Name: In Ovo Xenoenxerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-LLA) (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-01T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Aprenda a estabelecer xenoenxertos in ovo de células de leucemia linfoblástica aguda derivadas de pacientes. Este método rápido e econômico permite avaliar progressão tumoral e resposta a fármacos em apenas 10 dias.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent.</a> J Natl Cancer Inst. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Dumartin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Netrin-1+mediates+early+events+in+pancreatic+adenocarcinoma+progression%2C+acting+on+tumor+and+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Netrin-1 mediates early events in pancreatic adenocarcinoma progression, acting on tumor and endothelial cells.</a> Gastroenterology. 138 (5), 1595-1606 (2010).</li>
<li>Aguirre-Ghiso, J. A., Estrada, Y., Liu, D., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK+activity+as+a+determinant+of+tumor+growth+and+dormancy%3A+Regulation+by+p38%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">ERK activity as a determinant of tumor growth and dormancy: Regulation by p38.</a> Cancer Res. 63 (7), 1684-1695 (2003).</li>
<li>Baroni, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ribonomic+and+short+hairpin+RNA+gene+silencing+methods+to+explore+functional+gene+programs+associated+with+tumor+growth+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Ribonomic and short hairpin RNA gene silencing methods to explore functional gene programs associated with tumor growth arrest.</a> Methods Mol Biol. 383, 227-244 (2007).</li>
<li>Lopez-Rivera, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+nitric+oxide+synthase+drives+mTOR+pathway+activation+and+proliferation+of+human+melanoma+by+reversible+nitrosylation+of+TSC2%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inducible nitric oxide synthase drives mTOR pathway activation and proliferation of human melanoma by reversible nitrosylation of TSC2.</a> Cancer Res. 74 (4), 1067-1078 (2014).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+short-term+in+vivo+model+for+giant+cell+tumor+of+bone%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">A short-term in vivo model for giant cell tumor of bone.</a> BMC Cancer. 11, 241(2011).</li>
<li>Balke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologic+characterization+of+osteosarcoma+growth+on+the+chick+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Morphologic characterization of osteosarcoma growth on the chick chorioallantoic membrane.</a> BMC Res Notes. 3, 58(2010).</li>
<li>Sys, G. M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+CAM-assay+as+a+xenograft+model+for+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The CAM-assay as a xenograft model for sarcoma.</a> J Vis Exp. (77), e50522(2013).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Chick+Chorioallantoic+Membrane+%28CAM%29+assay+as+an+efficient+xenograft+model+of+hepatocellular+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) assay as an efficient xenograft model of hepatocellular carcinoma.</a> J Vis Exp. (104), e52411(2015).</li>
<li>Pontel, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+lymphoblastic+leukemia+necessitates+GSH-dependent+ferroptosis+defenses+to+overcome+FSP1-epigenetic+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Acute lymphoblastic leukemia necessitates GSH-dependent ferroptosis defenses to overcome FSP1-epigenetic silencing.</a> Redox Biol. 102408, (2022).</li>
<li>Oriol, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+after+relapse+of+acute+lymphoblastic+leukemia+in+adult+patients+included+in+four+consecutive+risk-adapted+trials+by+the+PETHEMA+Study+Group%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Outcome after relapse of acute lymphoblastic leukemia in adult patients included in four consecutive risk-adapted trials by the PETHEMA Study Group.</a> Haematologica. 95 (4), 589-596 (2010).</li>
<li>Xin, Q., Chen, Z., Wei, W., Wu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+acute+lymphoblastic+leukemia%3A+Recapitulating+the+human+disease+to+evaluate+drug+efficacy+and+discover+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of acute lymphoblastic leukemia: Recapitulating the human disease to evaluate drug efficacy and discover therapeutic targets.</a> Biochem Pharmacol. 198, 114970(2022).</li>
<li>Gilmore, M. J., Prentice, H. G., Blacklock, H. A., Janossy, G., Hoffbrand, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+rapid+isolation+of+bone+marrow+mononuclear+cells+using+Ficoll-Metrizoate+and+the+IBM+2991+blood+cell+processor%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">A technique for rapid isolation of bone marrow mononuclear cells using Ficoll-Metrizoate and the IBM 2991 blood cell processor.</a> Br J Haematol. 50 (4), 619-626 (1982).</li>
<li>Boyer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+to+estimate+leukemia+stem+cells+in+primary+acute+myeloid+leukemia+and+in+patient-derived+xenografts%2C+at+diagnosis+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry to estimate leukemia stem cells in primary acute myeloid leukemia and in patient-derived xenografts, at diagnosis and follow-up.</a> J Vis Exp. (133), e56976(2018).</li>
