idade).
<ol><li>Incubação (ver seção 1)</li>
	<li>Fase I (2 dias pós-incubação-16 dias pós-incubação)<ol>
<li>Seguir o protocolo, conforme descrito no ponto 2.1-2.4</li>
		<li>Como durante a segunda fase do experimento, o Médio irá degradar ao longo da semana (nenhum refresco, veja abaixo). Armazene a quantidade necessária de média para uma semana em grandes recipientes inertes para permitir semelhante degradação do composto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fase II (16 dias pós-incubação-final)<ol>
<li>Preparar 2L experimental frascos de vidro por complexantes-los com o composto. Encha os frascos com o meio de exposição correta e adicionar um tubo de ar para ventilar o frasco. Casa peixe individualmente esses vidrinhos para o restante do experimento. Permita a interação visual acomodar padrões éticos.</li>
		<li>Atualize o meio uma vez por semana. Transfira o peixe com uma rede para um novo frasco contendo o mesmo meio de exposição. Colher amostras de água todos os dias durante uma semana para monitorar a degradação do composto em cada tratamento de concentração. Calcule uma curva de degradação para cada tratamento se múltiplos estressores são testados (por exemplo, toxicidade de um composto em regimes de temperatura diferente). Medir parâmetros abióticos (pH, temperatura, oxigênio % dissolvido, condutividade) três vezes por semana.</li>
		<li>Desde 2 dias pós-incubação (dph) até 23 dph, alimente os peixes duas vezes por dia, 7 dias por náuplios de Artemia ad libitum semana. De 24 dph - 37 dph, complemente a dieta de anúncio libitumArtemia com larvas de Chironomus picadas. De 38 dph em, alimente os peixes duas vezes por dia, 7 dias por semana ad libitum congelado Chironomus larvas.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pontos de extremidade<ol>
<li>Diariamente Verifique o peixe para mortalidade, stress ou doença12.</li>
		<li>Para determinar o crescimento, medir o tamanho do corpo em uma base semanal (9 dph - 16 dph - 21 dph -...) através da transferência de peixe para um prato de petri preenchido com média de seu reservatório. Tirar fotos de tamanho calibrado de 4-5 do peixe de cima (em uma altura fixa) e analisá-los digitalmente usando um programa de medição espacial (por exemplo, ImageJ). Nota: Para os peixes adultos, use um prato de petri maior para minimizar o estresse da manipulação, mantendo todos os peixes submergidos durante todo o processo de medição.</li>
		<li>Para maturação masculina, inspecione visualmente o peixe diariamente para a coloração de dph 15 em diante. Verifique se as aletas para os primeiros sinais de coloração nupcial (característica sexual secundária). Usar o primeiro dia em que é visível como um proxy para o tempo de maturação masculino.</li>
		<li>Um par de peixe não-sexados com machos do grupo de tratamento mesmo ou machos não-experimentais, três vezes por semana de 30 dph em diante a fim de determinar o tempo de maturação de fêmeas (o dia que o primeiro ovo é depositado). Para tal, utilize o desova protocolo descrito no 3.4.5.</li>
		<li>Para a fecundidade, casal maduro fêmeas com machos maduros 3 vezes / semana de dph 30 em diante, dentro de seus tratamentos utilizando um esquema de cruzamento.<ol>
<li>Preparar um tanque de desova (1 L) para cada par, usando o meio de exposição do aquário masculino suplementado com substrato de desova (areia fina < 500 µm).</li>
			<li>Transferir o macho e a fêmea para o tanque de desova e permitir que eles desovam durante duas horas. Minimize a actividade humana ou perturbação ao redor dos recipientes desova durante este processo.</li>
