$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Этот протокол представляет собой выдержку из Possik and Pause, Измерение устойчивости Caenorhabditis elegans к окислительному стрессу в 96-луночных микротитровальных планшетах, J. Vis. Exp.(2015).
1. Проведение анализа устойчивости к окислительному стрессу
- Пипеткой 40 мкл раствора PQ 100 мМ (приготовленного в свежем виде) в каждую лунку планшета на 96 лунок. Используйте не менее 12 лунок в качестве реплик каждого состояния (лечения, мутанта и т. д.). С помощью кирки из платиновой проволоки перенесите 5-8 личинок L4 животных в каждую лунку, указав время начала и окончания.
- При запуске другого условия обратите внимание на время начала и время окончания. Поместите планшет при температуре 20 °C во время инкубации между переносом червей и забивкой мертвых животных через час с момента начала.
- Используя препарирующий микроскоп, подсчитывайте выживаемость каждый час. Осторожно встряхивайте пластину, прежде чем начать считать. Указывайте на червей, которые не двигаются даже после обнаружения света высокой интенсивности, как на мертвых животных. Также укажите количество живых животных.
ПРИМЕЧАНИЕ: Изучение формы червя, хвостов и движения головы при большом увеличении помогает отличить мертвых червей от живых.
- Повторяйте этот шаг каждый час, пока большинство червей не умрут.
2. Определение процента выживаемости в каждый момент времени
- Рассчитайте общее количество животных по условию, сложив общее количество животных, переведенных в каждую скважину. Игнорируйте животных, которые повреждены или убиты при транспортировке.
- Для каждого момента времени вычислите общее количество мертвых животных в одном условии (сумма мертвых животных в 12 колодцах). Для каждой временной точки рассчитайте процент смертности (количество погибших животных, деленное на общее количество животных и умноженное на 100) и процент выживаемости (100 минус процент смерти).
- Повторите этот анализ не менее 3 независимых раз.