Name: Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Aprenda a aplicar DCE-MRI em xenotransplantes ortotópicos de tumor pancreático em camundongos. Esta técnica não invasiva permite visualizar a microvasculatura tumoral e avaliar respostas vasculares a novas terapias oncológicas.

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Os autores agradecem a Jeffrey Sellers por ajudar na modelagem ortotópica de camundongos com câncer de pâncreas. Este trabalho foi apoiado por Research Initiative Pilot Awards do Departamento de Radiologia da UAB e NIH concede 2P30CA013148 e P50CA101955.

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado Animal Institucional da Universidade do Alabama, em Birmingham. 1. Orthotopic pâncreas Tumor Rato Modeling <ol><li> Linhas de padrão de cultura de células humanas do pâncreas-cancro em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fetal bovino. Mantenha todas as culturas a 37 ° C em atmosfera humidificada com 5% de CO 2. </li><li> Use 8-10 semanas de idade, do sexo feminino graves ratos imunodeficientes combinados. Coloque as gaiolas dos animais em 12 horas de luz e escuridão ciclo de 12 horas à temperatura ambiente (21 ± 2 ° C) e 60% de humidade. </li><li> Anestesiar todos os animais utilizando ventilação com 2% de isoflurano misturado com oxigénio (2 L / min) durante toda a cirurgia. Confirme a profundidade da anestesia por toe pitada reflexo. Colocar os animais de uma almofada de aquecimento (37 ° C) para manter a temperatura corporal. Aplicar pomada oftálmica veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia. &amp;# 160; </li><li> Remover o cabelo no quadrante superior esquerdo do abdómen de cada rato, e dar um medicamento analgésico (carpofen, 5 mg / kg de peso corporal por via subcutânea) na área. Aplique uma solução de betadine para a pele exposta. Prepare instrumentos cirúrgicos autoclavada. </li><li> Faça uma incisão de 1 cm na pele e peritônio usando iris tesoura reta. Remova cuidadosamente o pâncreas do abdome utilizando pinças cirúrgicas. </li><li> Insira 28 L agulha de uma seringa de 0,5 mL de insulina na cauda do pâncreas e, em seguida, lentamente, uma solução de infusão de 2,5 milhões de células de cancro pancreático humano em 30 ul de DMEM. Confirme se uma pequena bolha é criado na cabeça do pâncreas pela solução. </li><li> Delicadamente, coloque o pâncreas volta para o abdômen utilizando pinças cirúrgicas. Feche o peritônio e da pele em uma camada com 2 interrompido 5-0 Prolene, e, em seguida, terminar a anestesia. Não devolva um animal que passou por uma cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado.60; Remover suturas em 7 ~ 10 dias após a cirurgia. </li><li> Dê outra dose do medicamento analgésico (carpofen, 5 mg / kg de peso corporal por via subcutânea) a 24 h após a cirurgia. </li><li> Verifique o tamanho do tumor através da palpação da área de cirurgia usando dois dedos. Os tumores normalmente se sentir mais denso e mais instável do que os tecidos e órgãos adjacentes. Normalmente demora ~ 1-2 semanas para começar a sentir um tumor. </li><li> Monitorar os animais diariamente para sinais de doença. Quando os animais aparecem doentes (comportamentos de higiene e de prevenção de falta normais), encerramos-los usando deslocamento cervical sob anestesia. </li></ol> 2. Imagem por Ressonância Magnética <ol><li> Aplicar ressonância magnética quando o tamanho do tumor é de cerca de 5-7 mm de diâmetro a normalmente 2 a 4 semanas após a implantação da célula. Use um scanner de ressonância magnética dedicada a pequena imagem de animal ou um scanner MR clínica equipado com uma bobina especializado para pequena imagem animal. NOTA: Foi utilizado um animal pequeno scanner de ressonância magnética 9.4T com uma combinação de um volume de ressonância 1 H/ Transmissor e um receptor de superfície da bobina (30 mm de diâmetro) (Bruker BioSpin Corporation, Billerica, MA). A bobina de superfície proporciona melhor relação sinal-ruído (SNR) 14. </li><li> Prepara-se uma agente de contraste à base de gadolínio para MRI injectar ~ 0,1-0,2 mmol / kg a cada animal em ~ 0,1-0,2 ml de PBS (tampão fosfato salino). NOTA: Foi utilizado gadoteridol, e injectado 0,2 mmol / kg em 0,15 ml de PBS durante um período de 15 segundos (0,1 ml / seg). </li><li> Prepara-se uma micro-tubo de polietileno (comprimento: 7,62 milímetros, o diâmetro interno forma: 0,28 mm, diâmetro externo = 0,64 mm). Inserir uma agulha G 30 (comprimento de 