Name: Extração ultrassônica assistida de ácido canabidiolico da biomassa da cannabis (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: Aprenda a extração ultrassônica de CBD da biomassa de Cannabis spp. usando etanol otimizado. Este método reduz tempo, custos e degradação de canabinoides para aplicações industriais sustentáveis.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo Instituto de Pesquisa da Cannabis da Universidade do Estado do Colorado-Pueblo, a bolsa da Korea Innovation Foundation financiada pelo governo coreano (MSIT) (2021-DD-UP-0379) e pela cidade de Chuncheon (Hemp P&D e industrialização, 2020-2021).

1. Preparação do material vegetal
<ol><li>Obtenha inflorescências de Cerejeira de plantas cultivadas no campo, plantadas em uma configuração sul-norte, com plantas de 1 m de distância no centro e fileiras de 1,2 m de distância (cultivo localizado em Longmont, Colorado, EUA).</li>
	<li>Seque as inflorescências a 35 °C por 48 h. Triture as inflorescências usando uma máquina de moagem de 177 μm.</li>
	<li>Passe o material pulverizado através da peneira de malha nº 80. Armazene o pó resultante em um saco selado à temperatura ambiente para uso futuro.</li>
</ol>2. Extração de ultrassom
<ol><li>Pesar 0,5 g do pó de inflorescência da Cannabis em um tubo cônico de 50 mL. Adicione 40 mL do solvente (por exemplo, 50% de etanol em água deionizada) ao navio.</li>
	<li>Coloque o recipiente de extração no banho ultrassônico a 40 kHz e à temperatura ambiente (a potência de sônica é de 100 W).</li>
	<li>Realize a extração no banho ultrassônico por 30 minutos, aumentando a temperatura do banho de 25 °C para 30 °C.</li>
	<li>Decante o fluido de extração em um tubo de centrífuga.</li>
	<li>Centrifugar o fluido a 3.000 x g a 15 °C por 15 min. Filtre o sobrenatante sob vácuo através de um papel filtro de 8 μm.</li>
</ol>3. Análise quantitativa de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC)
<ol><li>Diluir sete padrões canabinóides: canabirómene (CBC), CBD, CBDA, canabinol (CBN), tetrahidrocanabinolic (THCA), Δ8-THC e Δ9-THC para concentrações operacionais de 100, 50, 25 e 12,5 μg/mL em 100% de metanol. Misture e sonicate por 5 min em um conjunto de banho ultrassônico a 40 kHz e potência de sônica de 100 W</li>
	<li>Filtre as normas através de um filtro de seringa de politefluoroetileno de 0,45 μm (PTFE). Filtre a amostra sobrenatante (a partir da etapa 2.5) através de um filtro de seringa PTFE de 0,45 μm.</li>
	<li>Coloque a amostra a ser analisada em um frasco de 1,5 mL no autosampler HPLC e carregue 10 μL de cada vez.</li>
	<li>Execute o HPLC de acordo com as condições e parâmetros fornecidos na Tabela 1. Derivar concentrações canabinoides em 50-200 μg/mL a partir da curva padrão gerada.</li>
	<li>Multiplique com o volume do solvente (40 mL) utilizado no processo de extração para obter μg de canabinoide. Converta o μg de canabinoide em mg de canabinoide dividindo-o por 1000.</li>
	<li>Divida com o peso original do material vegetal (0,5 g) utilizado na extração para obter mg/g de peso seco.</li>
</ol>4. Otimização utilizando metodologia de superfície de resposta
<ol><li>Estabeleça o modelo, composto por 15 corridas experimentais com 12 pontos de fatorial e três pontos centrais, como mostrado na Tabela 4 , utilizando uma ferramenta de análise de dados.</li>
	<li>Otimize os parâmetros de extração, tempo de extração (T), concentração de solventes (S) e razão amostra/solvente (R) utilizando metodologia de superfície de resposta e design composto central. Definir a faixa das variáveis T, S e R como 5-30 min, 20%-100% e 60-100 (1:X), respectivamente.</li>
	<li>Selecione o rendimento total do extrato lipofílico e os rendimentos de CBD e CBDA extraídos como fatores de resposta (RF).</li>
</ol>

