Name: Abordagem Cirúrgica, Desafios e Resoluções para o Transplante de Útero em Ratas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-04-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 22 s
Description: Aprenda o transplante de útero direito em ratas, um procedimento microcirúrgico complexo que promove altas taxas de nascidos vivos. Este protocolo avança a pesquisa em biologia de transplantes.

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Este estudo foi financiado pela Swiss National Science Foundation (bolsa de projeto nº 310030_192736). Gostaríamos de agradecer à Dra. Frauke Seehusen do Instituto de Patologia Veterinária da Universidade de Zurique por seu apoio histopatológico.

Todos os experimentos com animais foram realizados seguindo os Regulamentos Animais Federais da Suíça e aprovados pelo Escritório Veterinário de Zurique (n° 225/2019), garantindo o cuidado humano. Ratas virgens Lewis (peso corporal de 170-200 g) e ratas virgens Brown Norway (170-200 g) foram utilizadas como doadoras/receptoras de útero, enquanto ratos Lewis machos (300-320 g) foram utilizados para acasalamento. Os ratos tinham idade entre 12 e 15 meses. Os animais foram obtidos de fontes comerciais (ver Tabela de Materiais) e alojados em condições controladas e ambiente enriquecido, com livre acesso à água e ração padrão.
1. Recuperação do útero
OBS: Para detalhes sobre o procedimento, favor consultar os relatórios publicados anteriormente12,13,15.
<ol><li>Induzir anestesia com isoflurano e oxigênio dentro de um recipiente de Plexiglas fechado (14 cm x 25 cm x 13 cm) por 1-2 min (5 vol% de isoflurano em O2).<ol><li>Administrar buprenorfina por via subcutânea (0,05 mg/kg) e bupivacaína (0,5%, 8 mg/kg) por via subcutânea na região da incisão abdominal planejada 30 minutos antes da cirurgia.</li>
		<li>Faça a barba de toda a pele abdominal do rato com um barbeador elétrico.</li>
		<li>Use fitas para manter o animal fixado em uma placa de aquecimento durante a cirurgia. Aplique pomada ocular em ambos os olhos.</li>
		<li>Manter a anestesia durante o procedimento com isoflurano 2-4 vol% em oxigênio por administração contínua através de um pequeno cone nasal.</li>
		<li>Monitorar a profundidade anestésica por parâmetros clínicos sem ferramentas especializadas (frequência respiratória de ~70-120/min - uma queda lenta de 50% é aceitável durante a anestesia; verificar a profundidade anestésica com pinça dos dedos; cor das mucosas deve ser rosa, não azul ou cinza)16 e ajustar a concentração de isoflurano de acordo. NOTA: Opcional: o monitoramento frequente da respiração durante a cirurgia é viável com a ajuda de um assistente.</li>
		<li>Confirme a profundidade do anestésico realizando uma pinça do dedo do pé.</li>
		<li>Limpe a pele abdominal em movimento circular com três swabs alternados de uma solução antisséptica e álcool a 70%. Deixe secar.</li>
		<li>Coloque um pano estéril (ver Tabela de Materiais) com uma janela abdominal sobre o animal.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar laparotomia mediana.<ol><li>Abra o abdome através de uma incisão longa de 6-8 cm na linha média, começando 0,5 cm abaixo do xifesterno em direção ao hipogástrio. Use um bisturi nº 10 para a incisão da pele e uma pequena tesoura afiada para a incisão da linha alba. Não danifique o fígado ou a bexiga.</li>
		<li>Mova os intestinos para fora da cavidade abdominal usando cotonetes, cubra-os suavemente com uma gaze umedecida com soro fisiológico estéril e proteja-os com um saco plástico estéril para melhor isolamento.</li>
		<li>Insira afastadores ou clipes (ver Tabela de Materiais) nas pastas da parede abdominal esquerda e direita para manter o músculo peritoneal de lado e o abdome aberto, para obter acesso e visibilidade ideais do útero e vasos associados. Fixe os clipes/afastadores com fitas.</li>
		<li>Aplicar soro fisiológico pré-aquecido para manter a área cirúrgica e os intestinos úmidos e evitar o ressecamento das vísceras.</li>
	</ol></li>
	<li>Retirar o corno uterino direito com a cavidade uterina comum e o colo do útero, além de pedículos vasculares, incluindo os vasos uterinos direitos, internos e ilíacos comuns.<ol><li>Ligate (4/0 poliglactina; ver Tabela de Materiais), cauterizar e cortar o corno uterino esquerdo adjacente à ramificação da cavidade uterina comum.</li>
		<li>Remova o excesso de gordura ao redor do útero e da vagina. NOTA: Mantenha a gordura ao redor do sistema vascular uterino.</li>