			<li>Depois, gentilmente transferi peixes volta para seus recipientes originais de habitação, sem mistura desnecessária de água, que seria giro os ovos no substrato desova.</li>
			<li>Filtre os ovos por derramando o substrato de desova sobre uma 500 µm malha. Conte com o ovo e transferi-los (usando uma pinça macia) de musgo de turfa úmido em placas de Petri9,14.</li>
			<li>Remova ovos mortos diariamente. Depois de uma semana, o selo o Petri prato com filme de selagem e armazená-lo em uma temperatura controlada incubadora a 28 ° C e um 14:10 h luz: escuro ciclo de desenvolvimento imediato à fase DIII (ou seja, prontos para eclodir após cerca de três semanas). Para armazenamento a longo prazo, armazene os ovos a 17 ° C na escuridão constante, sobre os quais ovos entram a fase dormente e permanecem viáveis por vários anos. Quando peixes provenientes desses ovos dormentes para experimentos de recrutamento, transferi os ovos dormentes para condições de 28 ° C com 14:10 h luz: escuro ciclo por aproximadamente três semanas permitir o desenvolvimento da fase de DIII.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Medir o máximo térmico crítico (CTmax) (uma medida de desempenho15) de peixes adultos.<ol>
<li>Usar um banho de água aquecida a uma taxa constante de 0,33 ° C/min e em que a água é circulada continuamente. Adicione vários aquários de 1 L para cada peixe individual. Nota: Dadas as restrições de espaço no banho de água, é necessário trabalhar em várias séries. Diferenças de potencial em condições entre séries devem ter em conta quando a realização de análises estatísticas, incluindo a 'série', como um fator aleatório.</li>
			<li>Inicie o julgamento, adicionando os peixes no aquário quando a água do aquário tiver atingido a temperatura de criação experimental do peixe (geralmente de 28 ° C). Monitore a temperatura nas aquários de 1L do banho CTmax cada 5min com um termómetro digital (escala de 0.1 ° C).</li>
			<li>Termine o julgamento, quando o peixe não consegue manter uma posição dorso-ventralmente vertical ou começa a contorcer-se fortemente16,17. Medir a temperatura do aquário de 1 L, que é a temperatura crítica máxima. O peixe de volta para seu alojamento experimental para recuperação de transferência.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Medir o peso (precisão de 0,1 mg) do peixe no último dia do experimento acariciando-seco e transferindo-o em um barco de pesagem. Nota: Todos os peixes devem ser mensurados a quatro horas após a última alimentação para padronizar o peso do alimento no trato intestinal.</li>
		<li>Eutanásia o peixe usando 0.1% tricaina.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. protocolo de exposição transgeracional
Nota: Para medir transgeracional efeitos dos poluentes sobre s. furzeri, segui o protocolo de exposição crônica descrito acima para a primeira geração.
<ol><li>Duas vezes por semana, verificar o desenvolvimento dos ovos produzidos (ou seja, a segunda geração) armazenado a 28 ° C 14:10 condições de ciclo de luz: escuro h inspecionando os pratos de petri para embriões na fase de DIII (ver Polačik et al 2016.9). Quando mais de 50 repetições de cada tratamento parental estão totalmente desenvolvidas, chocar seguindo o protocolo em 1.1.</li>
	<li>Expor um peixe saudável, flutuante para exatamente a mesma configuração e tratamento como o peixe parental.</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada para divulgar.

Este trabalho descreve um bioensaio novo usando Nothobranchius furzeri, um organismo modelo emergente, para estudar o indivíduo e combinados a longo prazo efeitos de substâncias tóxicas e outros estressores. Os protocolos apresentados foram aplicados com êxito para medir a sensibilidade da espécie para uma matriz de substâncias tóxicas (cobre, cádmio, 3,4-dicloroanilina e Clorpirifós). Devido ao seu ciclo de vida rápido, este modelo de vertebrados permite a avaliação da subletais e transgeracional efeitos no pra...

Perfis de sensibilidade de uma matriz de espécies tóxicas para estrategicamente selecionadas foram descritos1 para a legislação europeia chegar (registo, avaliação, autorização e restrição de produtos químicos). Testes de toxicidade aguda ou a curto prazo foram usados principalmente para esta finalidade como eles dão uma indicação rápida de sensibilidade da espécie. No entanto, em seu ambiente natural, os organismos são expostos por períodos muito mais longos e ciclos de vida completo ou até mesmo várias gerações podem ser afetada2. Além disso, organismos em ambientes poluídos normalmente estão expostos a mais de um fator de estresse em um momento, que pode interagir uns com os outros, possivelmente resultando em efeitos sinérgicos3. Portanto, testes de toxicidade concentrações seguro calculado com base na aguda, o único fator de estresse podem subestimar os riscos reais impostos por substâncias tóxicas em ambientes naturais. É, portanto, aconselhável também estudar os efeitos crônicos e várias gerações de concentrações subletais de substâncias tóxicas em um contexto ambientalmente relevante, como defendido pela Comissão Europeia4,5 e da EPA (Unidos Agência de proteção ambiental dos Estados)6,7. Especialmente na investigação de vertebrados, os custos em termos de tempo, dinheiro e mão de obra são elevados ao realizar estudos de exposição crônica e multigeracionais devido a expectativa de vida relativamente longa de vertebrados em comparação com organismos invertebrados modelo. Portanto, é aconselhável escolher o mais apropriado organismo modelo de peixe, dependendo a pergunta de pesquisa. Além disso, uma grande variedade de espécies de vertebrados deve estar disponível para testar a generalidade das respostas em toda espécie de ser capaz de se adaptar a regulamentação baseada nas espécies mais sensíveis. Por enquanto, há uma necessidade de desenvolver novos protocolos eficientes com espécies de vertebrados modelo caracterizados por ciclos de vida curtos para diminuir os custos da realização de exposições crônicas e várias gerações em vertebrados7,8.
O turquesa killies Nothobranchius furzeri é um modelo interessante de peixe para uso em tais experimentos de exposição a longo prazo por causa de seu tempo de maturação curto e o ciclo de vida (tempo de geração de menos de 4 semanas9). Isto significa que os pontos de extremidade ecologicamente relevantes como tempo de maturação e de fecundidade podem ser estudados dentro de um curto espaço de tempo em comparação com outros modelos de peixe7. Além disso, estes peixes produzem ovos resistentes à seca, dormentes que permanecem viáveis por vários anos, quando armazenada em condições normais, eliminando assim a necessidade de uma cultura contínua9. Em estudos ecotoxicológicos, isto também implica que replicar peixe pode tudo ser incubado no mesmo momento, resultando em sincronia de tempo para todos os animais, mesmo entre lotes de ovos produzidos em momentos diferentes. Recomendamos utilizar o laboratório cepa GRZ para realizar experimentos de exposição. Esta cepa executa bem em condições de laboratório, é homozigota (exceto cromossomos sexuais) e o genoma é bem caracterizada10,11.
Em estudos ecotoxicológicos, é importante selecionar o apropriado intervalo de concentrações. Vários métodos complementares podem ser usados para este fim. O intervalo de concentração nominal pode basear-se a sensibilidade de uma espécies relacionadas, tais como Nothobranchius guentheri12. Alternativamente, a escala pode basear a sensibilidade de modelos padrão de peixes, como o peixe-zebra (Danio rerio)2 , que têm uma sensibilidade comparável à maioria das substâncias tóxicas (Philippe et al (em revisão)). Em combinação, com essas duas opções, uma gama de encontrar o experimento deve ser conduzida para selecionar o intervalo de concentração nominal. Para o teste agudo, pesquisadores devem procurar para tratamentos de concentração com 100% de mortalidade, mortalidade intermediária e 0% de mortalidade após 24 h de exposição para a toxicidade. Para o teste crônica, é aconselhável executar a gama de encontrar o experimento por duas semanas para verificar se a mortalidade larval na condição com as maiores concentrações de teste não exceda 10% durante este período de referência.
O protocolo pode servir como uma base para realizar a exposição aguda e crônica aos poluentes de origem hídrica em s. furzeri, examinando os efeitos potenciais de estressores tanto a nível individual e celular. Também pode ser usada para executar a pesquisa multi estressor para acomodar uma maior relevância ecológica, mistura de diferentes compostos tóxicos ou estudar efeitos interativos entre poluição e outros factores de stress naturais (por exemplo, predação) ou antropogênicas estressores (por exemplo, o aquecimento devido às alterações climáticas).