<ol><li>Hemphill, J. K., Turner, J. C., Mahlberg, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoid+content+of+individual+plant+organs+from+different+geographical+strains+of+Cannabis+sativa+L%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cannabinoid content of individual plant organs from different geographical strains of Cannabis sativa L.</a> Journal of Natural Products. 43 (1), 112-122 (1980).</li>
<li>Baldino, L., Scognamiglio, M., Reverchon, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supercritical+fluid+technologies+applied+to+the+extraction+of+compounds+of+industrial+interest+from+Cannabis+sativa+L.+and+to+their+pharmaceutical+formulations%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Supercritical fluid technologies applied to the extraction of compounds of industrial interest from Cannabis sativa L. and to their pharmaceutical formulations: A review.</a> Journal of Supercritical Fluids. 165, 104960(2020).</li>
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<li>Ohl, C. D., Kurz, T., Geisler, R., Lindau, O., Lauterborn, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bubble+dynamics%2C+shock+waves+and+sonoluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Philosophical+Transactions+of+the+Royal+Society+A%3A+Mathematical%2C+Physical+and+Engineering+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bubble dynamics, shock waves and sonoluminescence.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society A: Mathematical, Physical and Engineering Sciences. 357 (1751), 269-294 (1999).</li>
<li>Castro-Puyana, M., Marina, M. L., Plaza, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water+as+green+extraction+solvent%3A+Principles+and+reasons+for+its+use%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Green+and+Sustainable+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Water as green extraction solvent: Principles and reasons for its use.</a> Current Opinion in Green and Sustainable Chemistry. 5, 31-36 (2017).</li>
<li>Herrera, M. C., De Castro, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-assisted+extraction+of+phenolic+compounds+from+strawberries+prior+to+liquid+chromatographic+separation+and+photodiode+array+ultraviolet+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+A%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds from strawberries prior to liquid chromatographic separation and photodiode array ultraviolet detection.</a> Journal of Chromatography A. 1100 (1), 1-7 (2005).</li>
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<li>Soares, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+assisted+maceration+for+improving+the+aromatization+of+extra-virgin+olive+oil+with+rosemary+and+basil%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Ultrasound assisted maceration for improving the aromatization of extra-virgin olive oil with rosemary and basil.</a> Food Research International. 135, 109305(2020).</li>
<li>Kshitiz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+assisted+extraction+%28UAE%29+of+bioactive+compounds+from+fruit+and+vegetable+processing+by-products%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasinics+Sonochemistry%22%5BJournal%5D)">Ultrasound assisted extraction (UAE) of bioactive compounds from fruit and vegetable processing by-products: A review.</a> Ultrasinics Sonochemistry. 70, 105325(2017).</li>
<li>Mudge, E. M., Murch, S. J., Brown, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leaner+and+greener+analysis+of+cannabinoids%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Leaner and greener analysis of cannabinoids.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 409 (12), 3153-3163 (2017).</li>
<li>De Vita, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+for+the+extraction+of+cannabinoids+from+cannabis%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods for the extraction of cannabinoids from cannabis.</a> Natural Product Research. 34 (20), 2952-2958 (2020).</li>
<li>Rožanc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+Cannabis+sativa+extraction+methods+result+in+different+biological+activities+against+a+colon+cancer+cell+line+and+healthy+colon+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Plants%22%5BJournal%5D)">Different Cannabis sativa extraction methods result in different biological activities against a colon cancer cell line and healthy colon cells.</a> Plants. 10 (3), 566(2021).</li>
<li>Karğili, U., Aytaç, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supercritical+fluid+extraction+of+cannabinoids+%28THC+and+CBD%29+from+four+different+strains+of+cannabis+grown+in+different+regions%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Supercritical fluid extraction of cannabinoids (THC and CBD) from four different strains of cannabis grown in different regions.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 179, 105410(2022).</li>
<li>Sushma, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+ultrasound-assisted+extraction+%28UAE%29+process+for+the+recovery+of+bioactive+compounds+from+bitter+gourd+using+response+surface+methodology+%28RSM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Food+and+Bioproducts+Processing%22%5BJournal%5D)">Optimization of ultrasound-assisted extraction (UAE) process for the recovery of bioactive compounds from bitter gourd using response surface methodology (RSM).</a> Food and Bioproducts Processing. 120, 120-122 (2022).</li>
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<li>Garrett, E. R., Hunt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiochemical+properties%2C+solubility%2C+and+protein+binding+of+%CE%949-tetrahydrocannabinol%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Physiochemical properties, solubility, and protein binding of Δ9-tetrahydrocannabinol.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 63 (7), 1056-1064 (1974).</li>
<li>Metcalf, D. G. Chemical Abstracts. United States patent. , US10555914 267166 (2020).</li>
<li>Lazarjani, M. P., Young, O., Kebede, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Processing+and+extraction+methods+of+medicinal+cannabis%3A+a+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cannabis+Research%22%5BJournal%5D)">Processing and extraction methods of medicinal cannabis: a narrative review.</a> Journal of Cannabis Research. 3 (1), 1-15 (2021).</li>
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<li>Brighenti, V., Pellati, F., Steinbach, M., Maran, D., Benvenuti, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+new+extraction+technique+and+HPLC+method+for+the+analysis+of+non-psychoactive+cannabinoids+in+fibre-type+Cannabis+sativa+L.%28hemp%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Development of a new extraction technique and HPLC method for the analysis of non-psychoactive cannabinoids in fibre-type Cannabis sativa L.(hemp).</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 143, 228-236 (2017).</li>
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<li>Zhang, Q. W., Lin, L. G., Ye, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+for+extraction+and+isolation+of+natural+products%3A+a+comprehensive+review%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Techniques for extraction and isolation of natural products: a comprehensive review.</a> Chinese Medicine. 13 (20), 1-26 (2018).</li>
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</ol>

