ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Poss, K. D., Wilson, L. G., Keating, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Heart regeneration in zebrafish.</a> Science (1979). 298 (5601), 2188-2190 (2002).</li>
<li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li>
<li>Kikuchi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+contribution+to+zebrafish+heart+regeneration+by+gata4%2B+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Primary contribution to zebrafish heart regeneration by gata4+ cardiomyocytes.</a> Nature. 464 (7288), 601-605 (2010).</li>
<li>Bertozzi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+zebrafish+heart+regeneration+%22complete%22%3F+Lineage-restricted+cardiomyocytes+proliferate+to+pre-injury+numbers+but+some+fail+to+differentiate+in+fibrotic+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Is zebrafish heart regeneration "complete"? Lineage-restricted cardiomyocytes proliferate to pre-injury numbers but some fail to differentiate in fibrotic hearts.</a> Dev Biol. 471, 106-118 (2021).</li>
<li>Nguyen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+calcium+and+sarcomeres+directs+cardiomyocyte+maturation+during+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Interplay between calcium and sarcomeres directs cardiomyocyte maturation during regeneration.</a> Science (1979). 380 (6646), 758-764 (2023).</li>
<li>Fukuda, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+glycolysis+promotes+cardiomyocyte+proliferation+after+injury+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Stimulation of glycolysis promotes cardiomyocyte proliferation after injury in adult zebrafish.</a> EMBO Rep. 21 (8), e49752(2020).</li>
<li>Honkoop, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+uncovers+that+metabolic+reprogramming+by+ErbB2+signaling+is+essential+for+cardiomyocyte+proliferation+in+the+regenerating+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis uncovers that metabolic reprogramming by ErbB2 signaling is essential for cardiomyocyte proliferation in the regenerating heart.</a> Elife. 8, e50163(2019).</li>
<li>Lekkos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+phosphorylation+is+required+for+cardiomyocyte+redifferentiation+and+long-term+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Oxidative phosphorylation is required for cardiomyocyte redifferentiation and long-term fish heart regeneration.</a> Nat Cardiovasc Res. 4 (10), 1363-1380 (2025).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Langendorff-like+system+to+quantify+cardiac+pump+function+in+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">A Langendorff-like system to quantify cardiac pump function in adult zebrafish.</a> Dis Model Mech. 11 (9), dmm034819(2018).</li>
<li>Zhang, P. C., Llach, A., Sheng, X. Y., Hove-Madsen, L., Tibbits, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+handling+in+zebrafish+ventricular+myocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium handling in zebrafish ventricular myocytes.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 300, 56-66 (2011).</li>
<li>Lin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+use+of+a+zebrafish+heart+voltage+and+calcium+optical+mapping+system%2C+with+integrated+electrocardiogram+and+programmable+electrical+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Regul+Integr+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Construction and use of a zebrafish heart voltage and calcium optical mapping system, with integrated electrocardiogram and programmable electrical stimulation.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 308, R755-R768 (2015).</li>
<li>Miklas, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+acid+primed+mTOR+activity+is+essential+for+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Amino acid primed mTOR activity is essential for heart regeneration.</a> iScience. 25 (1), 103574(2022).</li>
<li>García-Poyatos, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cox7a1+controls+skeletal+muscle+physiology+and+heart+regeneration+through+complex+IV+dimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Cox7a1 controls skeletal muscle physiology and heart regeneration through complex IV dimerization.</a> Dev Cell. 59 (14), 1824-1841.e10 (2024).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22How+Agilent+Seahorse+XF+Analyzers+Work%22">How Agilent Seahorse XF Analyzers Work</a>. , Agilent. https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/how-seahorse
-xf-analyzers-work?srsltid=AfmBOopkIZodH4uZO
5puXTOp1U5gdkky661L6TKluz5XgBWGqujHEzww (2026).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol Cells. 47 (8), 100095(2024).</li>
<li>Chablais, F., Jaźwińska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myocardial+infarction+in+adult+zebrafish+using+cryoinjury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction of myocardial infarction in adult zebrafish using cryoinjury.</a> J Vis Exp. (62), e3666(2012).</li>
<li>González-Rosa, J. M., Mercader, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoinjury+as+a+myocardial+infarction+model+for+the+study+of+cardiac+regeneration+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Cryoinjury as a myocardial infarction model for the study of cardiac regeneration in the zebrafish.</a> Nat Protoc. 7 (4), 782-788 (2012).</li>
