Name: Um modelo murino imunocompetente para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-15T14:10:00.000+00:00
Duration: 9 min 10 s
Description: Aprenda a desenvolver modelos murinos imunocompetentes para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma. Este método permite avaliar respostas celulares e teciduais ao tratamento térmico em tumores cerebrais.

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<ol><li>Canadian Cancer Society. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+2023%22">Cancer Statistics 2023</a>. , Canadian Cancer Statistics Advisory Committee in collaboration with the Canadian Cancer Society, Statistics Canada and the Public Health Agency of Canada. Toronto, ON. http://cancer.ca/Canadian-Cancer-Statistics-2023-EN (2023).</li>
<li>Glioblastoma Research Organization. Glioblastoma Research Organization. , 
 <a target="_blank" href="https://www.gbmresearch.org">https://www.gbmresearch.org</a> (2024).</li>
<li>Carpentier, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+thermal+therapy%3A+Real-time+MRI-guided+and+computer-controlled+procedures+for+metastatic+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Surg+Med%22%5BJournal%5D)">Laser thermal therapy: Real-time MRI-guided and computer-controlled procedures for metastatic brain tumors.</a> Lasers Surg Med. 43 (10), 943-950 (2011).</li>
<li>Haddad, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+glioblastoma+for+the+evaluation+of+novel+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Mouse models of glioblastoma for the evaluation of novel therapeutic strategies.</a> Neurooncol Adv. 3 (1), vdab100(2021).</li>
<li>Chokshi, C. R., Savage, N., Venugopal, C., Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+patient-derived+xenograft+model+of+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A patient-derived xenograft model of glioblastoma.</a> STAR Protoc. 1 (3), 100179(2020).</li>
<li>Alcaniz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinically+relevant+glioblastoma+patient-derived+xenograft+models+to+guide+drug+development+and+identify+molecular+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Clinically relevant glioblastoma patient-derived xenograft models to guide drug development and identify molecular signatures.</a> Front Oncol. 13, 1129627(2023).</li>
<li>Muir, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+newly+diagnosed+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for newly diagnosed glioblastoma.</a> Lasers Med Sci. 37 (3), 1811-1820 (2022).</li>
<li>Muir, M., Traylor, J. I., Gadot, R., Patel, R., Prabhu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeat+laser+interstitial+thermal+therapy+for+recurrent+primary+and+metastatic+intracranial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Neurol+Int%22%5BJournal%5D)">Repeat laser interstitial thermal therapy for recurrent primary and metastatic intracranial tumors.</a> Surg Neurol Int. 13, 311(2022).</li>
<li>De Groot, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+for+newly+diagnosed+and+recurrent+IDH+wild-type+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Efficacy of laser interstitial thermal therapy (LITT) for newly diagnosed and recurrent IDH wild-type glioblastoma.</a> Neurooncol Adv. 4 (1), vdac040(2022).</li>
<li>Holste, K. G., Orringer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdz035(2020).</li>
<li>Leuthardt, E. C., Voigt, J., Kim, A. H., Sylvester, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-center+cost+analysis+of+treating+primary+and+metastatic+brain+cancers+with+either+brain+laser+interstitial+thermal+therapy+%28LITT%29+or+craniotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacoecon+Open%22%5BJournal%5D)">A single-center cost analysis of treating primary and metastatic brain cancers with either brain laser interstitial thermal therapy (LITT) or craniotomy.</a> Pharmacoecon Open. 1 (1), 53-63 (2017).</li>
<li>Bastos, D. C. D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predictors+of+local+control+of+brain+metastasis+treated+with+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Predictors of local control of brain metastasis treated with laser interstitial thermal therapy.</a> Neurosurgery. 87 (1), 112-122 (2020).</li>
<li>Darbinyan, A., Leelatian, N., Fomchenko, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+changes+associated+with+laser+interstitial+thermal+therapy+for+radiation+necrosis%3A+illustrative+cases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Case+Lessons%22%5BJournal%5D)">Histological changes associated with laser interstitial thermal therapy for radiation necrosis: illustrative cases.</a> J Neurosurg Case Lessons. 4 (1), CASE21373(2022).</li>
<li>Grant, G. A., Porter, B. E., Li, D., Barros Guinle, M. I., Kaur, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach%2C+complications%2C+and+outcomes+for+37+consecutive+pediatric+patients+undergoing+laser+ablation+for+medically+refractory+epilepsy+at+Stanford+Children%27s+Health%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Approach, complications, and outcomes for 37 consecutive pediatric patients undergoing laser ablation for medically refractory epilepsy at Stanford Children's Health.</a> J Neurosurg Pediatr. 33 (1), 1-11 (2023).</li>
<li>Ogasawara, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+interstitial+thermal+therapy+for+cerebral+cavernous+malformations%3A+A+systematic+review+of+indications%2C+safety%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">Laser interstitial thermal therapy for cerebral cavernous malformations: A systematic review of indications, safety, and outcomes.</a> World Neurosurg. 166, 279-287.e1 (2022).</li>
