Авторам нечего раскрывать.

Фактор Роста покрытием из бисера Размещение на Спинной эксплантов переднего мозга

Это видео демонстрирует два способа приготовления и укладки бусы, которые были покрыты фактора роста, на эксплантатов развивающихся коры головного мозга. Эти шарики могут быть использованы, чтобы вызвать пространственно ограниченных экспрессии генов на развитие нервной ткани, такие как передний мозг эксплантов. Методы даны для использования как Affi-Gel бисером и гепарин acryllic бисером.

Итак, это первый тип бусин, который я буду использовать. Они представляют собой гелевые голубые гелевые бусины. Они мягкие.Поэтому мне нужно использовать стеклянную пипетку в виде пула на конце пипетки, чтобы поместить эти бусины на крестики.Второй тип бусин, который я продемонстрирую, - это гепариновые акриловые бусины. Это жесткий тип бусин, и я буду размещать эти бусины на X эксплантах с помощью вольфрамовой иглы. Итак, это стеклянные капиллярные трубки, которые я сначала расплавлю с помощью горелки Бунзена.Затем я потяну за них, чтобы получить более тонкий кончик. Поэтому я держу капиллярную трубку в центре пламени и сворачиваю ее, пока трубка плавится. Я чувствую, как он становится мягким.Я выниму его из пламени, а затем вытащу. Я собираюсь вытравить линию поперек капиллярной трубки этой ручкой с алмазным наконечником, чтобы у меня был красивый прямой срез. Затем я отполирую концы пламенем, чтобы очистить их.Я собираюсь пропустить капилляр через пламя, чтобы отполировать конец и сделать отверстие меньше, чтобы он мог захватывать бусину, а не бусину, проходящую через капилляр. Важно отметить, что вы не хотите держать капиллярную трубку в пламени слишком долго. На самом деле это очень быстрый проход, иначе он запечатается.Обычно я делаю несколько таких изделий, потому что многие из них получаются там, где кончик запечатывается пламенем. Это трудно контролировать, поэтому вы просто делаете несколько. Это пример случая, когда наконечник был запечатан.Это пример хорошей пипетки. Я ввел 250 микролитров агелевых шариков в эту эйнорскую трубку и собираюсь промыть их пять раз одним миллилитром PBS, чтобы удалить ази-раствор, в котором они впитывались. Я жду около трех минут, пока бусины осядут, а затем отсасываю избыток PBS и повторяю это еще четыре раза.Бусины еще не совсем осели, поэтому бусины осели, и я собираюсь откачать избыток PBS и повторить это четыре раза. И в конце я добавлю 300 микролитров PBS и начну работать с бусинами. Это стандартная ротовая пипетка, и я просто возьму капилляр, который я вытянул, и протолкну его туда примерно на треть пути вверх.Сначала заполните пипетки PBS. Обычно он наполняется только за счет капиллярного действия. Итак, это крышка от 30-миллиметровой формы для культуры, и я положила каплю бусин синего цвета.А рядом с ним находится маленькая капелька PBS. А в этой посуде здесь находится пять микролитров капель белкового раствора. В этом случае это четыре витамина B и P, но вы можете использовать выбранный белок с помощью ротовой пипетки.Я собираюсь перенести бусину из этого синего круга сюда, промыть ее один раз в капле PBS. Затем я возьму бусину с пипеткой для рта и поместим ее в каплю белкового раствора и буду инкубировать ее либо при комнатной температуре около часа, либо при четырех градусах в течение нескольких часов. Итак, вы видите пул бусин в PBS, и мне нужно выбрать бусины нужного размера.Если они слишком малы, они просто пройдут через пипетку во рту. Они должны просто сидеть в конце. Итак, теперь вы видите, что я выбрала там несколько бусин, три большие бусины и три бусины поменьше.В эксперименте я буду использовать бусины большего размера. Теперь я собираюсь перенести большую бусину из капли PBS на каплю белкового раствора. И чтобы сделать это, я собираюсь осторожно оттянуть язык от пипетки для рта.Это не сосательное движение, а просто нанесение отрицательного давления. А затем я собираюсь перенести его, а затем снова поместить язык над ртом. Трубная головка, не обдувая, а просто добавляя положительное давление, чтобы оттолкнуть бит от конца.Теперь у меня есть пять шариков в капле белкового раствора, и я буду инкубировать их при температуре при четырех градусах в течение нескольких часов или при комнатной температуре от получаса до часа. Итак, это чашка для культуры, которая содержит мембрану, плавающую в среде вместе с баклажанами, которые я уже препарировал. Я возьму кончик своей пипетки и втяну немного медиа.Я собираюсь промыть бусины в капле фильтрующего материала всего один раз непосредственно перед тем, как поместить бусину на X-образ. Это вольфрамовые иглы, которые я буду использовать для взятия и размещения акриловых бусин. Это вольфрамовая игла, и теперь она в держателе.А это несколько тонких щипцов. под углом 45 градусов. Я собираюсь использовать свою вольфрамовую иглу в щипцах, чтобы поднять бусину из этой лужи PBS и перенести бусину в каплю белкового раствора.Как я поступила с бусинами agel. Как и в случае с бусинами agel, я пять раз прополоскала эти акриловые бусины в PBS и перенесла каплю на эту пластину. Затем я собираюсь использовать вольфрамовую иглу в щипцах, чтобы перенести шарик в каплю белка и инкубировать так же, как я делал это с гелевыми шариками.Так что это подъем бусины. Я крепко держу правую руку на столе и использую указательный палец левой руки, чтобы стабилизировать иглу, когда опускаюсь в жидкость, слегка касаюсь иглой бусины и медленно поднимаю ее из жидкости. Иногда она отпадает от иглы, так что просто вернитесь за другой.Теперь в левой руке у меня щипцы под углом 45 градусов. Опустив кончики, я прикасаюсь бусиной и иглой к жидкости и использую. Используйте кончик щипцов, чтобы аккуратно отжать его.Так что теперь у меня есть Five beads in protein. Итак, в правой руке у меня вольфрамовая игла в бусине, а в левой руке снова щипцы острием вниз так же, как я отталкиваю их от четырех. Инкубируют при 37 градусах, а время зависит от конкретного анализа.

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

University of California, Irvine (UCI).  Это видео демонстрирует два способа приготовления и укладки бусы, которые были покрыты фактора роста, на эксплантатов развивающихся коры головного мозга. Эти шарики могут быть использованы, чтобы вызвать пространственно ограниченных экспрессии генов на раз...

Фактор Роста покрытием из бисера Размещение на Спинной эксплантов переднего мозга

In This Article

Summary

Disclosures

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles