Ensaios de Co-Imunoprecipitação e Pull-Down

Os ensaios de co-imunoprecipitação (CoIP) e pull-down são métodos intimamente relacionados para identificar interações proteína-proteína estáveis. Esses métodos estão relacionados à imunoprecipitação, um método para separar uma proteína alvo ligada a um anticorpo de proteínas não ligadas. No CoIP, uma proteína ligada a anticorpos está ligada a outra proteína que não se liga ao anticorpo, isso é seguido por um processo de separação que preserva o complexo proteína-proteína. A diferença nos ensaios puxados para baixo é que as proteínas de isca marcadas por afinidade substituem anticorpos, e a cromatografia de afinidade é usada para isolar complexos proteína-proteína.

Este vídeo explica coip, ensaios pull-down, e sua implementação em laboratório. Um protocolo passo-a-passo para cada técnica é coberto, incluindo os reagentes, aparelhos e instrumentos usados para purificar e analisar proteínas ligadas. Além disso, a seção de aplicações deste vídeo descreve um procedimento para estudar como as proteínas do micovírus inibem a nucleoproteína da gripe, uma investigação sobre o papel dos íons de cálcio na calmodulina através de um ensaio de puxar para baixo, e um ensaio de puxar para baixo modificado para caracterizar interações proteicas transitórias.