Name: Imagem Espectroscópica de Super-resolução de Moléculas de DNA usando Contraste Intrínseco (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-06T13:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Aprenda a realizar imagem espectroscópica de super-resolução de moléculas de DNA sem marcadores, utilizando a fluorescência intrínseca do DNA. Este método preserva as propriedades nativas moleculares e evita artefatos causados por rotulagem externa.

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<ol><li>Ellis, R. J., Minton, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Join+the+crowd%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Join the crowd.</a> Nature. 425 (6953), 27-28 (2003).</li>
<li>Hell, S. W., Wichmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+the+diffraction+resolution+limit+by+stimulated+emission%3A+stimulated+emission-depletion+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Breaking the diffraction resolution limit by stimulated emission: stimulated emission-depletion fluorescence microscopy.</a> Opt Lett. 19 (11), 780(1994).</li>
<li>Rust, M. J., Bates, M., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sub-diffraction-limit+imaging+by+stochastic+optical+reconstruction+microscopy+%28STORM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Sub-diffraction-limit imaging by stochastic optical reconstruction microscopy (STORM).</a> Nat Methods. 3 (10), 793-796 (2006).</li>
<li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li>
<li>Gustafsson, M. G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonlinear+structured-illumination+microscopy%3A+wide-field+fluorescence+imaging+with+theoretically+unlimited+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Nonlinear structured-illumination microscopy: wide-field fluorescence imaging with theoretically unlimited resolution.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (37), 13081-13086 (2005).</li>
<li>Hell, S. W., Kroug, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ground-state-depletion+fluorescence+microscopy%3A+a+concept+for+breaking+the+diffraction+resolution+limit%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+B%22%5BJournal%5D)">Ground-state-depletion fluorescence microscopy: a concept for breaking the diffraction resolution limit.</a> Appl Phys B. 60 (5), 495-497 (1995).</li>
<li>Fölling, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+nanoscopy+by+ground-state+depletion+and+single-molecule+return%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorescence nanoscopy by ground-state depletion and single-molecule return.</a> Nat Methods. 5 (11), 943-945 (2008).</li>
<li>Ricci, M., Manzo, C., García-Parajo, M. F., Lakadamyali, M., Cosma, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromatin+fibers+are+formed+by+heterogeneous+groups+of+nucleosomes+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Chromatin fibers are formed by heterogeneous groups of nucleosomes in vivo.</a> Cell. 160 (6), 1145-1158 (2015).</li>
<li>Bintu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+chromatin+tracing+reveals+domains+and+cooperative+interactions+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Super-resolution chromatin tracing reveals domains and cooperative interactions in single cells.</a> Science. 362 (6413), eaau1783(2018).</li>
<li>Matsuda, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Condensed+mitotic+chromosome+structure+at+nanometer+resolution+using+PALM+and+EGFP-histones%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Condensed mitotic chromosome structure at nanometer resolution using PALM and EGFP-histones.</a> PLoS One. 5 (9), e12768(2010).</li>
<li>Bohn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+microscopy+reveals+expression-dependent+parameters+of+chromatin+nanostructure%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Localization microscopy reveals expression-dependent parameters of chromatin nanostructure.</a> Biophys J. 99 (5), 1358-1367 (2010).</li>
<li>Acosta, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-color+single-molecule+localization+microscopy+in+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Light+Sci+Appl%22%5BJournal%5D)">Three-color single-molecule localization microscopy in chromatin.</a> Light Sci Appl. 14, 7(2025).</li>
<li>Almassalha, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+imaging+of+the+native%2C+living+cellular+nanoarchitecture+using+partial-wave+spectroscopic+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Label-free imaging of the native, living cellular nanoarchitecture using partial-wave spectroscopic microscopy.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (42), E6372-E6381 (2016).</li>