Os autores não declaram interesses concorrentes.

A polaridade de um solvente desempenha um papel crítico na efetiva extração de compostos. Uma vez que as canabinóides ácidas são ligeiramente polares na natureza, devido em grande parte à moiety ácido carboxílico, assumiu-se que um solvente polar como o metanol ou o etanol seria mais eficaz. Garrett e Hunt19, em seu estudo usando THC, demonstraram que a solubilidade no etanol aquoso foi baseada em percentual de etanol na solução e força iônica da solução. Embora a força iônica não tenha sido exami...

O cânhamo industrial (Cannabis spp.) produz canabinoides ácidos em diversos tecidos vegetais (flores, folhas e caules), com a maior concentração encontrada na flor1. A indústria da Cannabis utiliza vários métodos para extrair esses compostos. Um desses métodos é a extração de solventes que utiliza um solvente não polar e/ou polar, do qual o etanol é o mais utilizado. No entanto, a extração de solventes por si só é limitada em sua capacidade; portanto, técnicas de extração aumentada, como extração assistida por micro-ondas (MAE) e extração assistida por ultrassom (EAU), são projetadas para aumentar o rendimento. Além disso, o canabidiol de alta concentração (CBD) pode ser extraído usando tecnologias de fluidos supercríticos2.
A extração é um processo dinâmico, e vários fatores influenciam sua eficiência, ou seja, teor de umidade, tamanho de partículas e solvente3. Especificamente, para a técnica dos Emirados Árabes Unidos, a eficiência é regida pela temperatura, pressão, frequência e tempo4.
Extração ultrassônica assistida é o processo onde ondas ultrassônicas são passadas através de um líquido para agitar partículas. Durante o processo de agitação, os materiais vegetais experimentam cavitação acústica, ciclos de compressão e expansão que formam bolhas que colapsam em solução resultando na geração de temperatura extrema e pressão5. As mudanças de pressão e temperatura alteram as propriedades físicas dos solventes, o que pode resultar em maior eficácia da extração6. Além disso, a cavitação pode interromper as interações moleculares que levam a compostos orgânicos e inorgânicos que lixiviam da matriz vegetal7. O processo envolve dois tipos principais de fenômenos físicos: (1) difusão através da parede celular, e (2) enxaguar o conteúdo celular após quebrar a parede8. No entanto, o uso dos Emirados Árabes Unidos não é sem suas armadilhas; há vários relatos de que os Emirados Árabes Unidos podem degradar compostos 9,10. Além disso, as temperaturas geradas nos locais de cavitação estão acima das necessárias para a descarboxingação de canabinóides. No entanto, Mudge et al.11 usaram os Emirados Árabes Unidos e não observaram grande descarboxingação de CBD ou tetrahidrocanabinol (THC), demonstrando assim que os Emirados Árabes Unidos são um método eficiente e verde para a extração de canabinoides, uma vez que podem ser extraídos rapidamente usando baixa energia.
De Vita et al.12 examinaram especificamente o uso de métodos MAE e Emirados Árabes Unidos e descobriram que, ao aplicar as condições ideais para cada método, os Emirados Árabes Unidos extrairam mais do CBD ácido e neutro e THC presente no material vegetal. Da mesma forma, Rožanc et al.13 compararam múltiplos métodos de extração (Emirados Árabes Unidos, soxhlet, maceração e fluido supercrítico) e examinaram a atividade biológica dos extratos. Rožanc demonstrou que todos os métodos foram eficazes na extração de canabinoides; no