<li>Schnabel, K., Wu, C. C., Kurth, T., Weidinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+cryoinjury+induced+necrotic+heart+lesions+in+zebrafish+is+associated+with+epicardial+activation+and+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Regeneration of cryoinjury induced necrotic heart lesions in zebrafish is associated with epicardial activation and cardiomyocyte proliferation.</a> PLoS One. 6 (4), e18503(2011).</li>
<li>Aleström, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+Housing+and+husbandry+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: Housing and husbandry recommendations.</a> Lab Anim. 54 (3), 213-224 (2019).</li>
<li>Singleman, C., Holtzman, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+dissection+in+larval%2C+juvenile+and+adult+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Heart dissection in larval, juvenile and adult zebrafish, Danio rerio.</a> J Vis Exp. (55), e3165(2011).</li>
<li>Duan, X., Liu, X., Zhan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+regulation+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Metabolic regulation of cardiac regeneration.</a> Front Cardiovasc Med. 9, 933060(2022).</li>
<li>Yu, F., Cong, S., Yap, E. P., Hausenloy, D. J., Ramachandra, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+interplay+between+cardiac+metabolism+and+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Unravelling the interplay between cardiac metabolism and heart regeneration.</a> Int J Mol Sci. 24 (12), 10300(2023).</li>
<li>Cook, M., Lal, S., Hume, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional%2C+proteomic+and+metabolic+drivers+of+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Transcriptional, proteomic and metabolic drivers of cardiac regeneration.</a> Heart. 111 (18), 851-858 (2025).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming%3A+A+byproduct+or+a+driver+of+cardiomyocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming: A byproduct or a driver of cardiomyocyte proliferation.</a> Circulation. 149 (20), 1598-1610 (2024).</li>
<li>Bond, S. T., McEwen, K. A., Yoganantharajah, P., Gibert, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos+using+a+seahorse+XF+24+extracellular+flux+analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Live metabolic profile analysis of zebrafish embryos using a seahorse XF 24 extracellular flux analyzer.</a> Methods Mol Biol. 1797, 393-401 (2018).</li>
<li>Gibert, Y., McGee, S. L., Ward, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profile+analysis+of+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Metabolic profile analysis of zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. (71), e4300(2013).</li>
<li>Trampel, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seahorse+metabolic+analysis+for+human+and+mouse+cardiac+organotypic+slices%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Seahorse metabolic analysis for human and mouse cardiac organotypic slices.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Ruggiero, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+balanced+circadian+glycolytic+rhythm+drives+cardiomyocyte+cell+cycle+progression+during+fish+heart+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A balanced circadian glycolytic rhythm drives cardiomyocyte cell cycle progression during fish heart regeneration.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
<li>Lee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+cardiac+responses+of+adult+zebrafish+%28Danio+rerio%29+to+acute+and+chronic+temperature+change+using+high-resolution+echocardiography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of cardiac responses of adult zebrafish (Danio rerio) to acute and chronic temperature change using high-resolution echocardiography.</a> PLoS One. 11 (1), e0145163(2016).</li>
<li>Shaftoe, J. B., Geddes-McAlister, J., Gillis, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+cellular+response+of+the+zebrafish+%28Danio+rerio%29+heart+to+temperature+change%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated cellular response of the zebrafish (Danio rerio) heart to temperature change.</a> J Exp Biol. 227 (20), jeb247522(2024).</li>
<li>Ryan, R., Moyse, B. R., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+cardiac+regeneration%E2%80%94looking+beyond+cardiomyocytes+to+a+complex+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish cardiac regeneration—looking beyond cardiomyocytes to a complex microenvironment.</a> Histochem Cell Biol. 154 (5), 533-548 (2020).</li>
<li>Angelini, A., Pi, X., Xie, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+long-chain+fatty+acid+respiration+in+neonatal+mouse+cardiomyocytes+using+SeaHorse+instrument%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Evaluation of long-chain fatty acid respiration in neonatal mouse cardiomyocytes using SeaHorse instrument.</a> STAR Protoc. 3 (2), 101392(2022).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., Meerlo, M., Burgering, B. M. T., Rodríguez Colman, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+profile+the+bioenergetics+of+organoids+using+Seahorse%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to profile the bioenergetics of organoids using Seahorse.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100386(2021).</li>