<li>Beerman, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+analogs+of+the+DNA+minor+groove+binder+Hoechst+33258+on+topoisomerase+II+and+I+mediated+activities%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Effects of analogs of the DNA minor groove binder Hoechst 33258 on topoisomerase II and I mediated activities.</a> Biochim Biophys Acta. 1131 (1), 53-61 (1992).</li>
<li>Cadet, J., Anselmino, C., Douki, T., Voituriez, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+trends+in+photobiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Photochem+Photobiol+B%22%5BJournal%5D)">New trends in photobiology.</a> J Photochem Photobiol B. 15 (4), 277-298 (1992).</li>
<li>Dong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superresolution+intrinsic+fluorescence+imaging+of+chromatin+utilizing+native%2C+unmodified+nucleic+acids+for+contrast%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Superresolution intrinsic fluorescence imaging of chromatin utilizing native, unmodified nucleic acids for contrast.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (35), 9716-9721 (2016).</li>
<li>Vayá, I., Gustavsson, T., Miannay, F., Douki, T., Markovitsi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+of+natural+DNA%3A+from+the+femtosecond+to+the+nanosecond+time+scales%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Fluorescence of natural DNA: from the femtosecond to the nanosecond time scales.</a> J Am Chem Soc. 132 (34), 11834-11835 (2010).</li>
<li>Anders, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+fluorescence+at+room+temperature+excited+by+means+of+a+dye+laser%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Phys+Lett%22%5BJournal%5D)">DNA fluorescence at room temperature excited by means of a dye laser.</a> Chem Phys Lett. 81 (2), 270-272 (1981).</li>
<li>Plessow, R., Brockhinke, A., Eimer, W., Kohse-Höinghaus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+time-+and+wavelength-resolved+fluorescence+of+oligonucleotides%3A+a+systematic+investigation+using+a+novel+picosecond+laser+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Intrinsic time- and wavelength-resolved fluorescence of oligonucleotides: a systematic investigation using a novel picosecond laser approach.</a> J Phys Chem B. 104 (15), 3695-3704 (2000).</li>
<li>Takaya, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UV+excitation+of+single+DNA+and+RNA+strands+produces+high+yields+of+exciplex+states+between+two+stacked+bases%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">UV excitation of single DNA and RNA strands produces high yields of exciplex states between two stacked bases.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (30), 10285-10290 (2008).</li>
<li>Bancaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fractal+model+for+nuclear+organization%3A+current+evidence+and+biological+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A fractal model for nuclear organization: current evidence and biological implications.</a> Nucleic Acids Res. 40 (18), 8783-8792 (2012).</li>
<li>Daban, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+concentration+of+DNA+in+condensed+chromatin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">High concentration of DNA in condensed chromatin.</a> Biochem Cell Biol. 81 (3), 91-99 (2003).</li>
<li>Bohrmann, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concentration+evaluation+of+chromatin+in+unstained+resin-embedded+sections+by+means+of+low-dose+ratio-contrast+imaging+in+STEM%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Concentration evaluation of chromatin in unstained resin-embedded sections by means of low-dose ratio-contrast imaging in STEM.</a> Ultramicroscopy. 49 (1-4), 235-251 (1993).</li>
<li>Dong, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochastic+fluorescence+switching+of+nucleic+acids+under+visible+light+illumination%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Stochastic fluorescence switching of nucleic acids under visible light illumination.</a> Opt Express. 25 (7), 7929-7944 (2017).</li>
<li>Gong, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+spectroscopic+intrinsic-contrast+photon-localization+optical+nanoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+SPIE%22%5BJournal%5D)">DNA spectroscopic intrinsic-contrast photon-localization optical nanoscopy.</a> Proc SPIE. 13326, 133260F(2025).</li>
<li>Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Label-free+DNA+spectroscopic+photon-localization+nanoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optica+Biophotonic+Congress%22%5BJournal%5D)">Label-free DNA spectroscopic photon-localization nanoscopy.</a> Optica Biophotonic Congress. , (2025).</li>
<li>Eshein, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sub-10-nm+imaging+of+nucleic+acids+using+spectroscopic+intrinsic-contrast+photon-localization+optical+nanoscopy+%28SICLON%29%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Sub-10-nm imaging of nucleic acids using spectroscopic intrinsic-contrast photon-localization optical nanoscopy (SICLON).</a> Opt Lett. 43 (23), 5817-5820 (2018).</li>
<li>Song, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolithic+dual-wedge+prism-based+spectroscopic+single-molecule+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanophotonics%22%5BJournal%5D)">Monolithic dual-wedge prism-based spectroscopic single-molecule localization microscopy.</a> Nanophotonics. 11 (8), 1527-1535 (2022).</li>
<li>Song, K. H., Sun, C., Zhang, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+strategy+for+a+dual-wedge+prism+imaging+spectrometer+in+spectroscopic+nanoscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Sci+Instrum%22%5BJournal%5D)">Design strategy for a dual-wedge prism imaging spectrometer in spectroscopic nanoscopy.</a> Rev Sci Instrum. 94 (2), 023702(2023).</li>
<li>Yeo, W. H., Sun, C., Zhang, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physically+informed+Monte+Carlo+simulation+of+dual-wedge+prism-based+spectroscopic+single-molecule+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Physically informed Monte Carlo simulation of dual-wedge prism-based spectroscopic single-molecule localization microscopy.</a> J Biomed Opt. 29 (S1), S11501(2023).</li>
<li>Davis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RainbowSTORM%3A+an+open-source+ImageJ+plug-in+for+spectroscopic+single-molecule+localization+microscopy+%28sSMLM%29+data+analysis+and+image+reconstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">RainbowSTORM: an open-source ImageJ plug-in for spectroscopic single-molecule localization microscopy (sSMLM) data analysis and image reconstruction.</a> Bioinformatics. 36 (19), 4972-4974 (2020).</li>
<li>Davis, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+JL+%22RainbowSTORM+v2+%28MATLAB+app%29%22">RainbowSTORM v2 (MATLAB app)</a>. , https://github.com/FOIL-NU/sSMLM-protocol (2020).</li>
<li>Brenner, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implementation+and+calibration+of+spectroscopic+single-molecule+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Methods%22%5BJournal%5D)">Implementation and calibration of spectroscopic single-molecule localization microscopy.</a> BMC Methods. 2 (1), 2(2025).</li>
<li>sSMLM for DNA intrinsic fluorescence (Python scripts). , Backman Lab. 
 <a target="_blank" href="https://github.com/BackmanLab/sSMLM-for-DNA-intrinsic-fluorescence">https://github.com/BackmanLab/sSMLM-for-DNA-intrinsic-fluorescence</a> (2025).</li>
<li>N-STORM protocol. , Molecular Vista. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.mvi-inc.com/wp-content/uploads/N-STORM+Protocol.pdf">https://www.mvi-inc.com/wp-content/uploads/N-STORM+Protocol.pdf</a> (2014).</li>
<li>Abdelsayed, V., Boukhatem, H., Olivier, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+buffer+for+repeatable+multicolor+STORM%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Photonics%22%5BJournal%5D)">An optimized buffer for repeatable multicolor STORM.</a> ACS Photonics. 9 (12), 3926-3934 (2022).</li>
<li>Zumbusch, A., Holtom, G. R., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+vibrational+imaging+by+coherent+anti-Stokes+Raman+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Rev+Lett%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional vibrational imaging by coherent anti-Stokes Raman scattering.</a> Phys Rev Lett. 82 (20), 4142(1999).</li>
<li>Benninger, R. K. P., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two%E2%80%90photon+excitation+microscopy+for+the+study+of+living+cells+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Two‐photon excitation microscopy for the study of living cells and tissues.</a> Curr Protoc Cell Biol. 59 (1), 4-11 (2013).</li>
<li>Zhang, C., Zhang, D., Cheng, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coherent+Raman+scattering+microscopy+in+biology+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Coherent Raman scattering microscopy in biology and medicine.</a> Ann Rev Biomed Eng. 17 (1), 415-445 (2015).</li>
<li>Song, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SNR+enhanced+high-speed+two-photon+microscopy+using+a+pulse+picker+and+time+gating+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">SNR enhanced high-speed two-photon microscopy using a pulse picker and time gating detection.</a> Sci Rep. 13 (1), 14244(2023).</li>
<li>Luu, P., Fraser, S. E., Schneider, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((More+than+double+the+fun+with+two-photon+excitation+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Comm+Biol%22%5BJournal%5D)">More than double the fun with two-photon excitation microscopy.</a> Comm Biol. 7 (1), 364(2024).</li>
<li>Van de Linde, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+stochastic+optical+reconstruction+microscopy+with+standard+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Direct stochastic optical reconstruction microscopy with standard fluorescent probes.</a> Nat Protoc. 6 (7), 991-1009 (2011).</li>
<li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+progress+on+the+luminescence+of+biomacromolecules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mater+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Research progress on the luminescence of biomacromolecules.</a> J Mater Sci Technol. 76, 60-75 (2021).</li>
<li>Varejão, N., Reverter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+intrinsic+fluorescence+to+measure+protein+stability+upon+thermal+and+chemical+denaturation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Using intrinsic fluorescence to measure protein stability upon thermal and chemical denaturation.</a> Methods Mol Biol. 2581, 229-241 (2023).</li>
<li>Sindrewicz, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+tryptophan+fluorescence+spectroscopy+reliably+determines+galectin-ligand+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Intrinsic tryptophan fluorescence spectroscopy reliably determines galectin-ligand interactions.</a> Sci Rep. 9 (1), 11851(2019).</li>
<li>Ho, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+identification+of+pathogenic+bacteria+using+Raman+spectroscopy+and+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Rapid identification of pathogenic bacteria using Raman spectroscopy and deep learning.</a> Nat Commun. 10 (1), 4927(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Filtro de emissão de 488 nm para imagem</td><td>Chroma Technology Corp.</td><td>ET525/50M</td><td></td></tr><tr><td>Filtro passa-banda de 532 nm para calibração</td><td>Thorlabs</td><td>FL532-3</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de emissão de 532 nm para imagem</td><td>Chroma Technology Corp.</td><td>ET620/60M</td><td></td></tr><tr><td>Filtro passa-banda de 580 nm para calibração</td><td>Thorlabs</td><td>FB580-10</td><td></td></tr><tr><td>Filtro passa-banda de 633 nm para calibração</td><td>Thorlabs</td><td>FL632.8-3</td><td></td></tr><tr><td>Filtro passa-banda de 680 nm para calibração</td><td>Thorlabs</td><td>FB680-10</td><td></td></tr><tr><td>Filtro passa-banda de 750 nm para calibração</td><td>Thorlabs</td><td>FB750-10</td><td></td></tr><tr><td>Beta-mercaptoetanol & nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M6250</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de imagem BME</td><td>NA</td><td>NA</td><td>7 & mu; L GLOX, 7 e mu; L Beta-mercaptoetanol e 690 & mu; Buffer de glicose L</td></tr><tr><td>Catalase do fígado bovino</td><td>Sigma</td><td>C100</td><td></td></tr><tr><td>DABCO (1,4-di-azobiciclo-(2.2.2.)-octane)</td><td>Sigma</td><td>D27802</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de imagem DABCO</td><td>NA</td><td>NA</td><td>65 mM DABCO+30 mM Sulfito de sódio + 30 mM DTT 1 M&nbsp; no DNAse, água deionizada livre de RNAse. O sulfito de sódio deve ser dissolvido em PBS 10 vezes; até 1 M antes de criar o buffer de imagem.</td></tr><tr><td>Deplex de DNA para SMLM espectroscópico</td><td>IDT</td><td>NA</td><td>20 pares de bases com fita dupla GC_alter, GC_conti, AT_alter e AT_conti. Por exemplo, GC_alter tem ambos os fios com 5' - GCGCGCGCGCGCGCGCGCGCGCGC - 3'; GC_conti tem um fio de 5' - GGGGGGGGGGGGGGGGGGGG - 3' e o outro como 5' - CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC - 3' Todas as amostras estão no padrão HPLC.</td></tr><tr><td>DNA oligonucleótido/DNA de fita dupla</td><td>IDT</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Oligos de DNA para SMLM espectroscópico</td><td>IDT</td><td>NA</td><td>20-base A, G, C, T; corrente alternada de 40 bases de fio simples (A1C1, A5C5, A10C10, A20C20); &nbsp; Guanina monocatenária de 5, 8, 12, 16 base. Por exemplo, A10C10 é 5'- AAAAAAAAAACCCC CCCCCAAAAAAAAAA AACCCCCCCCCCCC - 3' Todas as amostras estão no padrão HPLC.</td></tr><tr><td>Água Destilada Livre de DNase/RNase</td><td>Invitrogen</td><td>10977015</td><td></td></tr><tr><td>DTT (DL-Ditiotreitol)</td><td>Sigma</td><td>43816</td><td></td></tr><tr><td>GLOX</td><td>NA</td><td>NA</td><td>14 mg de glicose oxidase, 50 e mu; L catalase (17 mg/ml) + 200 e mu; Tampão L A, que é 10 mM Tris (pH 8,0) e 50 mM NaCl.&nbsp;</td></tr><tr><td>Buffer de glicose</td><td>NA</td><td>NA</td><td>50 mM Tris (pH 8,0), 50 mM de NaCl e 10% de glicose.</td></tr><tr><td>Glucose oxidase</td><td>sigma</td><td>G7141</td><td></td></tr><tr><td>Glicose, pó</td><td>Thermo Fisher</td><td>15023021</td><td></td></tr><tr><td>PBS (10X)</td><td>Thermo Fisher</td><td>J62036. K3</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1X)</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Thermo Fisher</td><td>424290010</td><td></td></tr><tr><td>Sulfito de sódio &nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S0505</td><td></td></tr><tr><td>Tris (1M) pH 8,0</td><td>Invitrogen</td><td>AM9856</td><td></td></tr></tbody></table>