entanto, fluido supercrítico e Emirados Árabes Unidos foram mais eficazes na extração de ácido canabidiolico (CBDA). Além disso, a extração dos Emirados Árabes Unidos teve a maior atividade biológica quando medida pelo ensaio 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH). O estudo de Rožanc também mostrou que, embora os processos de extração sejam eficazes na produção de extratos brutos, permanece uma porção de compostos não canabinoides que influenciam a atividade biológica dos extratos. Além disso, esses compostos podem complicar o isolamento e purificação de compostos canabinoides individuais dos extratos brutos13.
Técnicas de extração de fluidos supercríticos (SFE) têm sido usadas para extrair canabinoides neutros. Vários estudos demonstraram que a SFE mais um solvente orgânico, como o etanol, resultou em maior eficiência de extração de canabinóides neutros 2,3. Quando a pressão foi aumentada para níveis capazes de extrair os canabinoides ácidos, o conteúdo não canabinoide também aumentou. Como tal, essas altas pressões não são práticas para o processamento industrial, pois a seletividade da SFE para canabinoides diminuiu e é necessário um pós-processamento adicional. Consequentemente, a descarboxingação deve ser feita antes da SFE, o que pode resultar em perdas canabinoides de até 18%2. Para aumentar a eficiência na SFE, foi combinado com técnicas como extração em fase sólida para aumentar a pureza do extrato final14. No entanto, apesar de ter alta pureza como produto final, apenas canabinoides neutros são obtidos.
Tradicionalmente, no laboratório analítico, os canabinóides eram extraídos em uma mistura de metanol:clorofórmio 9:1. No entanto, Mudge et al.11 demonstraram que a extração efetiva pode ser realizada com solventes únicos ao empregar os Emirados Árabes Unidos. O estudo mostrou que 80% de metanol foi tão eficaz quanto a tradicional extração de metanol 9:1:clorofórmio, indicando assim que solventes mais verdes podem ser tão eficazes. Como tal, os Emirados Árabes Unidos foram examinados por seu potencial uso devido a vários benefícios, incluindo baixo custo de capital, redução do tempo de extração e menor uso de energia e volumes de solventes. No entanto, no caso dos Emirados Árabes Unidos, quando solventes polares são usados, clorofila e outros não-canabinóides podem ser extraídos, o que pode causar um problema na cor7. Consequentemente, para examinar o potencial de obtenção de canabinoides ácidos em escala comercial, os Emirados Árabes Unidos foram empregados usando a variedade industrial de cânhamo Cherry Wine. Cherry Wine é um híbrido de C. sativa e C. indica, um cruzamento entre as variedades de The Wife e Charlotte's Cherries. A variedade Cherry Wine é uma cepa de produção de CBDA alta (15% a 25% CBD) com baixos níveis de ácido tetrahidrocanabinolic (THCA). A variedade é uma cepa C. indica-dominate que tem de 7 a 9 semanas de floração.
Para estabelecer o protocolo de extração ideal dos Emirados Árabes Unidos, foram tomadas duas abordagens: o fator tradicional de cada vez (OFT) e uma abordagem de Design of Experiment (DoE) usando um Design Composto Central (CCD)15. Para o DoE, a extração CBDA/CBD foi otimizada com base na relação amostra/solvente, tempo de extração e concentração de solventes como fatores, e os dados resultantes foram analisados pela Response Surface Methodology (RSM). Em conclusão, o protocolo descrito descreve o método ideal para extrair a maior quantidade de CBDA/CBD.

