Frequência mistura Scanner Detecção magnética for Imaging Partículas Magnéticas em amostras Planar

O objetivo geral deste procedimento é usar varreduras bidimensionais de detecção magnética mista para analisar amostras biológicas finas contendo partículas nanomagnéticas. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da bioquímica e do diagnóstico médico, como a análise de seções de tecido empregando partículas nanomagnéticas como um composto de nivelamento. A principal vantagem desta técnica é que ela permite um encontro da distribuição de partículas nanomagnéticas.

Demonstrando o procedimento estarão Eul-Gyoon Lim, Jae-chan Jeong e Jiho Chang, três pesquisadores do meu laboratório. A cabeça de medição p-FMMD deve ser projetada de acordo com os protocolos de texto. Os detalhes são fornecidos em todas as especificações de fiação e bobinamento.

A montagem e a configuração são detalhadas no protocolo de texto. Isso inclui o ajuste do equilíbrio de alta frequência e da tensão induzida. Em seguida, a eletrônica de medição é configurada, que inclui a seção de excitação, as seções de driver de baixa e alta frequência e a seção de detecção do FMMD.

Em seguida, o pré-amplificador, o primeiro demodulador, o amplificador intermediário com filtragem, o segundo demodulador e o amplificador final com filtragem são todos configurados. Finalmente, o scanner 2D é montado e conectado a um controle de computador. Para este procedimento, tem partículas de magnetita com diâmetros de 50 nanômetros e 100 nanômetros e partículas de maghemita de 1 mícron de diâmetro.

Lave as soluções de estoque de partículas em água e colete as partículas usando um ímã. Descarte a água e lave-os mais duas vezes. Em seguida, dilua as partículas em soluções de 25 miligramas por mililitro usando água destilada.

A partir da solução de partículas de 100 nanômetros, faça uma série de diluição de cinco vezes para concentrações de cinco, um, 0,2 e 0,04 miligramas por mililitro. Em seguida, perfure pedaços de papel absorvente usando um punção de biópsia. Em seguida, mergulhe os punções de papel nas diferentes soluções de partículas de 100 nanômetros por 30 segundos.

Após a imersão, deixe os furos de papel secarem ao ar. Em seguida, prepare pedaços recortados de nitrocelulose de dois por 18 milímetros. Mergulhe um pedaço de nitrocelulose em solução de partículas não diluídas de um mícron de diâmetro por 10 a 15 segundos e seque com ar não aquecido.

Mergulhe o outro pedaço de nitrocelulose em duas soluções de concentrações diferentes para fazer um gradiente de concentração e seque-o como o outro. Por fim, usando ação capilar, carregue um tubo capilar com 30 microlitros de solução de partículas não diluída de 50 nanômetros de diâmetro. Em seguida, carregue um segundo capilar com 10 microlitros de uma diluição de 20 vezes das mesmas partículas.

A direção de varredura deve ser a mais curta das duas dimensões planas. Defina o ponto inicial e a duração da digitalização usando as marcas de régua na paleta. Insira esses valores no software de digitalização e, em seguida, defina o deslocamento de digitalização para ser um pouco menor que a resolução espacial alcançável.

Em seguida, defina a velocidade de varredura levando em consideração a redução do sinal que ocorre devido à filtragem passa-baixa. Use um valor entre um e sete milímetros por segundo. Agora, defina a distância do passo.

O tempo total de varredura é calculado usando uma fórmula fornecida no protocolo de texto. Antes de digitalizar, prenda a amostra com fita adesiva. Para a digitalização, gere um arquivo NVD para o programa de controle de movimento.

Abra o programa de controle de movimento PMC e carregue o arquivo NVD. Pressione o botão Home para definir os pontos de origem mecânicos. Feche o programa de controle de movimento e retorne ao programa do scanner.

Em seguida, execute as verificações. Para essas varreduras, a intensidade do sinal foi analisada em função da concentração de esferas magnéticas e a velocidade de varredura foi de 10 milímetros por minuto. Uma forte correlação foi encontrada entre a concentração de grânulos e o sinal.

A relação entre a velocidade do estágio de varredura e a intensidade do sinal foi verificada usando pellets de papel embebidos em esferas magnéticas. Sinais mais altos foram obtidos em velocidades de varredura mais baixas. A comparação da varredura p-FMMD com uma imagem óptica da amostra de membrana de nitrocelulose mostrou claramente a utilidade do p-FMMD como um scanner MPI.

A amplitude da varredura se deve principalmente ao perfil de sensibilidade do cabeçote de medição. Da mesma forma, dois capilares preenchidos com diferentes concentrações de partículas magnéticas foram fotografados e escaneados por p-FMMD. É evidente que as concentrações que diferem por um factor de 20 são facilmente distinguidas.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como analisar 10 amostras contendo partículas nanomagnéticas com a técnica FMMD. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em cerca de uma hora se for executada corretamente. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para que o pesquisador da área de bioquímica e diagnóstico médico explorasse a distribuição das partículas nanomagnéticas que citam anticorpos específicos no sistema de órgãos.