12,7 mm) em uma das extremidades do tubo, e uma agulha 30 G romba ponta (9,5 mm de comprimento) na outra extremidade. Conectar uma seringa de 1 ml, contendo agente de contraste MR à agulha de ponta romba, e empurrar lentamente a seringa para encher todo o tubo com o agente de contraste de MR. </li><li> Anestesiar os animais utilizando ventilação com ~ 1 - 2% de isoflurano misturado com oxigénio (2 L / min) durante toda a preparação e imagiologia. Confirme a profundidade de Anesthesia por toe pitada reflexo. Aplicar pomada oftálmica veterinária nos olhos para evitar a secura e sob anestesia. Dilatar a veia da cauda usando uma lâmpada de calor antes da inserção da agulha. Pegue o meio da agulha de 30 G com a pinça Kelly, e inseri-lo na veia da cauda. Fita ambos a cauda e o tubo sobre uma folha de plástico ou de papel de cartão (10 mm de largura x 100 mm de comprimento) para manter a linha reta cauda. </li><li> Colocar o animal em decúbito dorsal em uma cama de animais equipado com circulação de água quente (ou ar quente) para regular a temperatura corporal durante o exame. Ajuste da temperatura no leito de 37 ° C. Insira uma sonda de temperatura rectal para monitorizar a temperatura do corpo durante o exame. </li><li> Aplicar uma placa de plástico orthogonally dobrada na área abdominal. Verifique se o tumor está localizado atrás da extremidade superior do tabuleiro, e, em seguida, puxe para baixo a placa ligeiramente (~ 2 mm) para garantir o tumor é capturado pela diretoria. Tape o tabuleiro para a cama dos animais com firmeza. </li><li> Tape um transduce pad respiraçãor (SA Instrument, Inc., Stony Brook, NY) na região do peito para monitorar a respiração animal durante o exame. Inserir uma bobina de superfície no topo da região do tumor, e fita-lo para a cama de animais com firmeza. Empurrar a cama dos animais no scanner MR para colocar a região do tumor no centro da bobina de volume (diâmetro interno: 72 milímetros). </li><li> Executar a correspondência e afinação tanto para o receptor e transmissor, seguido por calços. </li><li> Comece com uma sequência MR anatômica para localizar o tumor. Use uma sequência spin-echo (T2W) turbo T2 para obter imagens axiais com os seguintes parâmetros de aquisição. Tempo de repetição (TR) / tempo de eco (TE) = 3.000 / 34 ms, 128 x matriz de 128, 30 x 30 mm campo de visão, número de médias = 1, comprimento do comboio echo = 4 e 20 contíguas de 1 mm de espessura em um modo entrelaçado para cobrir toda a região do tumor (tempo total de digitalização: 1,6 min). Observação: Uma vez que os tumores pancreáticos ortotópicos são mais difíceis de ser localizado do que as subcutâneas, locali convencionalzer imagens com resolução mais baixa pode não ser útil. </li><li> Adquirir imagens ponderadas em T1 (T1W) com vários ângulos de aleta para recuperar T1 mapa. Para esta finalidade, utilizar um gradiente de eco abordagem ângulo multiflip com os seguintes parâmetros: tempo de repetição (TR) / tempo de eco (TE) = 115/3 mseg, de 128 x 128 de matriz, um campo de 30 x 30 mm de vista, o número de médias = 4, ~ 5-7 contíguas de 1 mm de espessura em um modo entrelaçado para cobrir a região do tumor, e sete ângulos de aleta de 10, 20, 30, 40, 50, 60 e 70 (tempo total de digitalização por flip angle: 1 min). NOTA: No entanto, a abordagem ângulo multiflip é eficiente somente quando o campo B1 homogeneidade é alta. Se não, mapas T1 pode ser obtido com a abordagem TR múltipla, em vez de 15. </li><li> Adquira imagens T1W antes e após a injeção de contraste gadolínio baseado MR. Use os mesmos parâmetros de aquisição e da geometria para o mapeamento T1 mas com o ângulo da aleta fixa de 30. Use codificação linear para garantir estado estacionário quando o centro de k-espaço é obtido, especially quando um curto TR e um ângulo de baixo grau de aleta são usados. Adquirir 5 imagens de base antes de injeção de contraste. Em seguida, adquirir 40 imagens após a injeção de contraste (tempo total de digitalização: 45 min). Usar uma bomba de seringa para injectar agente de contraste a uma taxa constante (0,01 ml / seg). </li><li> Controlar a respiração dos animais de forma contínua, e ajustar concentração de isoflurano para manter a freqüência respiratória para 50 - 100 respirações por minuto. Monitore a temperatura do corpo do animal durante exames de imagem. </li><li> Depois de completar DCE-MRI, retirar a agulha e outras sondas, e colocar o animal em uma gaiola vazia camas com