Name: In Vitro Análise Funcional de Células T Reguladoras: Foco na Proliferação e Diferenciação (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Aprenda a analisar células T reguladoras in vitro focando na proliferação e diferenciação de células T efetoras usando citometria de fluxo. Este método permite estudar a supressão mediada por Treg em doenças autoimunes.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>200 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>50 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer&nbsp;</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>para aquisição de dados citometria de fluxo de amostras de células imunológicas</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>para isolamento de linfócitos primários e subconjuntos de células T</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>para isolamento de linfócitos primários e subconjuntos de células T</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>software para análise de dados de citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>para classificação celular</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Compensation Beads&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-2222-42</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>Zombie Yellow Fixable Viability Kit</td><td>BioLegend</td><td>423104</td><td>ou equivalente</td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>ou equivalente</td></tr></tbody></table>

in vitro análise funcional de células t reguladoras: foco na proliferação e diferenciação

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

No experimento representativo, células T ingênuas foram usadas como células Tresp para investigar os efeitos das células enriquecidas com Treg na proliferação e diferenciação das células Th1 e Th17. Neste experimento, células Tresp foram ativadas por células CD3 anti-camundongo e células não CD4+ enriquecidas com APC, e depois diferenciadas em células Th1 sob indução de IL-12 p70 ou em células Th17 sob indução de TGF-β1 e IL-6. Sob essas duas condições de indução, mudanças na proliferação e diferenciação das c...

In Vitro Análise Funcional de Células T Reguladoras: Foco na Proliferação e Diferenciação

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Nós descrevemos um método para a geração de células T de memória, regulamentar e ingénuos a partir de um único dador de sangue humano. Tregs polarizada pode ser então comparada com outros subconjuntos de uma variedade de aplicações genéticas e funcionais com homogeneidade genética, incluindo um ensaio de supressão também detalhados aqui.

Geração de Células T reguladoras induzidas a partir de células T humanas primárias Naïve e Memória

Geração de linfócitos T de tronco pluripotentes induzidas (iPS) células dá uma abordagem alternativa de utilização de células-tronco embrionárias para T imunoterapia baseada em células. O método mostra que, utilizando...

Diferenciação de células Dirigido tronco pluripotentes induzidas no sentido de Linfócitos T

As células T reguladoras CD4+ são potentes imunomoduladores e desempenham funções importantes na homeostase imunológica. A escassez dessas células no sangue periférico torna os estudos funcionais desafiadores, especificamente no contexto da infecção pelo HIV-1. Descrevemos aqui um método para isolar e expandir Tregs CD4+ funcionais do sangue periférico de indivíduos infectados pelo HIV-1.

Novas ferramentas para expandir as células T reguladoras de indivíduos HIV-1-infected

Adenoviral de transferência do gene em células T CD4 naive com a expressão transgénica do receptor de adenovirus Coxsackie possibilita a análise molecular da diferenciação de células T...

Transdução de adenovírus Naive CD4 células T para estudar a diferenciação Treg

As células T CD4+ virgens polarizam para vários subconjuntos, dependendo do ambiente no momento da ativação.  A diferenciação de células T CD4+ virgens em vários subconjuntos efetores pode ser alcançada in vitro através da adição de estímulos de receptores de células T e sinais específicos de citocinas.

Rato Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento de células T e<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciação em subpopulações de células T

Aqui, descrevemos um protocolo para analisar o fenótipo de células T reguladoras (Treg) isoladas de camundongos infectados pelo vírus da coriomeningite linfocítica ingênua e crônica. Além disso, fornecemos um processo para avaliar a atividade supressora das células Treg.

Fenotípica e análise funcional de células reguladoras T ativadas isolados de ratinhos infectados com o vírus da coriomeningite linfocítica crônica

Este protocolo descreve a geração reprodutível e fenotipagem de células T reguladoras humanas induzida (iTregs) a partir de células naive T CD4 + in vitro. Diferentes protocolos de indução de FOXP3 permitem o estudo de fenótipos específicos iTreg obtidos com os respectivos protocolos.

Na diferenciação in vitro de células T CD4 + humano FOXP3 + Induzida T reguladoras (iTregs) a partir de células naive T CD4 + usando um protocolo de TGF-β contendo

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir a tolerância em transplante e avaliar in vitro e em vivo a capacidade supressora de subconjuntos distintos celular do destinatário e o status imune do destinatário para doador ou antígenos exógenos.

In Vitro e In Vivo de avaliação da atividade supressiva, T, B e células mieloides e respostas Humoral de pacientes transplantados

Este artigo descreve um método novo para gerar emigrantes Thymic de pilha-derivado induzido antígeno-específico do tumor (iTE) por um sistema Thymic tridimensional da cultura (3D). iTE é um subconjunto homogêneo de células T intimamente relacionadas com células T ingênuas com a capacidade de proliferação, formação de memória e supressão tumoral.

Um sistema tridimensional da cultura Thymic para gerar os Emigrants Thymic antígeno-específicos induzidos pilha-derivados do tumor derivado murine

Aqui descrevemos um método robusto de determinar a identidade e a pureza das células imunes através de assinaturas epigenéticas detectadas usando PCR quantitativo (qPCR). A demetilação do DNA em um lócus específico serve como um identificador exclusivo para um determinado tipo de célula e permite a identificação de células CD8+, regulatóriaou ou Th17 T.

Determinação da identidade celular imune e pureza usando PCR quantitativo baseado em epigenética

Aprenda a analisar células T reguladoras in vitro focando na proliferação e diferenciação de células T efetoras usando citometria de fluxo. Este método permite estudar a supressão mediada por Treg em doenças autoimunes.

In Vitro Análise Funcional de Células T Reguladoras: Foco na Proliferação e Diferenciação

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