<table><tbody><tr><td>Acetonitrila</td><td>J.K.Baker</td><td>9017-88</td><td>solvente</td></tr><tr><td>Canabicromeno</td><td>Cerilliant</td><td>C-143</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Canabidiol</td><td>Cerilliant</td><td>C-045</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Ácido canabidiólico</td><td>Cerilliant</td><td>C-144</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Canabidivarina</td><td>Cerilliant</td><td>C-140</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Canabigerol</td><td>Cerilliant</td><td>C-141</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Canabinol</td><td>Cerilliant</td><td>C-046</td><td>Canabinóides</td></tr><tr><td>centrífuga</td> padrão <td>Hanil Scientific Inc</td><td>Supra 22K</td><td>Centrífuga</td></tr><tr><td>Cereja Vinho cânhamo</td><td>CFH, Ltd.</td><td>-</td><td>Material de extração de flores</td></tr><tr>Água<td>destilada</td><td>TEDIA</td><td>WS2211-001</td><td></td></tr><tr><td>solvente Etanol</td><td>TEDIA</td><td>ES1431-001</td><td>solvente</td></tr><tr><td>Papel de filtro</td><td>Whatman</td><td>#2</td><td>Moedor de filtragem</td></tr><tr><td></td><td>Daesung Artlon</td><td>DA280-S</td><td>Fresagem</td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Shimadzu</td><td>LC-10 sistema</td><td>Análise de canabinóides</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>TEDIA</td><td>MS1922-001</td><td>solvente</td></tr><tr><td>Minitab 16.2.0</td><td>Minitab Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtros de seringa</td><td>Whatman</td><td>6779-1304</td><td>Filtragem</td></tr><tr><td>Tetrahidrocanabivarina</td><td>Cerilliant</td><td>T-094</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031-1L</td><td>HPLC solvente de fluxo</td></tr><tr><td>Banho não transônico</td><td>Jinwoo</td><td>4020P</td><td>Extração ultrassônica</td></tr><tr><td>Zorbax Eclipse plus C18 Coluna</td> <td>HPLCColuna HPLC Agilent</td><td>9599990-902</td><td></td></tr>&<tr><td>Delta; 8 - Tetrahidrocanabinol</td><td>Cerilliant</td><td>T-032</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>&Delta; 9 - Tetrahidrocanabinol</td><td>Cerilliant</td><td>T-005</td><td>Canabinóides padrão</td></tr><tr><td>&Delta; 9 - Ácido tetrahidrocanabinólico</td><td>Cerilliant</td><td>T-093</td><td>Canabinóides padrão</td></tr></tbody></table>

extração ultrassônica assistida de ácido canabidiolico da biomassa da cannabis

Ultrasonic-Assisted Extraction of Cannabidiolic Acid from Cannabis Biomass

O cânhamo industrial (Cannabis spp.) tem muitos compostos de interesse com potenciais benefícios médicos. Desses compostos, os canabinóides chegaram ao centro das atenções, especificamente canabinóides ácidos. O foco está se voltando para canabinóides ácidos devido à falta de atividade psicotrópica. Plantas de cannabis produzem canabinóides ácidos com plantas de cânhamo produzindo baixos níveis de canabinoides psicotrópicos. Como tal, a utilização do cânhamo para extração ácida de canabinoides eliminaria a necessidade de descarboxingação antes da extração como fonte para os canabinóides. O uso da extração à base de solventes é ideal para a obtenção de canabinoides ácidos, pois sua solubilidade em solventes como o CO2 supercrítica é limitada devido à alta pressão e temperatura necessária para atingir suas constantes de solubilidade. Um método alternativo projetado para aumentar a solubilidade é a extração assistida por ultrassom. Neste protocolo, foi examinado o impacto da polaridade solvente (acetonitrilo 0,46, etanol 0,65, metanol 0,76 e água 1,00) e concentração (20%, 50%, 70%, 90% e 100%) na eficiência de extração assistida por ultrassom. Os resultados mostram que a água foi a menos eficaz e a acetonitrila foi o solvente mais eficaz examinado. O etanol foi examinado ainda mais, pois tem a menor toxicidade e é geralmente considerado seguro (GRAS). Surpreendentemente, 50% de etanol na água é a concentração de etanol mais eficaz para extrair a maior quantidade de canabinóides do cânhamo. O aumento da concentração de ácido canabidílico foi de 28% em relação ao 100% etanol, e 23% quando comparado com 100% de acetonitrilo. Embora tenha sido determinado que 50% do etanol é a concentração mais eficaz para nossa aplicação, o método também tem demonstrado ser eficaz com solventes alternativos. Consequentemente, o método proposto é considerado eficaz e rápido para a extração de canabinoides ácidos.