		<li>Dissecar a bexiga em sua fixação ao colo do útero com cauterização de todos os vasos vesicais de drenagem e alimentação. Durante a cauterização, mantenha uma distância adequada entre o colo do útero e a vagina para evitar a cauterização desnecessária dessas duas estruturas. Caso contrário, o risco de necrose do enxerto aumenta. NOTA: A maioria das manipulações cirúrgicas deve afetar a bexiga. Retrair ou puxar a bexiga caudalmente com uma pinça vascular (ver Tabela de Materiais) para obter uma melhor visão da escavação vesicouterina.</li>
		<li>Cauterizar e cortar os vasos uterinos descendentes ao nível do ureter o mais distal possível ao colo uterino. NOTA: Mantenha a microcirculação ao redor da vagina e do colo do útero o máximo possível durante a divisão.</li>
		<li>Separe a porção cervical/vaginal do futuro enxerto da fixação retal e dos ligamentos paravaginal e paracervical. NOTA: Evitar qualquer cauterização na vagina do enxerto.</li>
		<li>Dissecar cuidadosamente a vagina através de diatermia em torno de 2-3 mm caudal do colo do útero. NOTA: Nenhuma vilosidade (colo do útero) é visível dentro do lúmen vaginal.</li>
		<li>Localizar a artéria e a veia uterinas em suas origens. Ligate (poliamida 8/0; ver Tabela de Materiais), cauterizar e cortar os vasos glúteos e todos os vasos caudais dos vasos uterinos. NOTA: A ligadura direta da veia ilíaca comum caudal à veia uterina geralmente é possível.</li>
		<li>Por dissecção romba, libere os vasos ilíacos comuns uns dos outros, da bifurcação da aorta e da veia cava até a divisão dos vasos uterinos. NOTA: Pode-se obter melhor acesso cirúrgico à área removendo um ou dois linfonodos adjacentes.</li>
		<li>Excisar o corno uterino direito a 3 mm da tuba uterina após cauterização do pedículo útero-ovariano no mesmo nível. Isso permite a anastomose do corno uterino do enxerto com a parte superior do corno uterino receptor.</li>
		<li>Colocar ligaduras (poliamida 8/0) diretamente ao redor da artéria e veia ilíaca comum direita, proximal às bifurcações aórtica e cava. Faça uma pequena incisão (0,5-1 mm) na artéria ilíaca comum direita adjacente à bifurcação e insira uma agulha 30 G dobrada e embotada ou uma agulha reta 25 G embotada no lúmen (para rubor). Prenda-o com uma ligadura (poliamida 6/0). NOTA: Uma outra opção é a fixação adicional com uma braçadeira de buldogue para evitar o deslocamento da agulha e/ou vaso.</li>
		<li>Dissecar a veia ilíaca comum caudalmente da ligadura na veia ilíaca comum direita para permitir a saída durante o flushing.</li>
	</ol></li>
	<li>Lave o enxerto seguindo os passos abaixo.<ol><li>Lave o útero manualmente usando seringas de 3 mL com aproximadamente 9 mL de solução fria de Ringer (RHX: Ringer suplementado com 50 UI/mL de heparina e 0,4 mg/mL de xilazina) a um fluxo de 6 mL/min. Lavar novamente com 6 ml de solução de preservação de órgãos suplementada com heparina (50 UI/ml) e xilazina (0,4 mg/ml) (ver Tabela de Materiais). NOTA: Evite alta pressão de lavagem e garanta a colocação adequada da agulha.</li>
		<li>Remova o transplante quando o tecido uterino estiver pálido. Cortar a artéria ilíaca comum caudalmente da ligadura na bifurcação da aorta abdominal.</li>
	</ol></li>
	<li>Colocar o transplante em solução refrigerada de preservação de órgãos (4 °C) para preparação e armazenamento da mesa traseira antes do transplante.</li>
	<li>Após a retirada do enxerto, o animal foi sacrificado, primeiro com o ajuste de isoflurano ao máximo e, em seguida, induzindo-se pneumotórax bilateral seguido de exsanguinação17.</li>
</ol>2. Transplante de útero singênico
OBS: Para detalhes sobre o procedimento, favor consultar os relatórios publicados anteriormente12,13,15.
<ol><li>Induzir a anestesia e preparar o animal conforme mencionado no passo 1.1.<ol><li>Administrar analgesia eficaz (conforme descrito no passo 1.1.1) e 200 UI/kg de heparina de alto peso molecular 30 minutos antes da cirurgia.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar laparotomia mediana.<ol><li>Abra o abdome através de uma incisão mediana de 6-8 cm de comprimento começando 0,5 cm abaixo do xifesterno em direção ao hipogástrio. Use um bisturi nº 10 para a incisão da pele e uma pequena tesoura afiada para a incisão da linha alba. Não danifique o fígado e a bexiga.</li>
		<li>Mova os intestinos delgados para fora da cavidade abdominal usando cotonetes, envolva-os com uma gaze estéril umedecida e cubra-os com um saco plástico estéril para melhor isolamento.</li>
		<li>Insira afastadores ou clipes nas pastas da parede abdominal esquerda e direita para manter o músculo peritoneal de lado e o abdome aberto, para obter o acesso e a visibilidade ideais do útero e dos vasos associados. Fixe os clipes/afastadores com fitas.</li>
