Isolamento Simultâneo dos Principais Tipos Celulares Residentes no Sistema Nervoso Central de Camundongos Adultos com Encefalomielite Autoimune

Até o momento, os protocolos para o isolamento simultâneo de todos os principais tipos celulares residentes no sistema nervoso central do mesmo camundongo são uma demanda não atendida. O protocolo mostra um procedimento aplicável em camundongos ingênuos e experimentais com encefalomielite autoimune para investigar redes celulares complexas durante a neuroinflamação e, simultaneamente, reduzir o número necessário de camundongos.

Para investigar mecanismos moleculares e celulares em doenças autoimunes como a esclerose múltipla, a geração de protocolos reprodutíveis e sofisticados de isolamento celular é uma necessidade não atendida. A maioria das tecnologias atuais para isolar e analisar células residentes no SNC mostra sérias deficiências, como focar em apenas um tipo de célula ou apenas camundongos pós-natais. O protocolo atual para o isolamento simultâneo de todos os principais tipos celulares residentes no SNC a partir de uma réplica do SNC oferece a possibilidade de analisar redes neuronais complexas e novas vias inflamatórias, ex vivo a partir de uma única suspensão celular, aplicáveis a camundongos saudáveis e com encefalomielite autoimune experimental.

Além disso, o número de camundongos está diminuído Nosso protocolo para o isolamento simultâneo de todos os quatro principais tipos celulares residentes no SNC em camundongos saudáveis e EAE poderia ser usado como uma ferramenta útil para grupos de pesquisa que estudam novas vias inflamatórias, permitindo uma análise muito mais precisa de mecanismos biomoleculares complexos e redes celulares ex vivo. Novas questões científicas que poderiam ser respondidas com a ajuda de nosso protocolo são investigações dinâmicas em EAE durante diferentes estágios do curso da doença, como neuroinflamação, neurodegeneração e remissão. Além disso, interações célula-célula e vias bioquímicas podem ser estudadas em nível individual.

Da mesma forma, ensaios funcionais poderiam ser realizados com células cultivadas. Pretendemos focar em estudos dinâmicos do curso de EAE para análise multi-ômica a partir de um homogeneizado de SNC individual por ponto de tempo EAE.