Хронологический старения у дрожжей относится к потере жизнеспособности клеток, связанных со временем в стационарной фазе. Здесь мы опишем высокой пропускной метод количественного определения дрожжей хронологическом продолжительность жизни.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Количественная Дрожжи Хронологический продолжительность жизни на вырост возрасте клетки
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Почкующихся дрожжей
Протокол
Часть 1: Подготовка старения культур
- Подряд штаммов интерес из замороженных запасов на YEPD пластин агар (1% дрожжевой экстракт, 2% Бакто-пептон, 2% агара, 2% глюкозы).
- Инкубируйте клетки при 30 ˚ С в течение 48 часов или до отдельных колоний появится.
- Выберите одну колоний и переливая ее 5 мл YEPD жидкой среде (1% дрожжевой экстракт, 2% Бакто-пептон, 2% глюкозы) в пробирках.
- Рост культур течение ночи при 30 ˚ С, сохраняя при этом постоянную агитацию, используя либо шейкер или каток.
- Привить 5 мл синтетического полного (SC) среды (табл. 1) с 50 мкл ночной культуры. Вообще три SC культуры готовятся для каждого штамма ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Высокой пропускной хронологический срок службы анализа, описанного здесь, является эффективным методом для количественного старения потенциал большого числа штаммов с высокой точностью и точностью. Первичного продвижения этого метода по сравнению с классическими методами для определения выживания путем подсчета колониеобразующих единиц (см., например, 3) является использование устройств чтения шейкер / инкубатор / пластины, такие как машины Bioscreen C MBR для получения высокого разрешения кривые роста каждой.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была поддержана NIH Грант 1R21AG031965-01A1. МК Эллисон Медицинский фонд Новый ученый в процессе старения.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Бакто-пептон | Реагент | BD Biosciences | 211677 | |
| Бакто-дрожжевой экстракт | Реагент | BD Biosciences | 288620 | |
| Агар Difco | Реагент | BD Biosciences | 214530 | |
| Азотистая основа для дрожжей без аминокислот и сульфата аммония | Реагент | MidSci | J630-500G | |
| Аминокислоты | Реагент | Sigma-Aldrich | ||
| Сульфат аммония | Реагент | Spectrum | AM185 | |
| Декстроза | Реагент | Fisher Scientific | D16-10 | |
| Анализатор Bioscreen C MBR | Оборудование | Growth Curves USA | 5101370 | |
| 100-луночный планшет-сота Bioscreen | Оборудование | Growth Curves USA | 9502550 |
Ссылки
- Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
- Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
- Fabrizio, P., Longo, V. D.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
