Методическая статья

Мышей почечная Процедура трансплантации

30.2K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/1150

⸱

10 июля 2009 г.

 ,  ,  , 
1Department of Surgery, The Ohio State University, 2Integrated Biomedical Sciences Graduate Program, The Ohio State University

В этой статье

Краткое содержание

Трансплантации почки у мышей является технически сложной процедурой, которая требует тщательного послеоперационного ухода и лечения для достижения успеха.

Аннотация

Почечная ортотопической трансплантации у мышей является технически сложной процедурой. Хотя первая пересадка почки у мышей были выполнены Рассел и др. Более 30 лет назад (1) и уточнена Чжан и др. лет спустя (2), мало кто в мире освоили данную процедуру. В нашей лаборатории мы успешно выступили 1200 ортотопической трансплантации почки с> 90% выживаемости. Ключевые моменты для успеха включают строгий контроль реперфузионного повреждения, кровотечением и тромбозом, как во время процедуры и после трансплантации, а также использование вместо 10-0 11-0 шва для анастомозов.

Послеоперационный уход и лечение получателя является чрезвычайно важным, чтобы пересадить успеха и оценки. Все реципиентов почечного трансплантата получают антибиотики в виде инъекций пенициллина сразу после трансплантации и sulfatrim в питьевой воде постоянно. Общее состояние животного оценивается ежедневно и весь анализ креатинина крови проводится регулярно с портативными I-СТАТ машины для оценки трансплантата функции.

Протокол

Доноров органов урожая (2):

  1. Обезболить доноров использованием 65mg/kg пентобарбитал ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
  2. Сделать средней линии разрез от грудины до лобка, чтобы войти в донора живот и выставить левую почку путем перемещения кишечника сбоку от правой стороны.
  3. Изолировать левой почки путем лигирования и деления надпочечников и яичек судов 8-0 шелковые нити.
  4. Мобилизация аорты выше ее слияния с почечной артерии и вены.
  5. Мобилизация нижней полой вены (НПВ) выше и ниже ее слияния с почечной артерии и вены.
  6. Лигировать аорты ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковых шва, чтобы минимизировать кровотечение.
  7. Рассеките левого мочеточника от почечной воротах в мочевой пузырь.
  8. Expose ureterovesical узел использованием каудально опровержение на мочевой пузырь куполом.
  9. Акцизный небольшой, эллиптические участок мочевого пузыря содержащие левой ureterovesical соединения, используемые для реконструкции мочевого пузыря с помощью к мочевого пузыря анастомоза. Правого мочеточника не входит в мочевой пузырь.
  10. Лигировать IVC ниже почечных артерий и вен с 8-0 шелковые нити.
  11. Лигировать аорту выше почечной артерии и вены, и медленно заливать трансплантата на месте с 0.2-0,4 мл холодной, гепаринизированной лактата раствор Рингера через инфраренального аорты.
  12. Лигировать IVC выше почечной артерии и вены с 8-0 шелковые нити.
  13. Трансекта почечной вены на ее слияния с IVC.
  14. Разделите аорты наклонно, около 2 мм ниже почечных артерий.
  15. Удаление почки и его кровоснабжения с мочеточника придается пузыря патч целиком. Хранить в лактата раствор Рингера на льду.
  16. Эвтаназии доноров мыши цервикальным сдвигом под наркозом.

Получатель трансплантации (2):

  1. Обезболить получателя с 65 мг / кг фенобарбитала IP и поддерживать наркозом изофлюрана (2-3%).
  2. Сделать средней линии разрез, накрыть кишечника с мокрой марли и тщательно убирать с левой стороны.
  3. Лигировать правого мочеточника, почечная артерия и вена, и удалить правую почку.
  4. Тщательно изолировать и кросс-зажим инфраренального аорты и IVC с двумя 4-мм microvasular зажимы после лигирования поясничной ветви.
  5. Место 10-0 нейлона шов через всю толщину аорты и отказаться сделать эллиптической aortaotomy одним разрезом (примерно одну пятую диаметра сосуда).
  6. Сделайте продольные венотомия, прокалывая IVC с 30 иглы и расширить надлежащим использованием microscissors.
  7. Промывать оба аорты и IVC с гепарином солевой очистить внутрипросветный крови или сгустков.
  8. Удалить донорской почки от льда и поместите его внутри-абдоминально в правый фланг мыши. Донорской почки остается влажным холодным солевым пропитанной марлевым тампоном.
  9. Поместите два швов пребывания в проксимальных и дистальных вершине получателей aortaotomy с манжетой аорты доноров.
  10. Сделать из конца в сторону анастомоза между манжетой доноров аорты и передней стенки aortaotomy получателей, используя 2 ~ 3 непрерывного 10-0 нейлоновые нити во внешнем аорты.
  11. Включите трансплантата донорской почки на левый фланг получателя. повторить предыдущую процедуру между манжетой доноров аорты и задней стенки aortaotomy получателей
  12. Выполните конца в сторону анастомоза между донором почечной вены и задней стенки получателей IVC, используя 4 до 5 непрерывного 10-0 нейлоновые швы с внутренней IVC. , а затем передняя стенка IVC и доноров почечной вены закрыты 4 ~ 5 непрерывного швов снаружи IVC.
  13. Анастомоз как вены и артерии должен быть завершен в течение 20 минут.
  14. Промыть трансплантата с холодным солевым несколько раз в течение анастомоза.
  15. Разделите купол получателя мочевого пузыря, и остановить кровотечение с прижиганием.
  16. Сделайте небольшой надрез на купол.
  17. Поместите два пребывания швов 10-0 нейлона для anastomize доноров небольшой участок мочевого пузыря с купола мочевого пузыря получателей. Каждая сторона анастомоза зашивается с 8 ~ 10 непрерывной швов.
  18. Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 стерильные, синтетические рассасывающиеся Викрил шва.
  19. Дайте получателя мышей 0,4 мл теплой солевой во время операции по прерывистой внутривенного введения.