<li>Satzer, D., Mahavadi, A., Lacy, M., Grant, J. E., Warnke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+laser+anterior+capsulotomy+for+obsessive-compulsive+disorder%3A+lesion+size+and+tractography+correlate+with+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Neurosurg+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Interstitial laser anterior capsulotomy for obsessive-compulsive disorder: lesion size and tractography correlate with outcome.</a> J Neurol Neurosurg Psychiatry. 93 (3), 317-323 (2022).</li>
<li>Salehi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+enhancement+of+blood-brain+and+blood-tumor+barriers+permeability+by+laser+interstitial+thermal+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurooncol+Adv%22%5BJournal%5D)">Therapeutic enhancement of blood-brain and blood-tumor barriers permeability by laser interstitial thermal therapy.</a> Neurooncol Adv. 2 (1), vdaa071(2020).</li>
<li>Navarro, K. L., Huss, M., Smith, J. C., Sharp, P., Marx, J. O., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR J. 62 (1-2), 238-273 (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lanças de absorção</td><td>FST</td><td>18105-01</td><td>Esponjas hemostáticas.</td></tr><tr><td>Pinça de tecido Adson</td><td>FST</td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 camundongos</td><td>Jackson Laboratories</td><td>Cepa #000664</td><td>6 a 12 semanas macho e fêmea</td></tr><tr><td>Aplicadores com ponta de algodão (6")</td> <td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72308</td><td></td></tr><tr><td>CT2A linha</td><td></td><td></td> celular de glioma <td>Generosamente doado pelo Dr. Peter Fecci, Duke University.</td></tr><tr><td>Extrato de Membrana Basal com Fator de Crescimento Reduzido Cultrex, PathClear</td><td>Biotechne, R& D systems</td><td>3433-010-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11330032</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de câmara dupla&nbsp;</td><td>BIO-RAD</td><td>1450003</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 2,0 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22363352</td><td></td></tr><tr><td>Álcool Etílico Anidro</td><td>Greenfield Global</td><td>P016EAAN</td><td>Diluir a 70% com ddH2O</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino, qualificado, Canada</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12483020</td><td></td></tr><tr><td>Glad Press-n-Seal filme plástico</td><td>Amazon.ca</td><td></td><td></td>12587704417</tr><tr><td>Broca de alta velocidade</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modelo 1474</td><td></td></tr><tr><td>K & J Medidor de temperatura de termopar</td><td>Omega</td><td>HH509R</td><td></td></tr><tr><td>Metacam (meloxicam)</td> <td>WDDC</td><td>114424</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de seringa de microinjeção</td><td>WPI</td><td>UMP3T-1</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de microlitro (série 700)</td> <td>Hamilton</td><td>87908</td><td>Agulhas personalizadas estão disponíveis. Um chanfro de agulha íngreme ajuda na entrega precisa e um comprimento de agulha mais curto ajuda na estabilidade.</td></tr><tr><td>Chave de agulha/porta-agulha</td><td>FST</td><td>12500-12</td><td>Uma ponta fina é mais adequada devido ao espaço de trabalho confinado, mas muitos estilos são adequados com base na preferência da alça.</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica Opixcare Plus</td><td>WDDC</td><td>135941</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline (10x)</td><td>Fisher biorreagentes</td><td>BP399-4</td><td>Diluir para 1x com ddH2O</td></tr><tr><td>Povidona-iodo</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>3955-16</td><td>Aliquat em tubos menores para uso com aplicadores com ponta de algodão.</td></tr><tr><td>Soro fisiológico (normal)</td> <td>WDDC</td><td>126588</td><td></td></tr><tr><td>bisturi, uso único (# 15 lâmina)</td> <td>Feather</td><td>Feather NO15</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura, tesoura cirúrgica fina</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td>Tesoura de estudante fina, íris ou Bonn são todos adequados.</td></tr><tr><td>Quadro estereotáxico</td><td>Kopf</td><td>Instruments Modelo 940</td><td>Com console de exibição digital e cone de nariz e barras de orelha do mouse.</td></tr><tr><td>Suporte de seringa estereotáxica</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modelo 1772-F</td><td>Se não estiver usando uma bomba injetora.</td></tr><tr><td>Suturas (monofilamento 5-0)</td> <td>Ethicon</td><td>MCP463G</td><td>Monofilamento violeta monocryl com ponta de corte reverso</td></tr><tr><td>Seringa, 28 G&nbsp; (0,5 mL)&nbsp;</td><td>BD</td><td>BD 329461</td><td>BD Lo-Dose U-100 Seringas de Insulina</td></tr><tr><td>TC20 Contador de Células Automatizado</td><td>Sonda de termopar BIO-RAD</td><td>1450102</td><td></td></tr><tr><td>, diâmetro fino (Tipo K)</td><td>Omega</td><td>TJM-CA316-IM025G-150</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%), vermelho de fenol</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond by 3M, cola para tecido veterinário;</td><td>WDDC</td><td>126125</td><td></td></tr><tr><td>Wahl Peanut Clippers</td><td>WDDC / Wahl</td><td>100963</td><td>Também disponível diretamente do fabricante.</td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Bensen Medical</td><td>70308/121873</td><td>Qualquer item semelhante pode ser usado.</td></tr><tr><td>Webcol Alcohol preps</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>71005-20</td><td>Toalhete de preparação de álcool, 2 camadas, tamanho médio.</td></tr></tbody></table>

