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Revisão e ensaio de reparo de DNA usando extensão de nucleotídeo único e análise de espectrometri...
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JoVE Journal Biochemistry
Proofreading and DNA Repair Assay Using Single Nucleotide Extension and MALDI-TOF Mass Spectrometry Analysis

Revisão e ensaio de reparo de DNA usando extensão de nucleotídeo único e análise de espectrometria de massa MALDI-TOF

Full Text
10,218 Views
11:08 min
June 19, 2018

DOI: 10.3791/57862-v

Kang-Yi Su*1,2, Steven D. Goodman*3, Hung-Ming Lai1, Rong-Syuan Yen1, Wei-Yao Hu1, Wern-Cherng Cheng2, Liang-In Lin1,2, Ya-Chien Yang1,2, Woei-Horng Fang1,2

1Department of Clinical Laboratory Sciences and Medical Biotechnology, College of Medicine,National Taiwan University, 2Department of Laboratory Medicine,National Taiwan University Hospital, 3Center for Microbial Pathogenesis, Nationwide Children's Hospital and the Department of Pediatrics,The Ohio State University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Foi desenvolvido um método não-rotulados, não-rádio-isótopos para revisão de DNA polimerase e um ensaio de reparo de DNA usando espectrometria de massa MALDI-TOF de alta resolução e uma estratégia de extensão de nucleotídeo único. O ensaio provou ser muito específico, simples, rápida e fácil de executar para revisão e reparação patches menor que 9-nucleotídeos.

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da fidelidade dos polímeros de DNA e reparo do DNA, como métodos de revisão e análise e na definição do adesivo de reparo do DNA. A principal vantagem dessa técnica é que ela é muito específica, simples, rápida e fácil de executar. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades por causa de ainda estarem na replicação do DNA e o campo de reparo pode não estar familiarizado com a instrumentação de espectrometria de massa e a interpretação dos dados.

Acho que o mais importante é que a demonstração visual é muito crítica, pois podemos mostrar como nossa espectrometria de massa desenvolvida comercialmente para aplicações clínicas, como mutação e deputação, pode ser convenientemente adaptada para revisão de DNA e estudo de reparo. Demonstrando o procedimento estarão os alunos de pós-graduação de Rong-Syuan e Kuei-Ching do meu laboratório. Comece este procedimento com a preparação do primer e do modelo, conforme descrito no protocolo de texto.

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Bioquímica edição 136 DNA polimerase revisão reparação de DNA espectrometria de massa MALDI-TOF extensão de nucleotídeo único dideoxyribonucleotide trifosfato incompatibilidade de DNA erro de replicação do DNA

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