toalhas de papel. Massageie suavemente a área abdominal inferior. A gaiola deve ser colocado metade sob uma lâmpada de calor para que os animais possam entrar e sair do gradiente de calor como ele se recupera. Não deixe um animal sem supervisão até que ele recuperou a consciência suficiente para manter decúbito esternal. </li></ol> 3. Processamento de Imagem e Análise <ol><li> Regi tumorais Segmento<html> em em imagens em T2. Em imagens em T2, a intensidade do sinal na região do tumor é mais brilhante do que a dos tecidos circundantes, de modo que o limite do tumor pode ser delineada manualmente. NOTA: técnicas semi-automáticas de segmentação, como limiar global ou contorno ativo pode ser usado 16,17, mas a intensidade de fundo irregular deve ser corrigido especialmente quando uma bobina de superfície é usado. </li><li> Criar mapas T1 e densidade de prótons. Em imagens T1W adquiridos com uma sequcia de eco de gradiente, assumindo que o tempo de eco (TE) é muito menor do que em T2 * valor, o valor de pixel é determinada pela <img alt="Equação 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq1.jpg" /> onde S 0 é a densidade de prótons, T 1 T 1 é tempo de relaxamento constante, TR é tempo de repetição, e θ é um ângulo de flip. A equação (1) pode ser reescrito para 641eq2.jpg &quot;/&gt; quando S (θ) / sinθ é substituído com Y, e S (θ) / tanθ é substituído com X. A equação (2) é uma equação linear, e a sua inclinação e intersecção pode ser utilizado para recuperar e T1 S valores 0, respectivamente. </li><li> Calcule concentração contraste MR em imagens DCE-MR. Quando agente de contraste MR base de gadolínio é injetado, T 1 relaxamento constante de tempo é alterada ao longo do tempo. Então, a equação (1) pode ser reescrito para <img alt="Equação 3" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq3.jpg" /> T 1 (t) está relacionada com a concentração de contraste MR, C (t), como se segue, <img alt="Equação 4" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq4.jpg" /> em que r é 1 a relaxação longitudinal do agente de contraste de MR. Assim, combinando as equações (3) e (4), a concentração de contraste MR é determinada pela <img alt = &quot;Equação 5&quot; fo: content-width = src &quot;3in&quot; = &quot;/ files / ftp_upload / 52641 / 52641eq5.jpg&quot; /&gt; </li><li> Quantificar os parâmetros farmacocinéticos do MR contraste agente. C p (t) apresenta concentração contraste MR no plasma sanguíneo no tempo t após o início da injeção de contraste. C p (t) é chamada função de entrada arterial (AIF). Se FIA ​​está disponível, os parâmetros farmacocinéticos do agente de contraste MR pode ser calculado <img alt="Equação 6" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq6.jpg" /> em que C t (t) é a concentração de contraste na RM de um tecido alvo, p v é o volume do plasma sanguíneo fraccionada, e v é o volume extracelular extravascular fraccionada, e K é uma constante trans transferência de volume. Taxa de fluxo constante, k ep é igual a K trans divididos por v e. Se FIA não está disponível, então o modelo da região de referência pode ser utilizado em vez 18,19. O modelo da região de referência é baseado no modelo de fluxo Kety-20 e limitada usa concentração de contraste em uma região de referência para eliminar a necessidade de AIF como se segue, <img alt="Equação 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq7.jpg" /> em que C t, ROI (t), K trans, ROI, e v e, ROI são concentração contraste, a transferência de volume constante, e volume extracelular extravascular-fraccionada, respectivamente, na região de interesse (ROI), enquanto a C t, RR (t), K trans, RR, e v e, RR são os da região de referência. Músculo paravertebral é frequentemente seleccionada como a região de referência e v e, em pa murino RRravertebral músculo é assumido ser constante a 0,08 21. Usamos o modelo região de referência. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Nós introduzimos os métodos detalhados de modelagem de tumor pancreático orthotopic usando ratos imunodeficientes, DCE-MRI de tumores abdominais em ratos, e quantificação de seus parâmetros cinéticos. Na modelagem de tumor pancreático orthotopic, é preciso ter cuidado ao inserir uma agulha na cauda do pâncreas. Se for bem sucedido, as células serão transferidos para a cabeça do pâncreas criando uma pequena bolha. Ao aplicar-se uma placa de plástico orthogonally dobrado, é fundamental para confirmar que o tumor está loca...