Послеоперационный уход за Получатель

  1. После закрытия брюшной полости, однократной внутримышечной инъекции пенициллина (500U/10g) вводят (2).
  2. Кроме того, получатели получают 0,05 мг / кг внутримышечно бупренорфина на 0 день и 1-й день после операции боль. После операции реципиентов получать воду, содержащую sulfatrim (100mg/kg), пока эксперимент тэrminated.
  3. За первые 24 часа после операции мышей находятся в контролируемой температурой инкубатора.
  4. Мыши обычно выздоравливают от наркоза в течение 1 часа работы и даны обычную пищу и воду без ограничений объявление.
  5. Кожа Швы снимают через 2 недели после операции.

Получатель Нефрэктомия

  1. Обезболить получателя 4 ~ 7 дней после трансплантации почки с 65 мг / кг фенобарбитала ИС; анестезия поддерживается изофлюрана (2-3%).
  2. Открытый живот через срединный разрез.
  3. Обложка кишечника с солевым пропитанной марли и тщательно убирать с правой стороны.
  4. Удалить левой почки после лигирования левого мочеточника, вены почек и сердца.
  5. Закрыть живота в два слоя с непрерывной 4-0 синтетические рассасывающиеся Викрил шва.

Всего Измерения креатинина крови

  1. Еженедельно в две недели для сбора крови менее 0,2 см производится либо submandibularly без анестезии и ретро-орбитально под изофлюрана анестезии.
  2. Количественные целом уровень креатинина крови определяются с помощью I-Stat Портативный Клинические Analyzer (Heska корпорации, Форт-Коллинз, CO).
  3. Условных единицах (мг / дл) превращаются в единицы СИ в мкмоль / л путем умножения условных единиц на 88,4.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Мы провели около 1200 случаев трансплантации почки у мышей с технической скоростью успеха> 90%. По сравнению с пересадке сердца, вероятность успеха трансплантации почки, как правило, низка. Тем не менее, наша лаборатория сохраняет высокий уровень успеха (> 90%) трансплантации почки. Ключевые моменты для достижения успеха являются снижение реперфузия травмы обеих почек доноров и получателей, и свести к минимуму кровотечение и тромбоз в течение всей процедуры, и после операции. Следующие факторы могут быть наиболее ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Эксперименты на животных были проведены в соответствии с руководящими принципами и правилами установленными Университета штата Огайо IACUC.

Благодарности

Эти исследования были частично поддержана финансирование NIH R01 AI36532 в Гах. Мы хотели бы отметить отличную поддержку в пересадке патологии при условии, доктор Тибор Nadasdy и бесценным руководством и дальновидность предоставляемые покойный д-р Чарльз Г. Орос в инициировании этого исследования усилий.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
i-STATПрочееHESKACat 5101
Картридж i-STATПрочееHESKACAT 5110-CREA
СульфатримПрочееActavisR02109
ИзофлуранПрочееNOVAPLUSCA-0474
Шовный материал 10-0ХирургияSharpointAK0100

Ссылки

  1. Russell, P. S., Chase, C. M., Colvin, R. B., Plate, J. M. D. Kidney transplants in mice. An analysis of the immune status of mice bearing long-term, H-2 incompatible transplants. JExpMed. 147, 1449-1468 (1978).
  2. Zhang, Z., Schlachta, C., Duff, J., Stiller, C., Grant, D., Zhong, R. Improved techniques for kidney transplantation in mice. Microsurgery. 16 (2), 103-109 (1995).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

i STAT

Похожие статьи