		<li>Aplicar soro fisiológico pré-aquecido para manter a área cirúrgica e os intestinos úmidos e evitar o ressecamento das vísceras.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar histerectomia com dissecção e mobilização do terço superior da vagina a partir do reto e da bexiga.<ol><li>Cauterizar a microvasculatura ao redor do útero, colo do útero e vagina. Corte e separe o útero das estruturas circundantes próximas ao órgão para proteger a microcirculação do sinistro uterino.</li>
		<li>Remova o tecido adiposo dos arredores.</li>
		<li>Amputar o corno esquerdo por cauterização. Do lado direito, preservar um segmento de 7-8 mm da parte superior do útero para posterior anastomose ao enxerto uterino.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar transplante de útero.<ol><li>Mobilizar e separar os vasos ilíacos comuns direitos, desde a origem dos vasos uterinos até a bifurcação aorto/cava.</li>
		<li>Posicione o enxerto na cavidade abdominal. Embrulhe o enxerto em uma gaze embebida em solução fria de preservação de órgãos. OBS: O enxerto precisa ser mantido frio durante a anastomose.</li>
		<li>Colocar pinças vasculares atraumáticas na veia ilíaca comum direita de cada lado, enquadrando o local da anastomose futura. NOTA: Abaixe a anestesia para 1-1,5 vol% de isoflurano para se adaptar à diminuição súbita da pré-carga cardíaca e à hipotensão resultante.</li>
		<li>Corte uma fenda ligeiramente maior do que a abertura da veia do enxerto na veia ilíaca comum.</li>
		<li>Posicione a veia do enxerto.</li>
		<li>Coloque uma sutura de permanência (poliamida 10/0; ver Tabela de Materiais) em cada canto da fenda na veia ilíaca comum direita. OBS: Mantenha o nó de sutura no canto caudal solto para melhor ajuste e evitar efeitos de bolsa-corda.</li>
		<li>Lave regularmente a área da anastomose com RHX resfriado durante o procedimento para evitar tromboses.</li>
		<li>Anastomosar um lado da veia do enxerto à veia do receptor com seis a oito alças de sutura contínua (Figura 1). OBS: Iniciar com a sutura de estaca cranial (poliamida 10/0) e anastomosar primeiramente a parte de entrada dos vasos.</li>
		<li>Anastomose o outro lado do vaso da mesma maneira, desta vez começando por fora.</li>
		<li>Amarrar um nó na sutura de estaca cranial e, em seguida, um na sutura de suspensão caudal (poliamida 10/0), após terminar as anastomoses em ambos os lados. NOTA: Aperte as suturas contínuas apenas o quanto necessário para evitar efeitos de corda de bolsa.</li>
		<li>Colocar pinças vasculares atraumáticas na artéria ilíaca comum direita de cada lado, enquadrando o local da anastomose futura.</li>
		<li>Realizar a anastomose arterial (artéria ilíaca comum direita [AICD] através de 8-10 alças utilizando pontos interrompidos (poliamida 10/0). OBS: As suturas interrompidas são mais fáceis de controlar do que as contínuas (opcional com a técnica "boca de peixe")18. A lavagem constante da área da anastomose com RHX resfriado durante o procedimento ajuda a prevenir tromboses. Ao utilizar suturas contínuas, realizar esta etapa análoga à anastomose venosa.</li>
	</ol></li>
	<li>Realizar reperfusão do enxerto.<ol><li>Quando ambos os locais de anastomose parecerem pérvios e qualquer sangramento for interrompido, solte as pinças vasculares nos vasos do enxerto (Figura 2).</li>
		<li>Inspecione o enxerto em busca de sinais de reperfusão, como vermelhidão, enchimento da veia ou pulsação na artéria do enxerto.</li>
		<li>Conectar o manguito vaginal do transplante à abóbada vaginal da receptora usando seis a sete pontos intraluminais (6/0 poliglactina) interrompidos. OBS: Iniciar com uma única sutura na posição 12 horas primeiro, e colocar as próximas nas posições 10 e 1 hora. As duas suturas nas posições 9 e 3 horas devem ser amarradas após as suturas na primeira fileira19,20.</li>
		<li>Anastomosar o enxerto do corno uterino término-a-terminal ao segmento uterino cranial remanescente do útero receptor usando cinco a sete suturas interrompidas (poliamida 7/0). OBS: Não costurar através do lúmen.</li>
	</ol></li>
	<li>Fechar o abdome com uma sutura contínua. Utilizar poliglactina 4/0 para sutura da camada muscular e poliamida 6/0 ou clipes da ferida cirúrgica para a pele.</li>
	<li>Deixe o animal se recuperar em uma gaiola aquecida assim que o transplante for concluído. Permanecer com o animal até que ele tenha recuperado a capacidade de decúbito esternal e manter alojamento único até sua recuperação completa. Fornecer tratamento de analgesia psotopertaive administrando buprenorfina (0,05 mg/kg) por via subcutânea e AINE adequado, porém não antes de 4-8 horas após a primeira dose de anestesia. Fornecer continuamente buprenorfina através de água potável (1 mg/kg, via oral, 5 mL de buprenorfina em 160 mL de água potável (0,3 mg/mL)) por três dias após a cirurgia.</li>
	<li>A sutura da pele é removida 10-14 dias após a certeza.</li>
</ol>