<table><tbody><tr><td>água purificada Tipo 1 (mili Q)</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sea Salt</td><td>Instant Ocean</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2L tanque de plástico</td><td>SAVIC</td><td></td><td>Sempre separe o material para controle e tratamentos de toxicidade</td></tr><tr><td>Tanque de plástico 1L (desova)</td><td>Avamoplast</td><td></td><td>Sempre separe o material para redes de controle e tratamentos</td></tr><tr><td>de</td> toxicidade <td>Aqua bilzen</td><td></td><td>Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade</td></tr><tr><td>Frascos de vidro de 2L</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade</td></tr><tr><td>Frascos de vidro de 0,5L</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Sempre separe o material para tratamentos de controle e toxicidade</td></tr><tr><td>Ovos de Artemia</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td></td></tr><tr><td>chironomus</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td>congelado</td></tr><tr><td>placas de tricaine</td><td>Sigma aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>petri</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pinças</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FST</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>500 &micro; peneira de malha m</td> <td>/</td><td></td> tubo de <td></td></tr><tr><td>microcentrífuga de fabricação própria (2ml)</td> <td>MARCA</td><td></td><td>Para armazenar peixes em</td></tr><tr><td>frascos de vidro</td> para freezer <td>Sigma aldrich</td><td></td><td>Para análise de água</td></tr><tr><td>barco de pesagem</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jiffy 7c pellets</td><td>Jiffy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>banho-maria</td><td>Gilac</td><td></td><td>para nitrogênio líquido Ctmax</td></tr><tr><td></td><td>Termômetro digital Air liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Testo AG</td><td>testo 926</td><td></td></tr><tr><td>HETO aquecedor térmico</td><td>Anker Schmitt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>balança calibrada</td><td>Mettler-Toledo AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>câmera</td><td>/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>plataforma para câmera</td><td>/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>kit multiparâmetro</td> de fabricação própria <td>HACH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Congelador (-80&deg; C)</td> Freezer <td></td><td></td><td>de temperatura ultrabaixa Panasonic</td></tr><tr><td>Nome</td><td>Empresa</td><td>Número de catálogo</td><td>Comentários</td></tr><tr><td>Fysio</td>homogeneização buffer VWR <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>0.1&nbsp; M TRIS&ndash; HCl, pH 8,5, 15% polivinilpirrolidona, 153% &micro; M MgSO4&nbsp; e 0,2% Triton X-100</td></tr><tr><td>clorofórmio: metanol</td><td>Sigma Aldrich</td> tripalmitato de glicerila Sigma Aldrich <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>amiloglucosidase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7420</td><td></td></tr><tr><td>reagente de ensaio de glicose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G3293</td><td></td></tr><tr><td>Biorad corante proteico</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>placa de microtitulação de 96 poços</td>Placas de microtitulação <td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>384</td> Tubos de vidro <td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>de 2 ml</td><td>Fiers</td><td></td><td>Para análise de gordura</td></tr><tr><td>Tubos eppendorf de 2,5 ml Homogeneizador</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td> Fotoespectrómetro <td>Ultra-turrax TP 18/10</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Aquecedor TECAN</td><td></td><td></td>Infinite M200 para</tr><tr><td>tubos de vidro</td><td>Centrífuga Hach COD REACTOR</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Eppendorf Centrifuge 5415 R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Bumako</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo para aguda e crônica de ensaios toxicológicos do turquesa killifish nothobranchius furzeri