imagem espectroscópica de super-resolução de moléculas de dna usando contraste intrínseco

Spectroscopic Super-resolution Imaging of DNA Molecules using Intrinsic Contrast

Imagem Espectroscópica de Super-resolução de Moléculas de DNA usando Contraste Intrínseco

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Filamentos intermediários e microtúbulos com microscopia 2-dimensional direta estocástico reconstrução óptico de imagem

Uma instrução detalhada é descrita em como construir um altamente inclinado varrido telha (HIST) microscópio e seu uso para a imagem latente de único-molécula.

Um guia para construir um altamente inclinado varreu o microscópio de telha para a imagem latente de único-molécula campo de visão alargado

O DNA 3D multicolor FISH representa uma ferramenta para visualizar loci múltiplogenômico dentro de núcleos preservados em 3D, definindo inequivocamente suas interações recíprocas e localização dentro do espaço nuclear em um único nível celular. Aqui, um protocolo passo a passo é descrito para um amplo espectro de células primárias humanas.

Ferramenta de peixe de DNA Multicolor 3D para estudar arquitetura nuclear em células primárias humanas

O presente protocolo descreve um método que mede as densidades absolutas de DNA dentro de núcleos de células aderentes usando tesselação de Voronoi de dados de microscopia de localização de molécula única, volume conhecido, tamanho do genoma e estágio do ciclo celular.

Mapeando a densidade absoluta de DNA em núcleos celulares usando microscopia de localização de molécula única

Este protocolo demonstra a realização de um ensaio de molécula única para visualização ao vivo do desenrolamento do DNA por CMG helicase. Ele descreve (1) a preparação de um substrato de DNA, (2) a purificação de Drosophila melanogaster CMG helicase marcada com fluorescência, (3) a preparação de uma célula de fluxo microfluídico para microscopia de fluorescência de reflexão interna total (TIRF) e (4) o ensaio de desenrolamento de DNA de molécula única.

Visualização em tempo real de molécula única do desenrolamento do DNA por CMG helicase

Este protocolo descreve o procedimento para realizar microscopia de localização profunda de molécula única (SMLM) em célula inteira usando um microscópio confocal de disco giratório com reatribuição óptica de fótons, permitindo assim a imagem DNA-PAINT sem a necessidade de óptica personalizada ou iluminação complexa.

Imagem de Superresolução de Célula Inteira via DNA-PAINT em um disco confocal giratório com reatribuição óptica de fótons

"E-DNA" sensores, reagentless, biossensores eletroquímicos que um bom desempenho, mesmo quando desafiados diretamente no sangue e outras matrizes complexas, foram adaptados para a detecção de uma ampla gama de ácido nucléico, proteínas e moléculas pequenas analitos. Aqui apresentamos um procedimento geral para a fabricação e uso de tais sensores.

Fabricação de Eletroquímica-DNA Biossensores para Detecção Reagentless de ácidos nucléicos, proteínas e pequenas moléculas

Aprenda a realizar imagem espectroscópica de super-resolução de moléculas de DNA sem marcadores, utilizando a fluorescência intrínseca do DNA. Este método preserva as propriedades nativas moleculares e evita artefatos causados por rotulagem externa.

Imagem Espectroscópica de Super-resolução de Moléculas de DNA usando Contraste Intrínseco

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