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<li>Jakubauskiene, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relaxin+and+erythropoietin+significantly+reduce+uterine+tissue+damage+during+experimental+ischemia-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Relaxin and erythropoietin significantly reduce uterine tissue damage during experimental ischemia-reperfusion injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (13), 7120(2022).</li>
<li>Wang, Y., Wu, Y., Peng, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resveratrol+inhibits+the+inflammatory+response+and+oxidative+stress+induced+by+uterine+ischemia+reperfusion+injury+by+activating+PI3K-AKT+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Resveratrol inhibits the inflammatory response and oxidative stress induced by uterine ischemia reperfusion injury by activating PI3K-AKT pathway.</a> PLoS One. 17 (6), 0266961(2022).</li>
<li>Kisu, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risks+for+donors+in+uterus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+Sciences%22%5BJournal%5D)">Risks for donors in uterus transplantation.</a> Reproductive Sciences. 20 (12), 1406-1415 (2013).</li>
<li>Jones, B. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+transplantation+in+transgender+women%5BTitle%5D)+AND+%22BJOG%3A+an+International+Journal+of+Obstetrics+and+Gynaecology%22%5BJournal%5D)">Uterine transplantation in transgender women.</a> BJOG: an International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 126 (2), 152-156 (2019).</li>
</ol>