<li>Neary, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+controls+postnatal+changes+in+cardiac+mitochondrial+morphology+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling controls postnatal changes in cardiac mitochondrial morphology and function.</a> J Mol Cell Cardiol. 74 (100), 340-352 (2014).</li>
<li>Cheng, Y. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+changes+associated+with+cardiomyocyte+dedifferentiation+enable+adult+mammalian+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Metabolic changes associated with cardiomyocyte dedifferentiation enable adult mammalian cardiac regeneration.</a> Circulation. 146 (25), 1950-1967 (2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+fatty+acid+oxidation+enables+heart+regeneration+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inhibition of fatty acid oxidation enables heart regeneration in adult mice.</a> Nature. 622 (7983), 619-626 (2023).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Goncalves, R. L. S., Gerencser, A. A., Nicholls, D. G., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contributions+of+respiration+and+glycolysis+to+extracellular+acid+production%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">The contributions of respiration and glycolysis to extracellular acid production.</a> Biochim Biophys Acta. 1847 (2), 171-181 (2015).</li>
<li>Mookerjee, S. A., Brand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+and+analysis+of+extracellular+acid+production+to+determine+glycolytic+rate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement and analysis of extracellular acid production to determine glycolytic rate.</a> J Vis Exp. (106), e53464(2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5ml tubos Eppendorf &nbsp;</td><td>Starlab</td><td>S1615-5550</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 96 poços &nbsp;</td><td>ThermoFisher</td><td>AB-0800</td><td></td></tr><tr><td>Antimicina A</td><td>ChemCruz & nbsp;</td><td>SC-202467A</td><td></td></tr><tr><td>Meio DMEM</td><td>Agilent</td><td>1035755-100</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>D2650-100mL</td><td></td></tr><tr><td>Gelo seco&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Supelco</td><td>1.00983.2500</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Ensaio de Fluxo Extracelular &nbsp;</td><td>Agilent</td><td>103518-100</td><td>O pacote contém placa utilitária, hidrobooster, cartucho sensor, tampa (vem com as placas do ilhéu)</td></tr><tr><td>FCCP</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Agilent</td><td>103577-100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microplacas de captura de ilhotas</td><td>Agilent</td><td>101122-100</td><td>25 grades incluídas no pacote</td></tr><tr><td>Ferramenta de captura de tela de ilhéu</td><td>Agilent</td><td>101135-100</td><td></td></tr><tr><td>Pinças de microdissecação</td><td>ideal-tek</td><td>3131760</td><td>Tamanho 5-S (serão necessários 2x para isolar o ventrículo do bulbo arterioso e do átrio)</td></tr><tr><td>Tesouras de microdissecação</td><td>FST</td><td>15009-08</td><td></td></tr><tr><td>MS-222</td><td>Sigma-Aldrich&nbsp;</td><td>E10521</td><td></td></tr><tr><td>Oligomicina</td><td>MP&nbsp;</td><td>151786</td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador de mottor de pilão&nbsp;</td><td>VWR</td><td>431-0100</td><td></td></tr><tr><td>Pilões</td><td>VWR</td><td>431-0094</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri 35mm</td><td>Greiner Bio-One</td><td>627102</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri 92mm</td><td>Starstedt</td><td>82.1473</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Ensaio BCA Pierce</td><td>Termo Científica</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Comprimidos Mini Inibidores de Protease e Fosfatase Pierce, Livres de EDTA</td><td>Termo Científica</td><td>A32961</td><td></td></tr><tr><td>Piruvato</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de lise RIPA</td><td>Santa Crus</td><td>SC-364162</td><td></td></tr><tr><td>Rotenone</td><td>MP&nbsp;</td><td>02150154-CF</td><td></td></tr><tr><td>Interface Agilent da Seahorse Analytics</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485</td><td></td></tr><tr><td>Analisador Seahorse XFe24</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-analyzers/seahorse-xfe24-analyzer-740878</td><td></td></tr><tr><td>Selante</td><td>Termo Científica</td><td>AB-0558</td><td></td></tr><tr><td>SPECTROstar Nano</td><td>MG LABTECH GmbH</td><td>601-0298</td><td></td></tr><tr><td>Sponge</td><td></td><td></td><td>Faça uma incisão longa e profunda o suficiente para encaixar o lado ventral do peixe para cima</td></tr><tr><td>Wave (versão 2.6.1.56)</td><td>Agilent</td><td>https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/software-download-for-wave-desktop</td><td></td></tr><tr><td>Calibrante XF &nbsp;</td><td>Agilent</td><td>100840-000</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação da atividade metabólica dos ventrículos inteiros regeneradores de peixe-zebra ex vivo usando um ensaio de fluxo extracelular

