Method Article

Пресинаптически Тихая Синапсы Учился с световой микроскопии

DOI:

10.3791/1676

January 4th, 2010

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Глутаматергической синапсов может переключаться с активного режима в режим без звука. Мы показываем, что пресинаптические статус активности в культуре диссоциированных нейронов грызунов визуализируется использованием поправимо форме FM1-43 красителя для визуализации активных синапсов и иммуноокрашивания с vGluT-1 антител визуализировать все глутамата синапсов.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Синаптической пластичности вероятно, лежит в основе способности нервной системы, чтобы узнать и запомнить, а также может представлять приспособляемости, который предотвращает повреждения в противном случае оскорбления стать нейротоксическое. Мы изучали форму пресинаптической пластичности что интересно отчасти потому, что выражается в виде цифровых включение и выключение способности пресинаптических терминал с выпустить пузырьки содержащей нейромедиатора глутамата. Здесь показано, протокол для визуализации статуса активности пресинаптических терминалах в диссоциированных культурах клеток получают из грызунов гиппокампе. Метод основан на выявлении активных синапсов использованием окрашивания поправимо форме стирил красителя FM1-43, который обычно используется для обозначения синаптических пузырьков. Это окрашивание профиля по сравнению с иммунной одного и того же терминалы с антителами, направленными против везикулярного транспортера глутамата 1 (vGluT-1), пятна, направленных на этикетке все глутамата синапсов, независимо от состояния активации. Мы считаем, что деполяризующего раздражители вызывают пресинаптических глушителей. Население синапсов, в котором отсутствуют в исходных условий могут быть активированы длительной электрической заставить замолчать или путем активации цАМФ сигнальных путей.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Культура подготовки

  1. Подготовка диссоциированных культурах клеток крысы или мыши гиппокампа клетки от послеродовой день от 0 до 3 животных 1. Наши нейроны придерживаться основных астроцитов монослоя, который в свою очередь придерживается коллагена слой распространяется на номер 0 толщина покровного. Пластина нейронов при плотности около 500 клеток на квадратный сантиметр.
  2. Разрешить культур расти в течение 10-14 дней, чтобы синаптических развития и созревания. Лечить культур в день в пробирке 4 с антимитотическим AraC на прекращение дальнейшего роста глиальных. Накормите их на день в пробирке из 5 с половиной обмена среде с Neurobasal ср....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Значение

  1. Обычно синапсов, как считается, работают, выпуская передатчик с измеримые вероятности. Работа по себе и другим, делает очевидным тот факт, что некоторые синапсы к выпуску огнеупорных нейромедиатор, несмотря на полный комплект везикулярного транспортера нейротрансмиттера и других ключевых пресинаптических маркеров 2, 6-8. Ранее нами было показано, что базальная сетевой активности в нейронах, имеет решающее значение для поддержания этой группы населения неактивных синапсов.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами NIH DA018109 и MH78823 и NIH Neuroscience Blueprint Основные Грант P30NS057105 в Вашингтонском университете.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
FM1-43FXInvitrogenF-35355FM4-64FX с красным смещением также доступен, но он не поддается анализу пресинаптического сайленсинга.
Advasep-7CyDexAR-0A7-001
vGluT-1EMD MilliporeAB5905
Alexa 647-конъюгированный анти-GPInvitrogenA-21450
Fluoromount-GSouthernBiotech0100-01

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mennerick, S., Que, J., Benz, A., Zorumski, C. F. Passive and synaptic properties of hippocampal neurons grown in microcultures and in mass cultures. J. Neurophysiol. 73, 320-332 (1995).
  2. Moulder, K. L., Jiang, X., Taylor, A. A., Olney, J. W., Mennerick, S.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Presynaptic TerminalsSilent SynapsesFM1 43 FX DyevGluT 1 AntibodyConfocal MicroscopyHippocampal NeuronsSynaptic Vesicle LabelingImmunostaining ProtocolElectrical DepolarizationcAMP Signaling

Related Articles