um modelo murino imunocompetente para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma

An Immunocompetent Murine Model for Laser Interstitial Thermal Therapy of Glioblastoma

O implante bem-sucedido do tumor CT2A e os tratamentos LITT podem ser caracterizados usando ressonância magnética ponderada em T2, conforme mostrado na Figura 4, Figura 5 e Figura 6. As imagens de RM foram obtidas usando um ímã supercondutor livre de criogênio 7T com um diâmetro de 17 cm e bobina de cabeça de camundongo em quadratura usando os parâmetros de sequência descritos no protocolo acima. A adesão cuidadosa a este método deve resultar em taxas de tomada próximas a 100%, localização consistente do tumor e formação tumoral aproximadamente esférica, conforme demonstrado na Figura 4. Essas características fornecem uma base ideal para os tratamentos LITT subsequentes e quaisquer análises posteriores. Da mesma forma, como visto na Figura 5, as ablações LITT também devem ser consistentes em tamanho e localização. O núcleo central do tecido ablacionado será composto de necrose coagulativa e liquefativa e facilmente visualizado como hipointensidade (ou seja, preto) na ressonância magnética ponderada em T2. Nos dias imediatamente após o tratamento LITT, também é típico, dependendo do tratamento LITT realizado, observar uma área hiperintensa (ou seja, branca) dentro e ao redor da lesão, correspondendo a edema perioperatório. A Figura 6 demonstra um resultado ruim e destaca algumas das possíveis armadilhas ao executar este protocolo.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig04.jpg"> 
Figura 4: Imagens coronais de RM ponderadas em T2 da formação ideal do tumor CT2A. Imagens representativas da formação do tumor em três camundongos C57BL/6 (A, B, C) 12 dias após o implante. Setas brancas indicam a borda do tumor. Observe a localização consistente do tumor e a formação aproximadamente esférica. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig05.jpg"> 
Figura 5: Imagens coronais de RM ponderadas em T2 da ablação ideal do LITT (1 dia pós-LITT). Imagens representativas da ablação tumoral LITT em três camundongos C57BL/6 (A, B, C) 13 dias após o implante. Observe o tamanho e a localização consistentes do núcleo da lesão necrótica. A realização de ressonâncias magnéticas pré-LITT e ablações LITT um pouco mais cedo forneceria um melhor equilíbrio entre o tamanho ideal do tumor para o direcionamento do laser e a capacidade de obter desfechos pós-tratamento posteriores. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67381/67381fig06.jpg"> 
Figura 6: Imagens coronais de RM ponderadas em T2 de tratamentos LITT pré-otimizados. Imagens de três camundongos C57BL/6 (A, B, C) tratados com parâmetros de laser e alvos estereotáxicos idênticos antes das otimizações do protocolo, como exemplo de resultado não ideal. Setas brancas indicam a borda do tumor. As áreas limítrofes mostram a região do edema. Observa-se variabilidade significativa, incluindo crescimento tumoral menos uniforme e direcionamento de ablação a laser deficiente, resultando em danos teciduais inconsistentes. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67381/67381fig06large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Um modelo murino imunocompetente para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma

Glioblastoma (GB), the most aggressive form of primary brain cancer, accounts for approximately half of all high-grade primary brain tumors in adults and ...

an-immunocompetent-murine-model-for-laser-interstitial-thermal

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Implantação intracraniana de GL261 células em camundongos C57BL / 6 produz gliomas malignos que recapitulam muitas das características de glioblastoma multiforme humano. Usamos GL261 células expressando estavelmente luciferase para nos permitir...

Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

Nós descrevemos um método integrado para a implantação, precisa estereotáxica de células de glioblastoma multiforme humano no cérebro de camundongos nude e série...

Implantação estereotáxica intracraniana e<em&gt; Em vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent de xenoenxertos de tumores em um Sistema Modelo de Rato Glioblastoma Multiforme

Comece com um modelo de glioblastoma em camundongos, um tumor cerebral invasivo.Na periferia do tumor, a barreira hematoencefálica (BHE) permanece intacta, com células endoteliais formando junções apertadas que regulam a entrada molecular.O mouse é equipado com uma fibra óptica montada na cabeça para fornecer luz laser.Administre um laser infravermelho de baixa intensidade, que penetra na pele e no crânio para atingir o cérebro.O laser excita o oxigênio molecular nas células cerebrais, gerando...

Ruptura da barreira hematoencefálica induzida por laser para entrega de lipossomas em um modelo de glioblastoma em camundongo

Fonte: Clark, A.J., et al. Imagem de bioluminescência de um modelo animal imunocompetente para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens de bioluminescência para rastrear a progressão do glioblastoma em um modelo de camundongo imunocompetente, usando células tumorais que expressam luciferase e luciferina para quantificar o crescimento do tumor de forma não invasiva.

Imagem de bioluminescência de um modelo de camundongo imunocompetente para glioblastoma

Nós estabelecemos um modelo de glioblastoma ortotópico cortical em camundongos para microscopia de dois fótons intravital que recapitula as restrições biofísicas normalmente no jogo durante o crescimento do tumor. Uma janela de vidro crônica substituir o crânio acima do tumor permite o acompanhamento da progressão do tumor ao longo do tempo por meio de microscopia de dois fótons.

Um Glioblastoma Rato modelo ortotópico Manter restrições Cérebro parênquima físicas e Adequado para intravital dois fótons Microscopia

As células de glioma GL261 fornecem um modelo animal imunocompetente útil de glioblastoma. Os objetivos deste protocolo são demonstrar técnicas adequadas para monitorar o crescimento do tumor intracraniano usando imagens de bioluminescência in vivo e verificar a utilidade das células GL261 modificadas com luciferase para estudar a imunologia tumoral e abordagens imunoterapêuticas para o tratamento do glioblastoma.

Bioluminescência imagem de um modelo animal para imunocompetentes Glioblastoma

A microdissecção a laser (LMD) é uma técnica sensível e altamente reprodutível que pode ser usada para descobrir caminhos que mediam a heterogeneidade e invasão do glioma. Aqui, descrevemos um protocolo otimizado para isolar áreas discretas do tecido glioma usando LMD a laser seguido de análise transcritiva.

Microdissecção de Captura a Laser de Sub-regiões de Glioma para Caracterização Espacial e Molecular da Heterogeneidade Intratumoral, Oncostreams e Invasão

Aqui, descrevemos um modelo ortotópico pré-clínico em camundongos para GBM, estabelecido por injeção intracraniana de células derivadas de tumores modelo de camundongos geneticamente modificados. Este modelo exibe as características da doença do GBM humano. Para estudos translacionais, o tumor cerebral de camundongo é rastreado por ressonância magnética in vivo e histopatologia.

Modelos Ortotópicos Translacionais de Glioblastoma Multiforme

Este protocolo apresenta técnicas e metodologia necessárias para terapia hipertérmica direcionada em modelos de tumores sólidos. A abordagem aproveita a conversão fototérmica da luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro injetados intratumoralmente para induzir o aquecimento localizado dentro do microambiente tumoral.

Induzindo hipertermia leve direcionada em modelos de tumores murinos por meio da conversão fototérmica de luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro intratumorais

O objetivo desse protocolo é fornecer aos pesquisadores uma técnica altamente reprodutível para implantações intracranianas.

Implantação intracraniana estereotáxica de linhagens celulares de xenoenxerto derivadas de Glioblastoma em Pacientes

Aprenda a desenvolver modelos murinos imunocompetentes para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma. Este método permite avaliar respostas celulares e teciduais ao tratamento térmico em tumores cerebrais.

Um modelo murino imunocompetente para terapia térmica intersticial a laser de glioblastoma

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