Assessing the Metabolic Activity of Whole Regenerating Zebrafish Ventricles Ex Vivo Using an Extracellular Flux Assay

Avaliação da atividade metabólica dos ventrículos inteiros regeneradores de peixe-zebra ex vivo usando um ensaio de fluxo extracelular

The ability of zebrafish to regenerate their hearts throughout adulthood is partially attributed to metabolic adaptations. Although it has been ...

O ensaio com seahorse permite a avaliação de alto rendimento do metabolismo em ventrículos de peixe-zebra intactos ex vivo. Este método pode ser utilizado para validar perturbações genéticas em genes metabólicos e caracterizar alterações no metabolismo durante a regeneração. Ligue o sistema e prepare todas as soluções de fármacos e meios antes de iniciar o experimento.Na página Definições de Grupo do software WAVE, na guia Estratégias de Injeção, atribua oligomicina à Porta A, o carbamil cianeto 4-trifluorometóxi fenil-hidrazona, ou FCCP, à Porta B, e a mistura de rotenona e antimicina à Porta C a partir do catálogo de compostos. Exclua quaisquer estratégias de injeção preexistentes assim que a estratégia experimental for definida. Em seguida, no painel Grupos, defina os grupos experimentais e atribua a estratégia de injeção correspondente.Na página Mapa da Placa, selecione as posições das amostras na placa de 24 poços clicando em cada grupo e nos poços correspondentes, deixando quatro poços em branco. Na página Protocolo, remova as guias de controle ou experimentais desnecessárias e associe as atribuições de portas do software às posições das drogas na cartela. Defina 10 ciclos para a linha de base, três ciclos para oligomicina, sete ciclos para FCCP e nove ciclos para a mistura de rotenona e antimicina-A.Certifique-se de que cada ciclo consista em três minutos de mistura, dois minutos de espera e três minutos de medição. Remova o cartucho e a placa de utilidade do incubador umidificado que foi preparado na noite anterior. Em seguida, remova o hidroimpulsionador e a tampa do cartucho e coloque o cartucho sensor na placa de utilidade contendo o calibrante.Pipete suavemente os inibidores em suas respectivas portas ao longo da parede lateral, evitando toques. No software, selecione Executar Ensaio. Nomeie a execução e clique em Iniciar Execução.Salve a execução com um nome de arquivo e carregue o ensaio. Assim que a bandeja do analisador abrir, posicione o cartucho carregado com os fármacos e a placa de utilidade contendo o calibrador de acordo com o mapa da placa na bandeja. Pressione Executar Ensaio para iniciar o ensaio.Após cobrir a microplaca de captura com ilhós contendo corações isolados com uma grade, confirme se todas as cavidades foram calibradas com sucesso mediante a marca verde no software. Em seguida, clique em Abrir Bandeja para ejetar a placa de utilidade. Sem a tampa, posicione a microplaca de ilhós no analisador com o poço A1 no canto superior esquerdo e clique em Carregar Placa Celular para