Os autores declaram não ter interesses concorrentes.

O protocolo aqui apresentado oferece instruções detalhadas para a abordagem cirúrgica por trás do transplante de útero em ratas. O protocolo foi otimizado para aumentar as chances de nascidos vivos após TxU e subsequente acasalamento. O protocolo original foi retomado do grupo de Brännström12,13, inspirado no trabalho em camundongos de Akouri et al.10, e modificado com base nas experiências dos autores nos últimos anos. Como tal, as modifi...

O transplante uterino (UTx) é um novo tratamento para a infertilidade absoluta do fator uterino (AUFI). O IAAU resulta de uma ausência (congênita ou adquirida) ou malformação do útero e afeta 3%-5% das mulheres em todo o mundo1. Razões éticas, legais ou religiosas descartam a adoção ou barriga de aluguel para muitas mulheres que têm o desejo de maternidade, mas sofrem de AUFI2. Para essas mulheres, a UTx continua sendo a única opção para começar sua própria família. A UTx tem sido aplicada na clínica, embora com sucesso misto; O procedimento é tecnicamente desafiador e requer aprimoramento constante para seu estabelecimento clínico.
Em 2014, o primeiro transplante de útero de uma doadora viva (DL) – resultando em gravidez bem-sucedida – foi realizado pelo pioneiro grupo sueco de Brännström3. O primeiro parto após Tx de doador falecido (DD) foi relatado em 2016 no Brasil4. Até 2021, mais de 80 UTxs foram realizadas em todo o mundo, porém com uma taxa de sucesso de cerca de 50% e com enxertos provenientes de DL para a maioria1.
Apesar de não salvar vidas, o UTx é um procedimento cada vez mais popular para satisfazer os desejos da própria progênie. Dessa forma, a demanda por enxertos está aumentando, colocando a doação de DD em um foco futuro. No entanto, a doação DD é complicada devido a exposições isquêmicas consideravelmente mais longas ao frio (e, no caso de morte cardíaca, também quente), elevando os riscos de disfunção e rejeição do enxerto 5,6. A técnica cirúrgica, a compatibilidade exigente e a imunossupressão associada permanecem questões críticas em relação aos resultados daTxU7.
Para gerenciar os riscos acima na clínica, modelos animais apropriados para a exploração de isquemia e imunossupressão são necessários. O desfecho clinicamente mais relevante para modelos animais continua sendo o nascimento bem-sucedido; até o momento, gestações após UTx experimental foram alcançadas em camundongos, ratos, ovelhas, coelhos e macacos cynomolgus8. Enquanto animais maiores são predestinados a adquirir e otimizar técnicas cirúrgicas, os roedores apresentam a nítida vantagem de curtos períodos de gestação. Portanto, os modelos de roedores são superiores em considerações práticas, financeiras e éticas9. No entanto, o principal desafio da UTx em camundongos é a anatomia pequena, com a cirurgia altamente exigente ligada à baixa reprodutibilidade da UTxmurina 10. Por outro lado, as ratas são cirurgicamente mais acessíveis e mantêm as vantagens de tempos de gestação curtos. Como tal, o rato tornou-se o modelo de escolha para UTx9. Wranning e col. introduziram o modelo de UTx ortotópica em ratos em 2008 e, usando esse modelo, o primeiro nascido vivo após UTx e acasalamento natural foi relatado11,12,13. Estudos subsequentes tiveram contribuições críticas para a implementação da TxU em humanos9.
No entanto, a Tx permanece desafiadora em ratos, e apenas alguns grupos ainda dominam essa técnica cirúrgica. Um obstáculo relevante para a disseminação da UTx de ratos entre os pesquisadores é a falta de uma descrição precisa dos passos microcirúrgicos individuais, das armadilhas e das medidas de acordo para a solução deproblemas14. Este protocolo visa fornecer um guia detalhado para este procedimento microcirúrgico de alta complexidade para facilitar a implementação deste modelo animal em pesquisas futuras.

