В этом видео-статье мы представляем шаг за шагом демонстрацию о том, как собирать и cryopreserve хомяка ооциты с высоким после оттепели выживаемости. Аналогичная процедура может быть применен и к успешно замораживания и оттаивания эмбрионов мыши на разных этапах предимплантационной развития.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Сбор и Криоконсервация ооцитов хомяка и мыши Эмбрионы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Эмбрионы и ооцитов были впервые успешно криоконсервированных более 30 лет назад, когда Уиттингем
Протокол
Ухода за животными и процедуры были проведены в соответствии с руководящими принципами и положениями, утвержденными Комитетом по этике на человека и животных Исследование Universitat Автономного Барселоны, Испания.
И. ооцитов коллекции
- Проверить и выбрать женский хомяков (Mesocricetus рыбки; 8-12 недели назад) Золотой сирийской напряжение на наличие толстого выделения из влагалища (постовуляторной разряд).
- Вызвать выбранных самок superovulate путем внутрибрюшинного введения 40 МЕ PMSG (Беременные Маре Сыворотка гонадотропин), затем 40 МЕ ХГЧ (хорионический гонадотропин человека) 60 часов спустя.
- Эвтаназии же....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
С помощью этого протокола хомяка ооцитов и эмбрионов мыши могут быть успешно криоконсервированных. Как только замороженные, ооциты / эмбрионы могут храниться в жидком азоте танки на неопределенный срок и восстановления в любое время или место лучшего. Это дает преимущество, что образцы почти готова к использованию, когда это необходимо. С другой стороны, этот протокол также может быть использован для создания эмбриона криобанков из ценных линий мышей (например, трансгенные линии), а экономические и безопасной альтернативой для поддержания ж.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была поддержана испанский Ministerio де Educación у Ciencia (BIO 2006-11792) и Женералитата Каталонии (2005-SGR00437). Авторы хотели бы поблагодарить Марка Puigcerver и Джонатан Лукас за техническую помощь в подготовке информации. Все сотрудники Servei d'Estabulari признается для содержания животных, и особенно Хуан Хосе Мартин и Хавьера Бенито для их дополнительного взноса на запись часть этого видео. НЦБ является членом португальской Fundação пункт Ciencia электронной Tecnologia и SG является членом испанской Ministerio де Educación у Ciencia.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Название материала | Тип | Компания | Номер по каталогу | Комментарий |
| Мини-соломинки французского типа 0.25 ml | Mini-tub | 13407/0010 | ||
| hCG | Farma-Lepori, Spain | 749036.4 | ||
| Гиалуронидаза | Sigma | H-3884 | ||
| Среда KSOM-H | Ref. [11] | |||
| Жидкий азот | Air Liquide | |||
| Пластиковые пробки | Mini-tub | 19046 | ||
| PMSG | Intervet, Spain | 1.614/8447 | ||
| Пропиленгликоль | Fluka | 82280 | ||
| Сахароза | Merck | 107687 | ||
| Хирургические ножницы | Aesculap | BC-060R; BG-061R | ||
| Термозапаиватель | SIZ | 220 | ||
| Чашки для культивирования 35 и 90 mm | Nunc | 153066; 150350 | ||
| Пробирки 10 ml | Greiner Bio-one | 163160 | ||
| Азотный резервуар | MVE, Cryogenics | XC 43/28 | ||
| Программируемый морозильник | Planner Products Ltd. | Kryo-10 Series III | ||
| Пинцеты | Aesculap | BD-331R; BD-053R; OC-020R |
Ссылки
- Whittingham, D. G., Leibo, S. P., Mazur, P. Survival of mouse embryos frozen to -196 and -269 °C. Science. 178, 411-414 (1972).
- Wilmut, I. The effect of cooling rate, warming rate, cryoprotective agent and stage of develo....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