O objetivo geral deste método é a aplicação de contraste dinâmico aprimorado ressonância magnética (DCE-MRI) para ortotópicos xenografts tumor pancreático em camundongos. DCE-MRI é um método não-invasivo de avaliação da microvasculatura num tecido alvo por monitorização da alteração de contraste MR ao longo de um certo período de tempo após a injecção. DCE-MRI tem sido utilizada para diagnóstico de tumores malignos e para avaliar a resposta do tumor a várias terapias 1-4. Quantitative DCE-MRI apresentou alta reprodutibilidade 5. Para quantificar os parâmetros farmacocinéticos de um agente de contraste MR em um tecido alvo, todas as imagens DCE-MR adquiridas em diferentes momentos e mapa T1 obtidos antes da injeção de contraste devem ser georeferenciados 6. No entanto, devido aos movimentos respiratórios e peristálticas na área abdominal, quantitativa DCE-MRI teve aplicação limitada para tumores gastrointestinais. Modelos ortotópicos de tumor pancreático foram utilizados para avaliarresposta de pâncreas-tumor seguinte terapias biológicas e quimioterapias 7,8. Modelos ortotópicos de tumor são considerados superiores aos modelos subcutâneos convencionais, uma vez que o microambiente no local do tumor original é reflectida e, assim, a resposta do tumor à terapia humana podem ser previstos com mais precisão. No entanto, o pâncreas do mouse está localizado no quadrante superior esquerdo do abdome, de modo quantitativo DCE-MRI de ortotópicos xenotransplantes de tumor do pâncreas em ratos não foi prontamente implementadas. Nós estabelecemos um protocolo de DCE-MRI de tumores abdominais em camundongos, fixando os tumores usando uma placa de plástico orthogonally dobrado para evitar a transferência de movimento da região do tórax 9. A pressão aplicada por este fórum foi localizada na área abdominal, e não resultou em dificuldade respiratória. Uma técnica automatizada imagem coregistration foi validado para DCE-MRI de órgãos abdominais em um modo livre de respiração, mas ele executa effectively apenas quando as regiões alvo mover-se lentamente e regularmente 10. A freqüência respiratória dos animais é variável durante o exame, moderação, de modo físico na área abdominal será necessário para recuperar os parâmetros farmacocinéticos de confiança em modelos de ratos tumor pancreático ortotópicos. Temos quantificada com sucesso os parâmetros farmacocinéticos de um agente de contraste MR em ortotópicos xenografts tumor pancreático usando a placa de plástico orthogonally dobrado em DCE-MRI 11-13. Aqui apresentamos o procedimento detalhado de modelagem tumor pancreático orthotopic, DCE-MRI dos xenotransplantes de tumor em ratos, e quantificação dos parâmetros farmacocinéticos.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-118</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Harlan Laboratories</td><td>BT-9501</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue produtos</td><td>67618-153-01</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Suturas de Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8720H</td><td></td></tr><tr><td>9.4T MR scanner</td><td>Bruker Biospin Corporation</td><td>BioSpec 94/20 USR</td><td></td></tr><tr><td>Gadoteridol</td><td>Bracco Diagnostics Inc</td><td>NDC 0270-1111-03</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de micro-polietileno</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>#PE-10-25</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de ponta romba de 30 G</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>89134-194</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de monitoramento e gating</td><td>SA instruments, Inc</td><td>Modelo 1030</td><td>Este é um sistema compatível com MR para medir a classificação corretiva e a temperatura corporal de pequenos animais ao mesmo tempo.</td></tr><tr><td>Bomba de seringa</td><td>New Era Pump Systems, Inc.</td><td>NE-1600</td><td></td></tr></tbody></table>