<li>Kang, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+loss-of-function+genetic+screening+identifies+opioid+receptor+mu1+as+a+key+regulator+of+L-asparaginase+resistance+in+pediatric+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Genome-wide loss-of-function genetic screening identifies opioid receptor mu1 as a key regulator of L-asparaginase resistance in pediatric acute lymphoblastic leukemia.</a> Oncogene. 36 (42), 5910-5913 (2017).</li>
<li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HAP1+loss+confers+L-asparaginase+resistance+in+ALL+by+downregulating+the+calpain-1-Bid-caspase-3%2F12+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">HAP1 loss confers L-asparaginase resistance in ALL by downregulating the calpain-1-Bid-caspase-3/12 pathway.</a> Blood. 133 (20), 2222-2232 (2019).</li>
<li>Kalina, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EuroFlow+standardization+of+flow+cytometer+instrument+settings+and+immunophenotyping+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols.</a> Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agulhas de 34 G</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo Attune NxT</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seringa BD Perisafe (32 G)</td><td>BD Perisafe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>Rolamento A9647</td><td></td></tr><tr><td>Meio de congelamento de células</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>12648010</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga (Centrífuga Allegra X-22R)</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luvas descartáveis</td><td>Luvas de Exame de Nitrilo Royal Touch300</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>Leica MZ16FA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de ovos, Incubadora rolante Vevitts 120</td><td>Vixest Trading Co.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Álcool etílico (95%)</td><td>VWR Internacional</td><td>BDH1158-4LP</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Solução Ficoll (Ficoll?? Paque Plus)</td><td>MilliporeSigma</td><td>GE17-1440-02</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo FITC-CD10</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-46656 FITC</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo FITC-CD4</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-19641 FITC</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Fluorescência</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Furadeira manual (Dremel3000)</td><td>Bosch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HEK293T&nbsp;</td><td>ATCC, VA, EUA</td><td>CRL-3216</td><td></td></tr><tr><td>Hemocitômetro</td><td>VWR internacional, Hausser Scientific</td><td>15170-263</td><td></td></tr><tr><td>Sal de heparina sódica da mucosa intestinal suína</td><td>Millipore Sigma</td><td>H3149</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ensaio heparinizados</td><td>BD Vacutainer&nbsp;</td><td>BD 366480</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamina 3000</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>L3000008</td><td></td></tr><tr><td>Kit de titulação de lentivírus multiplex (kit de titulação de lentivírus qPCR)</td><td>Abm</td><td>LV900</td><td></td></tr><tr><td>NH4Cl (chloride_ de amônio</td><td>Millipore Sigma</td><td>A9434</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio invertido Olympus IX71</td><td>Olimpo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo PE-CD19</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>PE sc-19650</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo PE-CD8</td><td>Santa Cruz Biotech</td><td>sc-1177 PE</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina (10.000 U/mL)&nbsp;</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Sigma</td><td>Pág. 3813</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas (volume ajustável)</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puromicina</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>A1113803</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific</td><td>11875093</td><td></td></tr><tr><td>Fita de Celótipo Escocês</td><td>3M</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas estéreis de 6 poços</td><td>VWR internacional, Corning</td><td>22250-140</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga estéreis</td><td>Axygen Inc, Corning</td><td>AXYMCT-150-C-S</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de cultura estéreis (75T)</td><td>VWR Internacional</td><td>10062-872</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Falcon estéreis (15 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Falcon estéreis (50 mL)</td><td>SARSTEDT</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Filtro estéril (0,45 &micro; filtro m)</td><td>VWR Internacional</td><td>76778-974</td><td></td></tr><tr><td>Pinça estéril</td><td>VWR Internacional</td><td>82027-404</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de vidro estéreis</td><td>VWR internacional</td><td>48300-031</td><td></td></tr><tr><td>Ponteiras de pipeta estéreis</td><td>VWR Internacional</td><td>76322-136, 76322-134, 76322-154</td><td></td></tr><tr><td>Seringas estéreis</td><td>Seringa BD</td><td>309628?</td><td></td></tr><tr><td>Azul Trypan</td><td>Invitrogen, ThermoFisher Scientific</td><td>T10282</td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo xenoenxerto de células de leucemia linfoblástica aguda (lla) derivadas de pacientes (pdx-lla)