<table><tbody><tr><td>Tesoura angular para o lado 5 mm</td><td>F.S.T</td><td>15008-08</td><td></td></tr><tr><td>Clipe de papel grande</td><td>Não específico</td><td></td><td>Usado como retrator</td></tr><tr><td>Agulha de curvatura romba G30</td><td>Unimed S.A.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaína 0,5%</td> <td>Sintetica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg / mL</td><td>Dosiernadel Temgesic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>G25</td><td>H.SIGRIST& PARTNER AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5SF Fórceps</td><td>FST</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10/0</td><td>Ethicon</td><td>2810G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 6/0</td><td>Ethicon</td><td>667H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 7/0</td><td>Ethicon</td><td>EH7446H</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8/0</td><td>Ethicon</td><td>2808G</td><td></td></tr><tr><td>Femal Brown Norway Rats (150-170 g)</td><td>Janvier</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ratos Femal Lewis (150-170 g)</td><td>Tesouras Finas Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>- Sharp</td><td>F.S.T</td><td>14060-09</td><td>Qualquer outra tesoura pequena também funciona</td></tr><tr><td>Halsey Micro Porta-Agulhas</td><td>F.S.T</td><td>12500-12</td><td>Qualquer outro pequeno necessitador também</td></tr><tr><td>funciona Heparina Natrium 25000 I.E./ 5 mL</td> Solução de Perfusão <td>B. Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Institute Georges Lopez ( IGL)</td><td>Instituto Georges Lopez</td><td></td><td>Solução de preservação de órgãos&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Ratos Lewis Machos (300-320 g)</td><td>Charles River Deutschland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 13 mm</td><td>F.S.T</td><td>18055-04&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Micro Serrefines 16 mm gebogen</td><td>F.S.T</td><td>18055-06</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Serrefine Clamp Aplicador com Trava&nbsp; &nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>18056-14&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>M&ouml; lnlyncke Op Toalha</td><td>M&ouml; lnlyncke</td><td>800300</td><td>Campo estéril</td></tr><tr><td>NaCl 0.9%</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octenisept</td><td>Sch&uuml; lke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fita de Papel</td><td>Tesa</td><td></td><td>Para consertar o animal</td></tr><tr><td>Philips Avent Schneller Flaschenw&auml; rmer SCF358/02</td><td>Philips</td><td>12824216</td><td></td></tr><tr><td>Ringerfundin</td><td>B.Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rompun 2%</td> <td>Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas com Alça Redonda</td><td>FST</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>Porta-agulhas com Alça Redonda</td><td>FST</td><td>12075-12</td><td></td></tr><tr><td>S& Pinça Dilatadora de Vaso T - Angular 45&deg;</td><td>F.S.T</td><td>00276-13</td><td></td></tr><tr><td>Sacryl Naht</td><td>KRUUSE</td><td>152575</td><td></td></tr><tr><td>Scapel No 10</td><td>Swann Morton</td><td>201</td><td></td></tr><tr><td>Small Histo-Container</td><td></td><td></td><td>Qualquer pequeno recipiente de histo funciona bem para armazenamento a frio do enxerto</td></tr><tr><td>Pequenos Sacos</td><td></td><td></td> Plastik <td>Qualquer saco plástico transparente está bem</td></tr><tr><td>Esterilizado Cotonete</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>Qualquer cotonete estéril é bom</td></tr><tr><td>Gaze Estéril</td><td>Lohmann-Rauscher</td><td></td><td>Qualquer gaze estéril é boa</td></tr><tr><td>Tesoura Reta 8mm</td><td>F.S.T</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio cirúrgico &ndash; SZX9</td><td>Olympus</td><td>OLY-SZX9-B</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de Amarração de Sutura SLS Sutter 0.4 mm GLISS 0.4 mm</td><td></td><td>01 69 SLS</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>F.S.T</td><td>00272-13</td><td></td></tr><tr><td>ThermoLux tapete de aquecimento</td><td>ThermoLux</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tecido Forceps para Pele</td><td></td><td></td><td>Qualquer tecido fórceps está bem</td></tr><tr><td>Fórceps Vasodilatador</td><td>F.S.T</td><td>00125-11</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl&nbsp; plus 4/0</td><td>Ethicon</td><td>VCP292H</td><td></td></tr></tbody></table>