contraste dinâmico aprimorada ressonância magnética de um modelo de câncer de pâncreas orthotopic rato

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

A ressonância magnética com contraste dinâmico (DCE-MRI) tem sido limitada Os modelos de tumores ortotópicos oferecem vantagens sobre os subcutâneos, pois podem refletir o microambiente do tumor primário que afeta o suprimento sanguíneo, a neovascularização e a invasão de células tumorais. Recentemente, estabelecemos um protocolo de DCE-MRI de xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em modelos de camundongos, protegendo os tumores com uma placa plástica ortogonalmente dobrada para evitar a transferência de movimento da região torácica durante a imagem. A pressão por esta prancha foi localizada na região abdominal, e não resultou em dificuldade respiratória dos animais. Este artigo demonstra o procedimento detalhado de modelagem ortotópica de tumores pancreáticos usando pequenos animais e DCE-MRI dos xenoenxertos tumorais. O método de quantificação de parâmetros farmacocinéticos em DCE-MRI também é introduzido. O procedimento descrito neste artigo ajudará os investigadores a aplicar DCE-MRI para modelos ortotópicos de camundongos com câncer gastrointestinal.

As células tumorais pancreáticas humanas crescer com sucesso em pâncreas de rato criando um tumor sólido. A Figura 1 apresenta fotografias de (A) um pâncreas normal onde a solução da célula de tumor é injectada, e (B) um ratinho representativo tendo um xenoenxerto de tumor pancreático ortotópico (MIA PaCa-2 ). Tumor está localizado no quadrante superior esquerdo do abdómen, ao lado do baço. Ele normalmente leva 2-4 semanas para que os tumores a crescer até 5-7 mm de diâmetro após o implante de células. ...

O objetivo deste protocolo é aplicar ressonância magnética com contraste dinâmico (DCE-MRI) para xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em camundongos. A DCE-MRI é um método não invasivo para analisar a microvasculatura em um tecido-alvo e útil para avaliar a resposta vascular em um tumor após uma nova terapia.

Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

O objetivo geral deste procedimento é aplicar a ressonância magnética com contraste dinâmico, ou D-C-E-M-R-I, em xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotópicos em camundongos. Isso é realizado primeiramente removendo-se o pâncreas da cavidade abdominal e, em seguida, infundindo-se lentamente células humanas de câncer pancreático na cauda do pâncreas. O pâncreas é então devolvido à cavidade abdominal, e quando o tumor atinge de cinco a sete milímetros de diâmetro, uma placa de plástico e uma bobina de superfície são posicionadas sobre a massa tecidual.No final, a microvasculatura do xenoenxerto tumoral pode ser visualizada por D-C-E-M-R-I. A principal vantagem dessa técnica em relação ao método convencional, como D-C-M-R-I, de xenoenxertos tumorais subcutâneos, é que os modelos ortotópicos de tumor pancreático permitem a avaliação do microambiente tumoral primário, incluindo suprimento sanguíneo de neovascularização e invasão das células tumorais. O procedimento será demonstrado por Sharon Samuel, pesquisadora associada, e Marie Warren, técnica de pesquisa, ambas do nosso laboratório.Inicie posicionando um camundongo do mar fêmea de oito semanas de idade, anestesiado, sobre uma placa aquecida após confirmar o nível apropriado de sedação por meio de pinçamento do dedo do pé. Em seguida, remova os pelos do quadrante superior esquerdo do abdômen do animal e administre um medicamento analgésico na pele utilizando uma tesoura reta de íris. Faça uma incisão de um centímetro na pele e no peritônio e levante suavemente o pâncreas através da incisão.Em seguida, utilize uma seringa de insulina de 0,5 mililitro, equipada com uma agulha de calibre 28, para infundir lentamente 2,5 milhões de células de câncer pancreático humano em 30 microlitros de DMEM na cauda do pâncreas. Confirme a formação de uma pequena bolha na cabeça do pâncreas provocada pela solução. Em seguida, recoloque suavemente o pâncreas de volta dentro da cavidade abdominal e feche o peritônio e a pele em uma única camada com dois pontos separados de fio de polipropileno 5-0.Verifique diariamente o tamanho do tumor com palpação da área cirúrgica usando dois dedos. Os tumores geralmente apresentam consistência mais densa e irregular em comparação com os tecidos e órgãos circundantes. Também monitore diariamente os animais em busca de sinais de doença.Quando o tumor atingir de cinco a sete milímetros de diâmetro, insira uma agulha fina de 30 gauge em uma extremidade de um tubo micro de polietileno e uma ponta de agulha romba de 30 gauge na outra extremidade. Conecte uma seringa de um mililitro contendo agente de contraste para ressonância magnética recém-preparado à ponta da agulha romba e pressione lentamente o êmbolo para preencher completamente todo o tubo. Em seguida, dilate as veias da cauda do animal sob uma lâmpada de calor e use pinças Kelly para segurar o corpo da agulha fina de 30 gauge.Insira cuidadosamente a agulha em uma das veias da cauda dilatadas e fixe com fita adesiva a cauda e o tubo sobre um pedaço de plástico de 10 por 100 milímetros para manter a cauda reta. Em seguida, posicione o camundongo em decúbito dorsal em uma caminha para animais equipada com água morna circulante para regular a temperatura corporal do animal durante a aquisição de imagens. Neste momento, insira também uma sonda retal de temperatura.Quando o animal estiver posicionado, aplique uma placa de plástico dobrada ortogonalmente na região abdominal, certificando-se de que o tumor esteja localizado atrás da extremidade superior da placa, e então puxe a placa para baixo cerca de dois milímetros para garantir que o tumor seja firmemente fixado. Fixe a placa ao leito do animal com fita adesiva. Em seguida, fixe um transdutor de almofada de respiração na região torácica para monitorar a respiração do animal durante a aquisição de imagens. Agora, posicione a bobina de superfície sobre a região do tumor, fixando-a firmemente com fita adesiva ao leito do animal.Em seguida, empurre a cama do animal para dentro do escâner de RM até que a região do tumor esteja no centro da bobina volumétrica. Aplique ressonância magnética ponderada em T2 para localizar o tumor, seguida por ressonância magnética ponderada em T1 com diversos ângulos de inclinação para mapeamento de T1. Em seguida, para a aquisição de imagem por D-C-E-M-R-I, aplique ressonância magnética ponderada em T1 com um ângulo de inclinação fixo continuamente antes, durante e após a injeção do contraste para RM à base de gadolínio.Monitore continuamente a respiração e a temperatura corporal do animal durante a aquisição de imagens; ao final da aquisição, remova a agulha e outras sondas e coloque o animal sob uma lâmpada de aquecimento, massageando suavemente a região abdominal inferior. Continue até que o animal acorde completamente. A D-C-E-M-R-I pode ser aplicada com sucesso em xenografias ortotópicas de tumores pancreáticos.Utilizando o modelo de região de referência, por exemplo, esses mapas de contraste demonstram a região tumoral em escala de cores um minuto antes da injeção do agente de contraste por RM. E cinco e 40 minutos após, sobrepostos às imagens de RM ponderadas em T2 em escala de cinza. O camundongo deste experimento portava um xenoenxerto ortotópico de tumor pancreático humano.Essas curvas de realce de contraste foram médias da região do tumor e da região do músculo paravertebral. Esses mapas de kts e KEP para o tumor demonstram a taxa de entrada e saída do agente de contraste Mr.Contrast. Ao tentar este procedimento TCMI, é importante garantir que o tumor esteja localizado atrás da extremidade superior da placa.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O vídeo explica um método cirúrgico passo a passo para implantação ortotópica de um fragmento tumoral de um doador canceroso para o pâncreas de um camundongo receptor não canceroso para o desenvolvimento de câncer de pâncreas. O PDAC implantado ortotopicamente pode recapturar o microambiente tecidual de cânceres pancreáticos humanos do que os modelos subcutâneos (SC) convencionais com mais precisão.

Transplante de tumor ortotópico de homoenxerto: uma técnica para gerar modelos de camundongos com tumor pancreático

Este vídeo descreve a técnica de DCE-MRI para xenoenxertos de tumores pancreáticos ortotrópicos em camundongos. DCE-MRI é um método não invasivo para analisar a microvasculatura em um tecido-alvo e útil para avaliar a resposta vascular em um tumor após uma nova terapia. Este método ajudará os investigadores a aplicar DCE-MRI para modelos de camundongos com câncer gastrointestinal ortotópico.