In Ovo Xenografting of Patient-Derived Acute Lymphoblastic Leukemia (ALL) Cells (PDX-ALL)

Para determinar se o enxerto de células LLA humanas em embriões de galinha em desenvolvimento foi bem-sucedido, lentivírus incompetentes de replicação de2ª geração portadores de mCherry foram amplificados e usados para marcar linhas celulares B- e T-ALL, SEM e MOLT316,17, respectivamente. Conforme mostrado na Figura 1A, ~ 50% das células B- (dois painéis superiores esquerdos) e T- (dois painéis superiores direitos) ALL for...

In Ovo Xenoenxerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-LLA)

This study introduces a rapid, cost-effective, and efficient method for in ovo xenografting of patient-derived acute lymphoblastic leukemia (ALL) cells, ...

in-ovo-xenografting-patient-derived-acute-lymphoblastic-leukemia-all

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este vídeo descreve a técnica para criar um modelo de xenoenxerto derivado de paciente peixe-zebra. No protocolo da amostra, avaliamos a eficiência dos fármacos Gemcitabina e Navitoclax no modelo de xenoenxerto de tumor pancreático.

Xenoenxerto derivado de paciente de peixe-zebra (zPDX): um modelo de câncer

Descreve-se aqui um método para produzir citoquina exógena em ratinhos de xenoenxerto derivados de doentes (PDX) por meio de injecção intraperitoneal semanal de uma linha de células de estroma transduzidas por citoquinas. Este método alarga a utilidade de PDX e proporciona a opção para a libertação transitória ou prolongada de citoquinas exógenas numa multiplicidade de modelos PDX.

Expressão de citocina exógena em xenotransplantes derivados de pacientes via injeção com uma linha de células estromáticas transduzidas por citocinas

Nós esboçamos um protocolo para detectar a expressão simultânea de marcadores de células estaminais de leucemia em células de leucemia mieloide aguda primária por citometria de fluxo. Nós mostramos como quantificar três populações de progenitor e uma população de LSC putativa com crescente grau de maturação. Confirmamos a presença dessas populações no correspondentes paciente-derivada-xenografts.

Fluxo Cytometry para estimar leucemia células-tronco na leucemia mieloide aguda primária e no paciente-derivada-xenografts, diagnóstico e segue até

Aqui, apresentamos um protocolo para a preparação e a administração estereotáxica de linfócitos humanos alogênico em camundongos imunodeficientes carregando humana ortotópico de tumores primários. Este estudo fornece um prova de conceito para a viabilidade e a eficácia antitumoral de imunoterapias celulares intrabrain-entregue.

Estereotáxica transferência adotiva de citotóxicas células imunes em modelos murino de humanos ortotópico Glioblastoma Multiforme Xenografts

Este protocolo descreve procedimentos da optimização em um modelo fluorescência-etiquetado duplo baseado em vírus do xenograft do tumor usando o zebrafish larval como anfitriões. Este modelo heterogêneo do xenograft imita a composição do tecido do microambiente pancreatic do cancro in vivo e sere como uma ferramenta mais precisa para avaliar respostas da droga em modelos personalizados de zPDX (xenograft paciente-derivado de zebrafish).

Modelo de Xenoenxerto heterogêneo derivado do paciente do câncer pancreático usando larvas de zebrafish como hospedeiros para avaliação comparativa de fármacos

Nós descrevemos uma pilha mononucleares do sangue periférico humano (PBMC)-modelo humanizado baseado do rato do xenograft para a pesquisa translacional do immuno-Oncology. Este protocolo poderia servir como diretriz geral para O estabelecimento e caracterização de modelos similares para a avaliação da terapia de I-O.

Uma célula mononuclear do sangue periférico humano (PBMC) engrafted o modelo humanizado do xenograft para a pesquisa translational do immuno-Oncology (I-O)

Aqui apresentamos um protocolo para testar a eficácia de terapias-alvo selecionadas com base na composição genômica de um tumor. O protocolo descreve a identificação e validação de rearranjos estruturais de DNA, o enxerto dos tumores dos pacientes em camundongos e as respostas de teste a medicamentos correspondentes.

Testando terapias-alvo em câncer usando análise estrutural de alteração de DNA e xenoenxertos derivados do paciente

Aqui, descrevemos um protocolo no qual um modelo de xenoenxerto derivado de pacientes com leucemia linfoblástica aguda é usado como estratégia para avaliar e monitorar as toxicidades associadas ao receptor de antígeno quimérico CD19-alvo.

Avaliação das Toxicidades Associadas às Células T do Receptor de Antígeno Quimérico Usando um Modelo de Xenoenxerto de Camundongo Derivado de Pacientes com Leucemia Linfoblástica Aguda

Este protocolo fornece instruções passo a passo para gerar e solucionar problemas de xenoenxertos de leucemia linfoblástica aguda humana (LLA) de linhagens celulares e material fresco do paciente em embriões de peixe-zebra imunossuprimidos transitoriamente, juntamente com diretrizes para avaliação de resposta a medicamentos usando citometria de fluxo. O pipeline experimental também pode ser adaptado para tumores sólidos.

Predição rápida de resposta a medicamentos in vivo usando enxertos de células de leucemia em embriões de peixe-zebra

Este protocolo descreve um método eficiente e não cirúrgico para a implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama em camundongos. A técnica envolve a dissociação enzimática do tumor seguida de injeção direta nas bolsas de gordura mamária, permitindo a implantação de alto rendimento. A validação abrangente garante a fidelidade do modelo, facilitando estudos rigorosos em vários subtipos de câncer de mama.

Dissociação de alto rendimento e implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama

Aqui, um método baseado em citometria de fosfofluxo é descrito para analisar a sinalização a jusante das vias mTORC1, JAK/STAT5 e MAPK em células de leucemia mielóide humana aguda xenoenxertadas em camundongos e obtidas de aspirados de medula óssea. Os níveis de p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 e p-ERK1/2 são medidos simultaneamente usando um citômetro de fluxo espectral de última geração com alta sensibilidade.

Citometria de fosfofluxo intracelular de xenotransplantes derivados de pacientes com leucemia mielóide aguda

Aprenda a estabelecer xenoenxertos in ovo de células de leucemia linfoblástica aguda derivadas de pacientes. Este método rápido e econômico permite avaliar progressão tumoral e resposta a fármacos em apenas 10 dias.

In Ovo Xenoenxerto de células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) derivadas de pacientes (PDX-LLA)

Explorar mais vídeos