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

O Nothobranchius furzeri killies é um organismo modelo emergente no campo da ecotoxicologia e demonstrou-se sua aplicabilidade em ensaios de ecotoxicidade aguda e crônica. Em geral, a sensibilidade da espécie de compostos tóxicos está no intervalo com, ou superior, de outras espécies de modelo.
Este trabalho descreve os protocolos para os bioensaios agudos, crônicos e várias gerações dos efeitos combinados e único estressor na furzeri s.. Devido ao seu tempo de maturação curto e o ciclo de vida, este modelo de vertebrados permite o estudo de pontos de extremidade como tempo de maturação e fecundidade no prazo de quatro meses. Ensaios de exposição de ciclo de vida completo transgeracional podem ser executados em menos de 8 meses. Desde que esta espécie produz ovos que são resistentes à seca e permanecem viável durante anos, a cultura no local das espécies não é necessária, mas os indivíduos podem ser recrutados quando necessário. Os protocolos destinam-se a medida traços de história de vida (mortalidade, crescimento, fecundidade, peso) e crítico máximo térmico.

Os resultados da exposição aguda do furzeri s. para diferentes concentrações de cobre, calculado como em 2.5.2, mostrar relações cleardose-resposta (Figura 1). Há um aumento da mortalidade, com o aumento da concentração tóxica. Valores de LC50 diminuem ao longo do tempo, significando que, com a diminuição de concentrações, mais o tempo passa antes 50% do Replica morrer. Para resultados detalhados sobre a exposição aguda e crônica dos s...

Neste trabalho, descrevemos um bioensaio agudo, crônico e várias gerações para estudar os efeitos dos estressores único e combinadas sobre o turquesa killies Nothobranchius furzeri. Este protocolo é projetado para estudar traços de história de vida (mortalidade, crescimento, fecundidade, peso) e crítico máximo térmico.

Protocolo para aguda e crônica de ensaios toxicológicos do turquesa Killifish Nothobranchius furzeri

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity ...

O objetivo geral deste experimento é estudar os efeitos de tóxicos no killifish turquesa Nothobranchius furzeri. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da ecotoxicologia, como os efeitos a longo prazo dos estressores em características importantes da história de vida, sendo o tempo de maturação, o crescimento ou a fecundidade. A principal vantagem deste experimento é que usamos um vertebrado com um ciclo de vida muito rápido, resultando em experimentos eficientes em termos de tempo e custo.Esses killifish são modelos ideais para estudar o impacto dos efeitos de longo prazo e multigeracionais dos estressores. Em última análise, contribuirão para uma melhor compreensão do impacto ambiental dos tóxicos. Embora esse método possa fornecer novos insights sobre os efeitos combinados de tóxicos e temperatura, ele também pode ser aplicado a outros estressores, como radiação UV, privação de alimentos e alterações de pH.É difícil trabalhar com Killifish, porque eles são um novo sistema modelo em ecotoxicologia e porque sua sensibilidade a muitos poluentes ainda é desconhecida. Desenvolvemos a ideia para este método experimental quando aprendemos pela primeira vez sobre

protocol-for-acute-chronic-ecotoxicity-testing-turquoise-killifish

Research

JoVE Journal

Environment

Ambiente

Este estudo diz respeito ao desenvolvimento e padronização de um protocolo metodológico valioso para determinar toxicidade a longo prazo (14 dias) letal exercida por substâncias químicas, efluentes industriais ou esgotos e líquidos amostras ambientais sobre o crustáceo de água...

A longo prazo de Teste de toxicidade letal com o crustáceo Artemia franciscana</em

Medindo os impactos de contaminantes ambientais sobre o comportamento dos peixes é muitas vezes subjetiva e desafiando particularmente quando se trata de endpoints subletais. Descrevemos métodos, incluindo a tecnologia de vídeo para quantificar o comportamento de natação do início da vida estágio esturjão branco (Acipenser transmontanus) durante e após 96 horas exposições agudas a várias concentrações de cobre.

