В этом видео мы продемонстрируем процедуру активации CD40 и расширение мышиных клеток из спленоцитов C57BL / 6 мышей, которые могут быть использованы в качестве модели антиген-представляющих клетки (АПК) для изучения индукции иммунитета.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Мышиной модели CD40-активации В-клеток
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Исследование клеток показало, что CD40 активации улучшает их презентации антигена мощности. При стимуляции с интерлейкина-4 и CD40 лиганда (CD40L), человеческих клеток может быть расширена без трудностей из небольшого количества периферической крови в течение 14 дней до очень большого количества высоко-чистые CD40-лимфоцитов (> 10
Протокол
Протокол поколение мышиных CD40-активированных В-клеток (mCD40B) из спленоцитов делится на две части: часть демонстрирует подготовку мышиной CD40 лиганда (CD40L), выражающая HeLa клетки (tmuCD40L HeLa), который будет использоваться в качестве пластинчатых связаны фидерных клеток. Часть В описывает фактические мышиной CD40-B культуры.
А. Подготовка фидерных клеток (tmuCD40L HeLa)
TmuCD40L HeLa является сторонником человеческих эпителиальных клеточных линий, которые никогда не должны стать полностью вырожденная. Клетки, таким образом, разделил два раза в неделю. Культивирование в течение более 6 недель не рекоменд....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Модификации данного протокола возможны, особенно в отношении происхождения CD40-стимул и тип мыши напряжение используется, также уступая в эффективной генерации мышиной CD40-активированных В-клеток. Ахмади соавт. показали аналогичные результаты для мышиных фибробластов, трансфицированных мышиной CD40-лиганд. В этом контексте презентации ксено-антиген может быть исключен с уверенностью, но интенсивные исследования в области безопасности и токсичности в естественных условиях не подавали признаков воспаления или а.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Эксперименты проводились в соответствии с национальными и европейскими рекомендации по поддержанию лабораторных животных. Что касается немецкого закона защиты животных животные находились под контролем регулярно соответствующие органы.
Благодарности
Мы любезно благодарит д-р Клеменс Wendtner за предоставление tmuCD40-лиганд-клеточной линии HeLa.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
А. Подготовка носителя:
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Устройство подачи ячейки диких среднего типа | Устройство подачи клеточной селекции средой | ||
| Реагент | Концентрация | Реагент | Концентрация |
| RPMI 1640 | RPMI 1640 | ||
| L-глютамин | 300 мкг / мл | L-глютамин | 300 мкг / мл |
| FBS | 10% | FBS | 10% |
| HEPES | 10 мМ | HEPES | 10 мМ |
| Гентамицин | 15 мкг / мл | Гентамицин | 15 мкг / мл |
| Гигромицину B | 0,2 мг / мл |
| mCD40-B промыванием | mCD40-B культуральной среде | ||
|---|---|---|---|
| Реагент | Концентрация | Реагент | Концентрация |
| D-MEM | D-MEM | ||
| L-глютамин | 580 мкг / мл | L-глютамин | 580 мкг / мл |
| Глюкоза | 4,5 мг / мл | Глюкоза | 4,5 мг / мл |
| HEPES | 10 мМ | HEPES | 10 мМ |
| Гентамицин | 15 мкг / мл | Гентамицин | 15 мкг / мл |
| MEM | 0,1 мм (1x) | ||
| FBS | 10% |
Б. Разное Реагенты:
| Реагент | Компания | Приказ № |
| RPMI 1640 | Invitrogen Gibco | REF 21875 |
| D-MEM | Invitrogen Gibco | REF 41965 |
| Dulbeccos PBS (10x) | ПАА | Cat Нет H15-011 |
| Gencin | Дельта Выберите | Нет искусства 7395800 |
| FBS | Lonza | Кошка не DE14-802C |
| HEPES буфера | ПАА | Cat Нет S11-001 |
| MEM NEAA | Invitrogen Gibco | REF 11140 |
| Гигромицину B | ПАА | Cat Нет P02-015 |
| Рекомбинантный интерлейкин мышей-4 | Immunotools | Cat Нет 12340045 |
| Циклоспорин | Novartis | Кошка не NDC 0078-0109-01 |
| Трипсина / EDTA (10x) | Invitrogen Gibco | REF 15400-054 |
С. Различные системы:
| Реагент | Компания | Приказ № |
|---|---|---|
| Стерильные наконечники | Sarstedt | |
| 6-луночный планшет | Nunc | Cat Нет 140675 |
| 50 мл коническую трубку | BD Сокол ™ | Cat Нет 352070 |
| Колбу культуры ткани | Sarstedt | Кошка не 83.1813.002 |
Ссылки
- Schultze, J. L. CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy. J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).
- Wiesner, M.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
