Um método para avaliar funções efetoras mediada por Fc induzidas por anticorpos específicos de hemaglutinina de gripe

O objetivo geral deste protocolo é avaliar a capacidade de um anticorpo ou de uma amostra de soro de ativar a função efetora mediada por Fc. Este método pode ajudar a responder a questões-chave nos campos da imunologia e vacinologia, medindo a ativação da imunidade mediada por Fc dependente de anticorpos. A principal vantagem dessa técnica é que o experimento pode ser feito em até 24 horas desde a preparação do material até a análise dos dados.

Demonstrando este procedimento estará Mark Bailey, estudante de pós-graduação do laboratório de Peter Palese. Para induzir a expressão de hemaglutinina do vírus influenza por meio de transfecção, primeiro placa de rim embrionário humano 293 células em uma concentração de duas vezes 10 para a quarta células por poço em uma cultura de tecidos brancos tratada com placa de 96 poços. Após quatro horas a 37 graus Celsius e 5% de CO2, transfectar as células com 100 nanogramas de DNA codificador para hemaglutinina viral e 0,2 microlitros de reagente de transfecção por poço e um volume total de 50 microlitros de meio sérico 1X reduzido ideal.