Методическая статья

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH 50) Активность сыворотки

39.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/1923

⸱

29 марта 2010 г.

1School of Pharmacy and Medical Sciences, University of South Australia

В этой статье

Краткое содержание

Классический путь активируется антител и достигает высшей точки в целевую лизис клетки. CH 50 Анализ позволяет определить дополнять активность сыворотки. Это видео демонстрирует этапы определения CH 50 Из сыворотки, расчетов и интерпретация результатов.

Аннотация

Системы комплемента представляет собой группу белков, которые при активации приводит к лизису клетки-мишени и облегчает фагоцитоз через opsonisation. Отдельные компоненты дополнения могут быть количественно однако это не дает никакой информации о деятельности путем. CH

Протокол

Подготовка 5x веронал буферного раствора (VBS)

  1. Для подготовки веронал буферного раствора (VBS), три отдельных решения должны быть подготовлены.
  2. Подготовка раствора 1, растворяя 21.25gm из NaCl и 0.94gm натрия Barbitone в 350 мл дистиллированной воды. Конечные концентрации NaCl и натрия Barbitone являются 1.02M и 13 мм соответственно.
  3. Подготовка раствора 2, растворяя 1.44gm из Barbitone в 125 мл горячей дистиллированной воды. Конечная концентрация Barbitone является 62.5mM.
  4. Подготовка раствора 3, растворяя 20.33gm из MgCl 2 и 4.41gm из CaCl 2 в 100 мл дистиллированной воды. Конечной концентрации MgCl ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

CH 50 анализа подлежит много помех. Некоторые ЭБ более хрупки, чем другие, в результате спонтанного гемолиза, что не имеет отношения к дополнять деятельность. Сродство антител кролика варьируется от партии к партии и от одного производителя к другому, это влияет на количество антител, которые связываются с ЭБ. Кроме того, процесс информирования ЭБ с антителами приводит к клеткам с разным количеством антител покрытие ЭБ. Сбор и хранение образцов являются важным потенциальным источником ошибок. Компонентов комп.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Благодарности

Автор хотел бы поблагодарить мисс Лора Мэтьюз для выполнения техники и г-н Пол Пастырь для кинематографа. Этот проект был профинансирован из Университета Южной Австралии, Лабораторная медицина программы.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Эритроциты овцыCSL2490201Использовать в конечной концентрации 1%
СывороткаСыворотка крови человека
Неконъюгированная кроличья антисыворотка к эритроцитам овцы (гемолитическая)AbD SerotecC12HSB
96-луночный планшет с плоским дномSarstedt Ltd83.1839
Верональный буферный физрастворИспользовать в конечной концентрации 1x
Водяная баня
Планшетный ридер
Помещение/инкубатор при 37°C

Ссылки

  1. Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. Immunology. , W.H. Freeman. (2003).
....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

CH50540

Похожие статьи