DCE-MRI de Xenoenxertos de Tumor Pancreático Ortotópico: Um Método para Avaliar a Microvasculatura em um Tecido Tumoral Alvo

Este vídeo demonstra um modelo ortotópico de câncer de pâncreas que utiliza Matrigel para entrega celular localizada e imagens de bioluminescência in vivo para monitoramento não invasivo da progressão do tumor. O modelo ortotópico é adequado para modelos singênicos e de xenoenxerto e pode ser usado em ensaios pré-clínicos para investigar o impacto de novas terapias anticâncer no crescimento do tumor pancreático primário e metástase.

Modelo de camundongo com câncer de pâncreas ortotópico bioluminescente: uma técnica não invasiva para monitorar a progressão do câncer em camundongos

Uma melhor compreensão da biologia do câncer de pâncreas é criticamente necessário para permitir o desenvolvimento de melhores opções terapêuticas para o tratamento de câncer no pâncreas. Para atender a essa necessidade, nós demonstramos um modelo ortotópico de câncer pancreático que permite o monitoramento não-invasivo de progressão do câncer...

Modelo ortotópico bioluminescente de progressão do câncer de pâncreas

Um procedimento para implantar células cancerígenas pancreáticas que expressam proteínas fluorescentes verdes (PANC-1 GFP) ortotopicamente no pâncreas de camundongos Balb-c Ola Hsd-Fox1nu para avaliar a progressão e metástase do tumor é apresentado aqui.

Fluorescente modelo de camundongo ortotópico de câncer de pâncreas

Este artigo descreve a utilização de ultra-som de alta resolução em camundongos geneticamente modificados câncer pancreático. O objetivo principal é fornecer uma instrução detalhada para detecção e avaliação de tumores pancreáticos endógenas.

Utilizando o ultra-som de alta resolução para o aparecimento de Tumor de Monitor e crescimento em modelos de câncer pancreático geneticamente modificados

Descrevemos um protocolo para a implantação guiada por ultrassom de linhas de células de adenocarcinoma ductal pancreática derivada de urina diretamente no local do tumor nativo. Esta aproximação conduziu aos tumores pancreatic detectáveis pela exploração do ultra-som dentro de 2-4 semanas da injeção, e reduziu significativamente a semeadura da pilha do tumor da proporção na parede peritoneal em comparação à implantação ortotópica cirúrgica.

Implantação ortotópica guiada por ultrassom do Adenocarcinoma Ductal Pancreático murine

No contexto clínico, pacientes com câncer pancreático localizado serão submetidos à pancreatectomia seguida de tratamento adjuvante. Este protocolo aqui relatado visa estabelecer um método seguro e eficaz de modelagem deste cenário clínico em camundongos nus, através da implantação ortotópica de câncer pancreático seguido de pancreatectomia distal e esplenectomia.

Um modelo de rato resemcional ortotópico de câncer pancreático

Apresentamos um protocolo para gerar um modelo de câncer de pâncreas ortotópico minimamente invasivo por injeção guiada por ultrassom de células cancerígenas pancreáticas humanas e o subsequente monitoramento do crescimento tumoral in vivo por ultrassonografia.

Geração de um xenoenxerto ortotópico de células cancerígenas pancreáticas por injeção guiada por ultrassom

Aloenxertos ortotópicos singênicos de adenocarcinoma ductal pancreático (ADP) de camundongos recapitulam a biologia, os fenótipos e as respostas terapêuticas dos subtipos da doença. Devido à sua rápida e reprodutível progressão tumoral, são amplamente utilizados em estudos pré-clínicos. Aqui, mostramos práticas comuns para gerar esses modelos, injetando culturas de PDAC murino singênico no pâncreas.

Aloenxertos Ortotópicos Singênicos de Camundongos para Modelo de Câncer de Pâncreas

Esse protocolo utiliza uma cama multicâmara para ressonância magnética paralela (RM) de até quatro animais para detectar tumores de adenocarcinoma pancreático em modelos de camundongos geneticamente modificados. Esse protocolo de ressonância magnética multianimal é rápido e econômico para detectar e medir tumores, facilitando a seleção de animais para estudos pré-clínicos e o monitoramento longitudinal do crescimento tumoral.

Imagem por Ressonância Magnética Multianimal para Medições de Tumores em Modelos de Câncer de Pâncreas em Ratos

Aprenda a aplicar DCE-MRI em xenotransplantes ortotópicos de tumor pancreático em camundongos. Esta técnica não invasiva permite visualizar a microvasculatura tumoral e avaliar respostas vasculares a novas terapias oncológicas.

Contraste Dinâmico aprimorada Ressonância Magnética de um Modelo de câncer de pâncreas Orthotopic Rato

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