Method Article

Количественная Дрожжи Хронологический продолжительность жизни на вырост возрасте клетки

DOI:

10.3791/1156

⸱

May 6th, 2009

 , 
1Department of Pathology, University of Washington

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Хронологический старения у дрожжей относится к потере жизнеспособности клеток, связанных со временем в стационарной фазе. Здесь мы опишем высокой пропускной метод количественного определения дрожжей хронологическом продолжительность жизни.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Почкующихся дрожжей

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Часть 1: Подготовка старения культур

  1. Подряд штаммов интерес из замороженных запасов на YEPD пластин агар (1% дрожжевой экстракт, 2% Бакто-пептон, 2% агара, 2% глюкозы).
  2. Инкубируйте клетки при 30 ˚ С в течение 48 часов или до отдельных колоний появится.
  3. Выберите одну колоний и переливая ее 5 мл YEPD жидкой среде (1% дрожжевой экстракт, 2% Бакто-пептон, 2% глюкозы) в пробирках.
  4. Рост культур течение ночи при 30 ˚ С, сохраняя при этом постоянную агитацию, используя либо шейкер или каток.
  5. Привить 5 мл синтетического полного (SC) среды (табл. 1) с 50 мкл ночной культуры. Вообще три SC культуры готовятся для каждого штамма ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Высокой пропускной хронологический срок службы анализа, описанного здесь, является эффективным методом для количественного старения потенциал большого числа штаммов с высокой точностью и точностью. Первичного продвижения этого метода по сравнению с классическими методами для определения выживания путем подсчета колониеобразующих единиц (см., например, 3) является использование устройств чтения шейкер / инкубатор / пластины, такие как машины Bioscreen C MBR для получения высокого разрешения кривые роста каждой.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана NIH Грант 1R21AG031965-01A1. МК Эллисон Медицинский фонд Новый ученый в процессе старения.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Реактив Bacto PeptoneBD Biosciences211677
Реактивдрожжей BactoBD Biosciences288620
Реактив агара DifcoBD Biosciences214530
Азотистая база дрожжей без A.A. и A.S.РеактивMidSciJ630-500G
АминокислотыРеагентСигма-Олдрич
Реагент Сульфат аммонияСпектрAM185
Реактив ДекстрозаFisher ScientificD16-10
Bioscreen C MBR КривыестанкаСША 5101370
Bioscreen 100- скважина Сотовая пластинаИнструментКривые роста США9502550
экстракта роста

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Steinkraus, K. A., Kaeberlein, M., Kennedy, B. K. Replicative aging in yeast: the means to the end. Annu Rev Cell Dev Biol. 24, 29(2008).
  2. Kaeberlein, M. Handbook of models for human aging. Conn, P. M. , Elsevier Press. Boston. 109(2006).
  3. Fabrizio, P., Longo, V. D.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Chronological Life SpanYeast AgingBioscreen CMBRGrowth Curve AnalysisOutgrowth AssaySynthetic Complete MediumRoller Drum IncubationOptical Density MeasurementDoubling Time CalculationSurvival Curve Generation

Related Articles