Quantificar Peixe Natação comportamento em resposta à exposição aguda de Aqueous Copper Usando Computer Assisted Vídeo e Análise de Imagem Digital

Desreguladores endócrinos (EDC) representam um risco significativo para o ambiente aquático. plantas municipais de tratamento de esgoto são grandes contribuintes para a potência estrogênica das águas superficiais. A metodologia prevista neste artigo permite uma avaliação da eficácia e adequação dos processos de tratamento de águas residuais em relação à remoção de EDC.

O uso de uma bateria de métodos químicos e ecotoxicológicos para a avaliação da eficácia dos Processos de Tratamento de Águas Residuais remover estrogénica Potência

Este estudo envolve métodos para revelar efeitos sobre um modelo hospedeiro peixe seguintes alterações da pele e do intestino composição comunidades microbioma por um antibiótico.

Exame de fenótipos de acolhimento em<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Após o tratamento antibiótico

Este trabalho descreve um novo protocolo para avaliar a ecotoxicidade de poluentes, incluindo contaminantes emergentes como nanomateriais, utilizando a bactéria marinha Vibrio anguillarum . Este método permite a determinação da CL 50 , ou mortalidade, da concentração que provoca uma diminuição de 50% na cultura das bactérias, após uma exposição de 6 horas.

Método Ecotoxicológico com Bactérias Marinhas<em&gt; Vibrio anguillarum</em&gt; Avaliar a Toxicidade Aguda dos Contaminantes Ambientais

Habitação de laboratório de turquesa killies podem ser escalados para casa e eficientemente criar milhares de peixes individuais em um sistema de filtragem de água centralizado, empregando a mesma infraestrutura utilizada para instalações padrão do zebrafish. Aqui detalhamos uma lista de procedimentos padronizados que permitem a manutenção eficiente killies.

Um protocolo para laboratório habitação de turquesa Killifish (Nothobranchius furzeri)

Neste trabalho, são apresentados métodos ecotoxicológicos padronizados para a avaliação de biomarcadores em espécies de anuros neotropicais. Especificamente, este artigo detalha várias metodologias em diferentes escalas de avaliação ecotoxicológica, como os níveis genético, celular-histológico, bioquímico, morfológico e individual.

Metodologias ecotoxicológicas para avaliação de biomarcadores em diferentes escalas em anuros neotropicais

Este protocolo apresenta ensaios de citotoxicidade comumente utilizados (ensaios de Alamar Blue [AB], CFDA-AM, Neutral Red e MTT) adaptados para a avaliação da citotoxicidade em linhagens celulares de embrião de peixe-zebra (ZEM2S) e fígado (ZFL) em placas de 96 poços.

Ensaios de citotoxicidade com linhagens celulares de peixe-zebra

Aqui, apresentamos uma bateria de teste comportamental abrangente, incluindo o novo tanque, Shoaling e testes de preferência social, para determinar efetivamente os potenciais efeitos neurotóxicos de produtos químicos (por exemplo, metanfetamina e glifosato) em peixes-zebra adultos usando um único tanque. Este método é relevante para neurotoxicidade e pesquisa ambiental.

Avaliação da Neurotoxicidade em Danio rerio Adulto utilizando uma Bateria de Testes Comportamentais em um Único Tanque

Este protocolo descreve um procedimento de triagem de drogas em larvas de peixe-zebra 3-7 dias após a fertilização, seguido de avaliação morfológica.

Triagem de pequenas moléculas e testes de toxicidade em larvas de peixe-zebra em estágio inicial

Aprenda ensaios toxicológicos agudos e crônicos com Nothobranchius furzeri para ecotoxicologia. Este método avalia mortalidade, crescimento e fecundidade em peixes de ciclo rápido, permitindo estudos multigeracionais eficientes sobre impactos ambientais.

Protocolo para aguda e crônica de ensaios toxicológicos do turquesa Killifish Nothobranchius furzeri

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