Генетические исследования у дрожжей могут быть использованы для исследования молекулярных и клеточных функций генов человека в клеточный метаболизм ДНК. Описаны методы генетической характеристике человека WRN Продукт гена дефекты преждевременного старения расстройства синдром Вернера в функционально сохраняется пути использования дрожжей, как послушный модели системы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Генетические исследования белков человека Ремонт ДНК Использование дрожжей в качестве модельной системы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Понимание роли человеческих белков репарации ДНК в генетических путей является сложной задачей для многих исследователей. Генетические исследования млекопитающих системы были ограничены из-за отсутствия доступных инструментов, включая генетический мутант определены клеточных линий, систем регулирования выражения, а также соответствующие выбор маркеров. Чтобы обойти эти трудности, модель генетических систем в низших эукариот стали привлекательным выбором для изучения функционально сохраняется репарации ДНК белков и путей. Мы разработали модель системы дрожжей учиться плохо определенными генетическими функциями синдром Вернера геликазы-нуклеазы (
Протокол
1. Штаммов дрожжей
Штаммы с диким типом SGS1 TOP3 (WT; W303-1A, генотип, ВСУ ade2-1 CANL-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRPL-л URA3-1) [2], sgs1 мутант (W1292-3C ; генотип MAT SUP4-о:: URA3 sgs1-25 ade2-1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRP1-1 URA3-1 rad5-535) и sgs1 топ3 мутант (W1058-11C, генотип, ВСУ SUP4-о:: URA3 sgs1-25 топ3-2:: HIS3 ade2-1 can1-100 his3-11, 15 leu2-3, 112 TRP1-1 URA3-1 rad5-535) были охарактеризованы [3] и были любезно предоставлены д-р Родни Ротштейн (Колумбийский университет).
2. Плазмиды конструкций ДНК ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Одной из сильных сторон использования дрожжей в качестве модельной системы является наличие мутантов в определенных репликации ДНК и ремонт путей, которые сохраняются между дрожжей и людей. Дальнейший отбор трансформантов укрывательство определенных генов просто и надежно, как лабораторных штаммов являются ауксотрофных мутантов и векторы с ауксотрофных маркеров легко доступны. С помощью этих векторов экспрессии гена продуктов можно регулировать, размещая их под контролем индуцируемого промотора (например, галлон индуциб.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была поддержана в полном объеме Внутренние программы исследований NIH, Национальный институт по проблемам старения. Мы благодарим д-р Родни Ротштейн (Колумбийский университет) для штаммов дрожжей и доктор Брэд Джонсон (Университет Пенсильвании, Школа медицины, Филадельфия, штат Пенсильвания) для выражения SGS1 плазмиды.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Ссылки
- Aggarwal, M., Brosh, R. M. Jr WRN helicase defective in the premature aging disorder Werner Syndrome genetically interacts with Topoisomerase 3 and restores the top3 slow growth phenotype of sgs1 top3. Aging. 1, 219-233 (2009).
- Gangloff, S., McDonald, J. P., Bendixen, C., Arthur, L., Rothstein, R.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