abordagem cirúrgica, desafios e resoluções para o transplante de Útero em ratas

Surgical Approach, Challenges, and Resolutions for Uterus Transplantation in Rats

O transplante uterino (UTx) é uma nova abordagem para o tratamento de mulheres com infertilidade absoluta do fator uterino (AUFI). Estima-se que 3%-5% das mulheres sofram de AUFI. Essas mulheres foram privadas da opção de ter filhos até o advento da UTx. A aplicação clínica de UTx foi impulsionada por estudos experimentais em animais, e a primeira UTx bem-sucedida foi alcançada em ratos. Dadas suas características fisiológicas, imunológicas, genéticas e reprodutivas, os ratos são um sistema modelo adequado para tais transplantes. Em particular, seu curto período de gestação é uma clara vantagem, já que o desfecho usual da UTx experimental é a gravidez bem-sucedida com nascido vivo. O maior desafio para modelos de ratos continua sendo a anatomia pequena, que requer habilidades microcirúrgicas avançadas e experiência. Embora a UTx tenha levado à gravidez na clínica, o procedimento não está estabelecido e requer otimização experimental contínua. Aqui, um protocolo detalhado é apresentado, incluindo a solução de problemas essencial para UTx de ratos, o que deve tornar todo o procedimento mais fácil de entender para aqueles sem experiência neste tipo de microcirurgia.

Resultados de dois grupos de ratos são apresentados. A Tx foi realizada antes (grupo 1, n = 8) e após (grupo 2, n = 8) ajuste do protocolo (Tabela 1) para demonstrar os efeitos de nossas modificações (consulte a Discussão para uma explicação de nossas modificações)12,15,21.
O resultado da UTx de ratos está associado a três fases principais. A primeira fase é a recuper...

O presente protocolo descreve todas as etapas essenciais para o sucesso do transplante uterino (TxU) em ratas. O modelo em ratos mostrou-se adequado para promover a implementação clínica de UTx; no entanto, a UTx de ratos é um procedimento altamente complexo que requer instruções cuidadosas.

Abordagem Cirúrgica, Desafios e Resoluções para o Transplante de Útero em Ratas

Uterine transplantation (UTx) is a new approach for treating women with absolute uterine factor infertility (AUFI). An estimated 3%-5% of women suffer ...

O transplante de útero direito pertence a um dos procedimentos microcirúrgicos mais complexos dominados por poucos. Nosso protocolo muda o transplante de útero direito de uma fase experimental para uma metodologia aplicável. Nosso protocolo leva a uma alta taxa de nascidos vivos pós-transplante de útero.Em breve promoverá a aplicação do transplante de útero direito para pesquisa real. Paciência e resistência são características fundamentais durante todo o procedimento. Após a realização de laparotomia mediana, em uma rata anestesiada, retirar o corno uterino direito com a cavidade uterina comum e o colo do útero, juntamente com pedículos vasculares.Cauterizar a ferida e ligar o corno do útero esquerdo com uma sutura de poligalactina 4-0. Agora corte o corno uterino esquerdo adjacente à ramificação da cavidade uterina comum. Separe a porção cervical e vaginal do futuro enxerto da fixação retal.Separe o futuro enxerto dos ligamentos paravaginal e paracervical. Usando diatermia, dissecar a vagina em torno de dois a três milímetros caudal do colo do útero. Localizar a artéria uterina e veias em suas origens.Ligate todos os vasos caudais dos vasos uterinos com 8-0 lugar de poliamida. Lugar 8-0 ligaduras de poliamida diretamente ao redor da artéria ilíaca comum direita e veia proximal às bifurcações aórtica e cava. Fazer uma incisão de 0,5 a um milímetro de comprimento na artéria ilíaca comum direita diretamente adjacente à bifurcação.Insira uma agulha reta romba de calibre 25 no lúmen para liberá-lo. Fixe a agulha com uma ligadura de poliamida 6-0. Para permitir a saída durante o flushing, disseque a veia ilíaca comum caudal à ligadura na veia ilíaca comum direita.Usando uma seringa de três mililitros, lave o útero com solução fria de Ringer, seguida de solução de preservação de órgãos ambos suplementados com heparina e xilazina. Cortar a artéria ilíaca comum caudal da ligadura na bifurcação da aorta abdominal. Em seguida, com dissecção romba, cortar os vasos ilíacos comuns da bifurcação da veia cava da aorta na divisão dos vasos uterinos.E remover o transplante quando o tecido uterino ficar pálido. Coloque o transplante na solução fria de preservação de órgãos para facilitar a preparação e o armazenamento da mesa de repouso antes do transplante. Após a colocação do enxerto na cavidade abdominal e o posicionamento da veia do enxerto, colocar uma sutura de permanência de poliamida 10-0 no canto cranial e uma sutura solta no canto caudal da fenda na veia ilíaca comum direita.Anastomose um lado da veia do enxerto na veia do receptor usando seis a oito alças de sutura contínua. Da mesma forma, anastomose o outro lado do vaso a partir do exterior. Em seguida, com poliamida 10-0, amarrar um nó na sutura de estada cranial e outro nó na sutura de suspensão caudal.Realizar anastomose arterial com pontos de poliamida 10-0 interrompidos na artéria ilíaca comum direita com oito a 10 alças. Para iniciar a perfusão do enxerto, quando os locais parecerem pérvios, solte as pinças vasculares nos vasos do enxerto e verifique se há sinais de reperfusão no enxerto. Conectar o manguito vaginal do transplante à abóbada vaginal usando seis a sete suturas de poligalactina 6-0 interrompidas.Com cinco a sete pontos de poliamida 7-0 interrompidos, anastomose-se o corno uterino gráfico de ponta a ponta do segmento cranial uterino remanescente da receptora. Monitore o rato pós-operação. Após o transplante uterino, duas ratas do Grupo 1 apresentaram sinais de prenhez.No entanto, o exame revelou útero dilatado, sugerindo que os filhotes se desenvolveram normalmente, mas as ratas não conseguiram entregar os filhotes. O exame histológico dos fetos mostrou que os filhotes se desenvolveram até o parto. Cinco ratas do Grupo 2 apresentaram prenhez, com três dando à luz filhotes.A fêmea Lewis deu à luz duas vezes. Todos os filhotes da primeira ninhada sobreviveram, enquanto apenas dois dos três filhotes da segunda ninhada sobreviveram. A fêmea marrom da Noruega também deu à luz duas vezes e todos os filhotes sobreviventes apresentaram desenvolvimento normal.A adaptação do protocolo melhorou tanto os resultados cirúrgicos diretos quanto a taxa de nascidos vivos após o transplante uterino. Aumentou a sobrevida do enxerto em duas semanas de 50% no Grupo 1 para 75% no Grupo 2. É importante manter o nó de sutura no canto caudal solto para melhor ajuste e evitar efeitos de cordas franzidas.O transplante de útero direito é particularmente adequado para avaliar abordagens pré-transplante que podem melhorar os resultados do transplante de útero, como perfusão de órgãos hipodérmicos ex vivo ou outras técnicas para a mitigação de lesões de órgãos. Em geral, o transplante de útero em animais tem sido e é uma obrigação introduzir para estabelecer o transplante de útero na clínica.

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JoVE Journal

Medicine

Medicina

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