iniciar o experimento.Após a conclusão do experimento, clique em Ejetar para remover a placa de olhinhos e o cartucho. Remova a placa de olhinhos e o cartucho ejetados do analisador e feche o cartucho com a tampa. Armazene a placa de olhinhos em gelo seco.Em seguida, clique em Concluído para fechar a bandeja. Por fim, clique em Visualizar Resultados para visualizar os dados. Salve e exporte as medições do computador do analisador.Carregue os dados na interface de análise e selecione o gráfico da taxa de consumo de oxigênio ou OCR nas Visualizações Padrão. Visualize o OCR e a taxa de acidificação extracelular, ou nível de ECAR, e corrija o fundo utilizando poços vazios. Selecione Poços no mapa da placa para exibir ou ocultar os dados.Após quantificar os níveis de proteína, normalize as medidas de TCO e TAE para garantir comparação confiável entre as amostras. Ventrículos selvagens não lesionados, sem tratamento com fármaco, demonstraram taxa estável de consumo de oxigênio e taxa de acidificação extracelular, indicando função respiratória normal dos ventrículos e sobrevivência em ambiente ex vivo. Um leve aumento na taxa de consumo de oxigênio foi observado com oligomicina 10 micromolar, FCCP 8 micromolar e rotenona e antimicina 25 micromolar.Um aumento ligeiramente maior foi observado com 50 micromolar de oligomicina, 30 micromolar de FCCP e 45 micromolar de rotenona e antimicina. Após a permeabilização, a taxa de consumo de oxigênio mostrou uma redução sustentada e não aumentou após a injeção de FCCP, indicando falha metabólica dos ventrículos permeabilizados. O tratamento com oligomicina não altera significativamente a taxa de consumo de oxigênio.O FCCP aumentou a taxa de consumo de oxigênio e a taxa de acidificação extracelular, com os ventrículos superexpressando a desidrogenase do malato citosólico 1 AB demonstrando a maior capacidade respiratória máxima em comparação com os ventrículos controle. Utilizando este protocolo, o consumo de oxigênio e a taxa de acidificação extracelular dos corações de peixe-zebra podem ser medidos ex vivo. Os dados de ECAR refletem não apenas o lactato derivado da glicólise, mas também o dióxido de carbono proveniente da respiração, ambos influenciando a acidificação extracelular.

assessing-metabolic-activity-whole-regenerating-zebrafish-ventricles

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Zebrafish representam um modelo de vertebrados poderosa que tem sido sub-utilizado para estudos metabólicos. Aqui descrevemos uma forma rápida para medir...

Análise do Perfil Metabólico de embriões Zebrafish

O uso de peixe-zebra para pesquisas cardiovasculares está se expandindo para pesquisas em corações adultos. Para essas aplicações, o isolamento rápido e simples dos tecidos cardíacos é fundamental para evitar alterações post-mortem e obter um número adequado de amostras. Aqui, descrevemos um método rápido e reprodutível para dissecar corações de peixe-zebra adultos.

