Методическая статья

Подготовка ткани мозга мыши для иммуноэлектронной микроскопии

DOI:

10.3791/2021

20 июля 2010 г.

В этой статье

Краткое содержание

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы опишем протокол для transcardiac перфузии мышей, удаление и срезов мозга, а также иммунопероксидазного окрашивание, смолы вложения, и ультратонких срезов мозга разделов. После завершения этих процедур, immunostained материал будет готов для рассмотрения с просвечивающей электронной микроскопии.

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) является чрезвычайно полезным для визуализации микроглии, oligodendrocytic, астроцитов и нейронов субклеточных купе (дендрита, дендритных позвоночника, аксона, аксон терминал, perikaryon), а также их внутриклеточных органелл и цитоскелета, в центральной нервной системе при высоким пространственным разрешением. В сочетании с ТЕМ, предварительно вложение иммуноцитохимии позволяет дискриминации клеточных элементов с несколькими отличительными чертами и определение критериев (например, микроглии perikarya и процессов, при использовании антител против микроглии-специфическим маркером Iba1 (ионизированного кальция связывающей молекулы адаптер 1, представленный здесь)), определение нейротрансмиттеров содержание клеточных элементов (например, серотонинергические) и их ультраструктурным локализации растворимых или мембраной белков (например, 5 HT1A и EphA4 рецепторы). Здесь мы опишем протокол для transcardiac перфузии мышей с фиксатором акролеин, удаление и срезов мозга, а также иммунопероксидазного-диаминобензидина (DAB) окрашивание, смолы вложения, и ультратонких срезов мозга разделов. После завершения этих процедур, immunostained материал будет готов для рассмотрения с ТЕА. Когда строго выполняется, этот метод обеспечивает отличный компромисс между оптимальными ультраструктурным сохранение и иммуноцитохимического обнаружения.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Животное перфузии

  1. За день до перфузии, подготовить:
    - 2 л фосфатном буфере (PB, 100 мМ, рН 7,4) и 1 л натрия фосфат-солевом буфере (PBS, 0,9% NaCl в 50 мМ PB, рН 7,4) в бидистиллированной воде. Магазин PBS и 1л ПБ при 4 ° C. Они будут использоваться для перфузии и предварительно вложение иммуноцитохимия.
    - 1л на 4,0% параформальдегида (PFA, рН 7,4), фиксирующие решение, которое позволит перфузии 6 мышей. Для этого нагреть 1 л PB под вытяжкой. Взвесьте 40 г гранулированного параформальдегида (PFA) и вылить в решение ПБ, когда она достигает 60 ° C. Когда раствор не станет прозрачным, с PFA полного растворения, охладить до комнатной температу....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы описали протокол для подготовки ткани мозга мыши для иммуноэлектронной микроскопии, которая обеспечивает отличный компромисс между оптимальными ультраструктурным сохранение и иммуноцитохимического обнаружения, когда процедуры строго выполняется.

В сочетании с ТЕМ, этот метод позволяет различать клеточные элементы с несколькими отличительными чертами и определение критериев. В частности, иммунопероксидазного-DAB окрашивание Iba1 позволяет выявить микроглии perikarya и процессов, в ра.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы благодарим Шао-Минг Лу Харрис и А. Гелбард для использования перистальтического насоса и vibratome, а также Карен Л. Бентли и Гейл Шнайдер в электронный микроскоп исследований Основные фонда из Университета Рочестера медицинский центр для оказания технической помощи. Эта работа финансировалась за счет грантов от NIH (EY019277), Уайтхолл Фонда Burroughs Wellcome фонд и Фонд Альфреда П. Слоуна в АКМ. M.-È.T. финансируется за счет Fonds-де-ла изысканная ан santé Квебека (FRSQ) докторской награды обучения.

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

* Нужно всегда работать под вытяжкой и носить нитрила перчатки при работе акролеин, параформальдегида, и осмий, а также должны распоряжаться своими отходами надлежащим образом.

Ссылки

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Venable, J. H., Coggeshall, R. A simplified lead citrate stain for use in electron microscopy. J Cell Biol. 25, 407-407 (1965).
  2. Riad, M. Somatodendritic localization of 5-HT1A and preterminal axonal localization of 5-HT1B serotonin ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

DABIba1

Похожие статьи