Os solventes utilizados variam do médio do índice de polaridade (0,460 - ACN) ao polar (1.000 - água). A partir da Tabela 2, pode-se ver que a água não fez um extrator eficaz para os canabinoides, o que não é inesperado, pois os canabinóides têm solubilidade limitada na água devido à sua hidroofobidade13. Em contraste com a água, os outros solventes apresentaram valores extraídos similares de CBD e CBDA, com o menor acetonitrilo solvente polar (ACN) tendo maior extração quando com...

A extração ultrassônica assistida (EAU) aumenta a eficiência de extração de solventes e, quando aplicada à cannabis spp. biomassa, reduz o tempo necessário para a extração. Isso diminui o custo e a perda potencial de canabinoides devido à degradação. Além disso, os Emirados Árabes Unidos são considerados um método verde devido ao baixo uso de solventes.

Extração ultrassônica assistida de ácido canabidiolico da biomassa da cannabis

Industrial hemp (Cannabis spp.) has many compounds of interest with potential medical benefits. Of these compounds, cannabinoids have come to the center ...

Este protocolo demonstra todo o processo de extração de CBD, partindo da preparação do material, extração de solventes e medição do conteúdo cbd. Ao sugerir a concentração otimizada de solventes e solventes, este método elimina processos desnecessários e pode ajudar na extração eficiente de solventes para fins industriais. Comece por obter inflorescências de Cerejeira de plantas cultivadas no campo.O ar seca as inflorescências a 35 graus Celsius por 48 horas. Triture as inflorescências usando uma máquina de moagem fixada a 177 micrômetros. Passe o material pulverizado através da peneira de malha número 80 e armazene o pó em um saco selado à temperatura ambiente.Em um tubo cônico de 50 mililitros, pesa 0,5 gramas do pó de cannabis. Adicione 40 mililitros de 50% de etanol preparados em água deionizada. Coloque o recipiente de extração em um banho ultrassônico a 40 kilohertz, temperatura ambiente definida.Realize a extração por 30 minutos, aumentando a temperatura do banho de 25 a 30 graus Celsius. Após a sônicação, decante o fluido de extração em um tubo de centrífuga. Centrifugar o fluido a 3000 vezes G a 15 graus Celsius por 15 minutos.Filtre o sobrenatante através de um papel filtro de 8 micrômetros sob vácuo. Diluir os padrões de canabinoides às concentrações operacionais de 100, 50, 25 e 12,5 microgramas por mililitro em 100% de metanol. Misture e sonicate por cinco minutos em um banho ultrassônico definido a 40 kilohertz e potência de sônica de 100 watts.Filtre as normas e a amostra de cannabis sobrenatante através de um filtro de seringa de politefluoroetileno de 0,45 micrômetro. Coloque as amostras em frascos de 1,5 mililitro e coloque-as no autosampler HPLC. Carregue 10 microliters da amostra e execute o HPLC usando os parâmetros mostrados nesta tabela.Gere uma curva padrão e deriva concentrações de canabinoides em 50 a 200 microgramas por mililitro. Calcule o peso dos canabinóides em microgramas multiplicando-se com o volume do solvente utilizado no processo de extração, converta o valor em miligramas dividindo-o por 1.000. Divida esse valor pelo peso do material vegetal utilizado na extração para obter miligramas por grama de peso seco.A análise do HPLC mostrou que, ao utilizar 100% de solventes, o acetonitrilo foi mais favorável para a extração de canabinoides individuais. No entanto, o etanol foi examinado devido à menor toxicidade de todas. A avaliação do impacto do etanol aquoso na concentração de canabinoides extraídos mostrou que a extração máxima foi observada em 50% de etanol.Houve um aumento de 39,7% em relação ao etanol absoluto para a extração da CBDA. O nível de THCA também foi reduzido em 20,3% Utilizando a abordagem de design-of-experiment, a extração de CBDA mais CBD foi otimizada. A análise da metodologia da superfície de resposta confirmou os parâmetros ideais como extração de 30 minutos, 53,4% etanol na água e 1 a 100% da relação amostra-solvente.Uma maior quantidade de CBDA foi obtida utilizando-se o método de extração ultrassônico assistido em comparação com o método de maceração. A quantidade de CBD extraído também dobrou usando o método ultrassônico, indicando maior eficiência para extração de canabinoides. É importante lembrar a relação amostral com solvente, tempo de extração e concentração de solventes.otimizado por este estudo. Este procedimento pode ser realizado para extração de outros canabinóides do cânhamo.

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

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