Recuperação de Zebrafish Adulto Corações para aplicações de alto rendimento

O peixe-zebra é um importante organismo modelo para o estudo da homeostase energética.  Ao utilizar um indicador redox sensível ao NADH2, alamar Blue, desenvolvemos um ensaio que mede a taxa metabólica de larvas de peixe-zebra em um formato de placa de 96 poços e pode ser aplicado à descoberta de medicamentos ou genes.

High Throughput<em&gt; Danio rerio</em&gt; Energia Despesas Assay

Aqui, apresentamos um protocolo para visualizar desenvolvendo corações no zebrafish em 4 dimensões (4D). Imagem 4-D, através de microscopia de fluorescência de luz-folha (LSFM), tem 3-Dimensional (3D) de imagens ao longo do tempo, para reconstruir corações em desenvolvimento. Nós mostramos qualitativa e quantitativamente que a tensão de cisalhamento ativa endocárdico entalhe sinalização durante o desenvolvimento da câmara, que promove trabeculação cardíaca.

Microscopia de fluorescência de luz-folha para capturar imagens 4-Dimensional dos efeitos de modulação de tensão de cisalhamento sobre o coração em desenvolvimento de Zebrafish

Esta técnica descreve a gravação em tempo real do consumo de oxigênio e taxas de acidificação do extracelular nos tecidos da retina explantados rato, usando um analisador de fluxo extracelular.

Medição do metabolismo energético, no tecido da retina explantado, usando análise de fluxo extracelular

Descrevemos um protocolo para avaliar a morfologia cardíaca e a função em zebrafish adultos usando ecocardiografia de alta frequência. O método permite a visualização do coração e posterior quantificação de parâmetros funcionais, como freqüência cardíaca (HR), saída cardíaca (CO), mudança de área fracionada (FAC), fração de ejeção (EF), e velocidades de fluxo e fluxo sanguíneo.

Ecocardiografia de ultrassom de alta frequência para avaliar a função cardíaca de zebrafish

Este protocolo utiliza imagens de lâminas de luz para investigar a função contrátil cardíaca em larvas de peixe-zebra e obter informações sobre mecânica cardíaca por meio de rastreamento celular e análise interativa.

Imagem de folha de luz 4D da contração cardíaca do peixe-zebra

Este protocolo descreve um método de microscopia de luz de baixo custo para avaliar a morfologia e função cardíaca em embriões de peixe-zebra, permitindo a avaliação reprodutível da cardiotoxicidade do desenvolvimento sem a necessidade de sistemas avançados de imagem.

Imagem cardíaca funcional em embriões de peixe-zebra usando microscopia padrão e análise de vídeo: aplicações em pesquisa ambiental e biomédica

Os métodos apresentados fornecem instruções passo a passo para a realização de uma coleção de ensaios respirométricos baseados em microplacas usando mitocôndrias isoladas de quantidades mínimas de músculo esquelético de camundongo. Esses ensaios são capazes de medir mudanças/adaptações mecanicistas no consumo de oxigênio mitocondrial em um modelo animal comumente usado.

Usando mitocôndrias isoladas de quantidades mínimas de Rato Músculo Esquelético para alta taxa de transferência de microplacas respiratórias Medições

A cultura de gotículas verticais ex vivo é uma alternativa às técnicas experimentais atuais in vitro e in vivo. Este protocolo é fácil de executar e requer quantidades menores de reagente, ao mesmo tempo em que permite a capacidade de manipular e estudar a vascularização, morfogênese e organogênese fetal.

Usando<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Culturas Vertical Gota de toda fetais Órgãos para estudar processos de desenvolvimento durante Rato Organogenesis

University of Oxford.  Neste artigo, descrevemos um protocolo detalhado para quantificar a taxa de consumo de oxigênio e a taxa de acidificação extracelular dos ventrículos adultos ex vivo de peixe-zebra, a fim de caracterizar sua capacidade metabólica oxidativa e glicolítica.

Avaliação da atividade metabólica dos ventrículos inteiros regeneradores de peixe-zebra ex vivo usando um ensaio de fluxo extracelular

Explorar mais vídeos